白木香树干木块对小鼠经口给药急性毒性实验观察
李春林
摘要：目的 按中华人民共和国卫生部《保健食品检验与评价技术规范》规定的方法研究白木香树干木块茶对小鼠单次经口给药可能产生的的毒性反应，评价其安全性。方法 将白木香树干木块提取物于24 h内两次经口灌胃给予昆明种小鼠2.15 g/kg·BW、4.64 g/kg·BW、10 g/kg·BW、21.5 g/kg·BW剂量，并加入空白对照组，对小鼠的生存状态进行观察和记录14天。结果 在14 d天试验期间，小鼠没有出现任何明显的中毒迹象，更无死亡。结论 结果表明对昆明种小鼠的经口急性毒性剂量大于21.5 g/kg·BW，大于人体摄入量的100倍，可判断白木香树干木块为无毒性食品。
关键词：白木香树干木块茶;经口急性毒性;小鼠;霍恩氏法
中图分类号：R965.3 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2018）08-0068-03
Observation on Acute Toxicity Experiment of Oral Administration
of Trunk Brick of Aquilaria Sinensis to Mice
LI Chun-lin
（Peoples Hospital of Maoming City，Maoming 525000，China）
【Abstract】Objective：To study the toxicity of oral administration of trunk brick of Aquilaria sinensis to mice by single oral administration according to the method specified in the Technical Specifications for Health Food Inspection and Evaluation of the Ministry of Health of the Peoples Republic of China，and evaluate its safety.Methods：Kunming mice were given 2.15 g/kg·BW，4.64 g/kg·BW，10 g/kg·BW and 21.5 g/kg·BW of the extract from trunk brick of Aquilaria sinensis by oral gavage twice within 24 h.The dose of 21.5 g/kg·BW was added to the blank control group，and the survival state of the mice was observed and recorded for 14 days.Results：During the 14-day test period，the mice showed no signs of any signs of poisoning and none died.Conclusion：The results show that the acute toxicity oral dose of Kunming mice is more than 21.5 g/kg·BW，which is greater than 100 times of human intake.It can be judged that the trunk brick of Aquilaria sinensis is a non-toxic food.
【Key words】trunk brick of Aquilaria sinensis，oral acute toxicity，mice，Horns method
沉香是中医常用药之一，历版《中国药典》均有记载，来源于瑞香科植物沉香Aquilaria agallocha Roxb.和白木香Aquilaria sinensis（Lour.）Gilg含树脂的木材。自2005年版《中国药典》开始，沉香的来源只收载白木香一种[1]。沉香味辛、苦，性微温，具有行气止痛、温中止呕、纳气平喘的功效，用于治疗胸腹胀闷疼痛、胃寒呕吐呃逆、肾虚气逆喘急[2]。研究发现，白木香树干木块的化学成分中含有丰富的黄酮类化合物，其中以芫花素和洋芹素-7，4-'二甲醚为主要成分，具有良好的清除羟自由基活性和好的清除超氧阴离子和清除过氧化氢活性，在抗氧化等方面具有良好前景[3]。而现在市场上越来越多的白木香茶出现，其中最受青睐的就是沉香叶和白木香树干木块制成的，而白木香树干木块制成的沉香茶更为昂贵，显得更为高端而广受欢迎，但对于沉香茎木的毒理学安全性评价方面的研究还很少，国内未见报道。因此，本研究对白木香树干木块进行急性毒性检测[4]，为白木香树干木块的进一步开发利用提供实验依据。
1 材料
样品白木香树干木块（茂名市君元沉香种植有限公司提供），5 g/袋推薦用量为每日1至3袋，约为每日83 mg/kg·BW至250 mg/kg·BW
2 方法
2.1 受试物提取 取白木香叶树干木块粉碎为粗粉，100 ℃蒸馏水1000 mL煮10 min后浸泡60 min，用双层纱布过滤5次，将过滤液合并，然后在80 ℃恒温水浴箱中浓缩至100 mL。得到1 g/1mL的浓缩液。
2.2 实验动物 昆明种健康小鼠，由广东省医学实验动物中心提供;
2.3 小鼠经口急性毒性试验
2.3.1 预试验 先取白木香树干木块茶常见推荐每日用量250 mg/kg的4倍1000 mg/kg·BW作预实验观察经口急性毒性。取10只昆明种小鼠，雌雄各半。小鼠隔夜禁食8 h后，于24 h内按动物每100 g，体重2 mL体积经口灌胃2次，间隔4 h，总灌胃剂量为1000 mg/kg·BW，第2次灌胃4 h后开始投放饲料和饮水，观察14 d。观察期内小鼠无一死亡，期间小鼠活动正常、无震颤流涎、大小便失禁、躁动等异常反应，毛发干净、齐整有光泽，体重保持正常增长。预实验无法得到LD50数据，并且可判断：经口途径时，白木香树干木块茶常见推荐用量250 mg/kg·BW的4倍推荐用量1000 mg/kg·BW对小鼠并无急性毒性作用。
2.3.2 正式实验 采用霍恩氏法进行实验。选取昆明种小鼠共40只随机分为四组，雌雄各半（18.0～22.0 g），实验前禁食16 h，禁饮水。然后按2.15 g/kg·BW、4.64 g/kg·BW、10 g/kg·BW、21.5 g/kg·BW剂量经口给予受试物，灌胃2次，间隔4 h，每次灌胃容量为2 mL/100 g·BW，试物浓度为1 g/mL，第二次灌胃4 h后开始投放饲料和饮水。另取昆明种小鼠10只，雌雄各半（18.0～22.0 g）作为对照组，操作方法同上灌以蒸馏水。观察时间14 d，观察死亡情况、体重情况及是否有活动不能、震颤流涎、大小便失禁、躁动、厌食等异常反应，并作记录。
2.3.3 实验数据的分析与处理 试验结果均采用SPSS软件包进行统计处理。采用SPSS做方差分析，数据采用（x±s）表示，组间对比运用方差分析t检验，得到P<0.05，可知差异有统计学意义。
3 结果
3.1 死亡情况 实验期间小鼠死亡数为0，见表1。
表1 白木香树干木块茶对小鼠的经口急性毒性试验死亡情况
3.2 小鼠行为情况 期间小鼠并未出现断尾、举尾、声音异常、身体震颤、觅食、进水、排便异常等生理现象，未见腹泻、便秘、眼屎分泌、流血、流泪、流鼻涕、呼吸困难和毛色糙乱等异常小鼠活动正常灵活、目光有神、无震颤流涎、大小便失禁、躁动等异常反应，毛发干净、齐整有光泽，饮水进食无异，无明显中毒迹象。见表2。
表2 白木香树干木块茶对小鼠的经口急性毒性试验异常情况
3.3 体重情况 体重保持正常增长。见表3。
表3 白木香树干木块对小鼠的经口急性毒性试验小鼠体重变化情况
3.4 剖检分析 受试小鼠和空白对照组的小鼠各项观察指标未见明显的毒性反应，亦未能有相应的生理组织、和脏器的病变。解剖小鼠观察，胃形状、大小正常，胃黏膜无出血点、坏死等，胃内容物性状正常，心脏、肝脏、脾脏、肠胃、肺、肾脏等主要器官外观颜色、形状、大小比例、表面黏膜附着情况都显示正常，没有发现坏死、组织结构肿瘤、结缔组织结节、肥大增生等病理病变。
4 讨论
14 d的实验观察期间，没有发现小鼠有任何的中毒症状，更无一死亡，结果表明白木香树干木块茶对昆明种小鼠的经口急性毒性剂量大于21.5 g/kg·BW。根据中华人民共和国卫生部《保健食品检验与评价技术规范》中急性毒性的分级标准，白木香树干木块茶属无毒物质。
因为沉香的药材形成周期很长，故而古今都是一味稀有名贵中药材。传统中医中药只用沉香有黑色树脂的木质部来人药，却没有有效地利用沉香树的其他部分如树干、叶、根等资源。现代科学研究表明，白木香包含多种具有抗炎镇痛等生理活性的化学成分，如：多糖、氨基酸、苷类黄酮、酚类黄酮及三萜类黄酮[5];具有镇静、抗菌、抗肿瘤、神经保护等作用[6]且产量巨大，开发前景非常广阔。但对于其毒理学安全性评价方面的研究还很少，国内未见报道。本研究对其经口急性毒性进行探讨，得出其在21.5/kg体重以内无经口急性毒性，望能为进一步的开发利用提供帮助。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2005：128-129.
[2]梅全喜.現代中药药理与临床应用手册[M].北京：中国中医药出版社，2009：404-405.
[3]彭可，梅文莉，吴娇，等.白木香树干中的黄酮类成分[J].热带亚热带植物学报，2010，18（1）：97-100.
[4]中华人民共和国卫生部.食品安全性毒理学评价程序和方法GB15193.1～15193[S].21-2003.
[5]李薇，梅文莉，王昊，等.白木香树干的化学成分研究[J].中国中药杂志，2013，38（17）：2826-2831.
[6]李红念，梅全喜，林焕泽，等.沉香的化学成分、药理作用和临床应用研究进展[J].中国药房，2011（35）：3349-3351.
（收稿日期：2018-04-19）
摘要：目的 按中华人民共和国卫生部《保健食品检验与评价技术规范》规定的方法研究白木香树干木块茶对小鼠单次经口给药可能产生的的毒性反应，评价其安全性。方法 将白木香树干木块提取物于24 h内两次经口灌胃给予昆明种小鼠2.15 g/kg·BW、4.64 g/kg·BW、10 g/kg·BW、21.5 g/kg·BW剂量，并加入空白对照组，对小鼠的生存状态进行观察和记录14天。结果 在14 d天试验期间，小鼠没有出现任何明显的中毒迹象，更无死亡。结论 结果表明对昆明种小鼠的经口急性毒性剂量大于21.5 g/kg·BW，大于人体摄入量的100倍，可判断白木香树干木块为无毒性食品。
关键词：白木香树干木块茶;经口急性毒性;小鼠;霍恩氏法
中图分类号：R965.3 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2018）08-0068-03
Observation on Acute Toxicity Experiment of Oral Administration
of Trunk Brick of Aquilaria Sinensis to Mice
LI Chun-lin
（Peoples Hospital of Maoming City，Maoming 525000，China）
【Abstract】Objective：To study the toxicity of oral administration of trunk brick of Aquilaria sinensis to mice by single oral administration according to the method specified in the Technical Specifications for Health Food Inspection and Evaluation of the Ministry of Health of the Peoples Republic of China，and evaluate its safety.Methods：Kunming mice were given 2.15 g/kg·BW，4.64 g/kg·BW，10 g/kg·BW and 21.5 g/kg·BW of the extract from trunk brick of Aquilaria sinensis by oral gavage twice within 24 h.The dose of 21.5 g/kg·BW was added to the blank control group，and the survival state of the mice was observed and recorded for 14 days.Results：During the 14-day test period，the mice showed no signs of any signs of poisoning and none died.Conclusion：The results show that the acute toxicity oral dose of Kunming mice is more than 21.5 g/kg·BW，which is greater than 100 times of human intake.It can be judged that the trunk brick of Aquilaria sinensis is a non-toxic food.
【Key words】trunk brick of Aquilaria sinensis，oral acute toxicity，mice，Horns method
沉香是中医常用药之一，历版《中国药典》均有记载，来源于瑞香科植物沉香Aquilaria agallocha Roxb.和白木香Aquilaria sinensis（Lour.）Gilg含树脂的木材。自2005年版《中国药典》开始，沉香的来源只收载白木香一种[1]。沉香味辛、苦，性微温，具有行气止痛、温中止呕、纳气平喘的功效，用于治疗胸腹胀闷疼痛、胃寒呕吐呃逆、肾虚气逆喘急[2]。研究发现，白木香树干木块的化学成分中含有丰富的黄酮类化合物，其中以芫花素和洋芹素-7，4-'二甲醚为主要成分，具有良好的清除羟自由基活性和好的清除超氧阴离子和清除过氧化氢活性，在抗氧化等方面具有良好前景[3]。而现在市场上越来越多的白木香茶出现，其中最受青睐的就是沉香叶和白木香树干木块制成的，而白木香树干木块制成的沉香茶更为昂贵，显得更为高端而广受欢迎，但对于沉香茎木的毒理学安全性评价方面的研究还很少，国内未见报道。因此，本研究对白木香树干木块进行急性毒性检测[4]，为白木香树干木块的进一步开发利用提供实验依据。
1 材料
样品白木香树干木块（茂名市君元沉香种植有限公司提供），5 g/袋推薦用量为每日1至3袋，约为每日83 mg/kg·BW至250 mg/kg·BW
2 方法
2.1 受试物提取 取白木香叶树干木块粉碎为粗粉，100 ℃蒸馏水1000 mL煮10 min后浸泡60 min，用双层纱布过滤5次，将过滤液合并，然后在80 ℃恒温水浴箱中浓缩至100 mL。得到1 g/1mL的浓缩液。
2.2 实验动物 昆明种健康小鼠，由广东省医学实验动物中心提供;
2.3 小鼠经口急性毒性试验
2.3.1 预试验 先取白木香树干木块茶常见推荐每日用量250 mg/kg的4倍1000 mg/kg·BW作预实验观察经口急性毒性。取10只昆明种小鼠，雌雄各半。小鼠隔夜禁食8 h后，于24 h内按动物每100 g，体重2 mL体积经口灌胃2次，间隔4 h，总灌胃剂量为1000 mg/kg·BW，第2次灌胃4 h后开始投放饲料和饮水，观察14 d。观察期内小鼠无一死亡，期间小鼠活动正常、无震颤流涎、大小便失禁、躁动等异常反应，毛发干净、齐整有光泽，体重保持正常增长。预实验无法得到LD50数据，并且可判断：经口途径时，白木香树干木块茶常见推荐用量250 mg/kg·BW的4倍推荐用量1000 mg/kg·BW对小鼠并无急性毒性作用。
2.3.2 正式实验 采用霍恩氏法进行实验。选取昆明种小鼠共40只随机分为四组，雌雄各半（18.0～22.0 g），实验前禁食16 h，禁饮水。然后按2.15 g/kg·BW、4.64 g/kg·BW、10 g/kg·BW、21.5 g/kg·BW剂量经口给予受试物，灌胃2次，间隔4 h，每次灌胃容量为2 mL/100 g·BW，试物浓度为1 g/mL，第二次灌胃4 h后开始投放饲料和饮水。另取昆明种小鼠10只，雌雄各半（18.0～22.0 g）作为对照组，操作方法同上灌以蒸馏水。观察时间14 d，观察死亡情况、体重情况及是否有活动不能、震颤流涎、大小便失禁、躁动、厌食等异常反应，并作记录。
2.3.3 实验数据的分析与处理 试验结果均采用SPSS软件包进行统计处理。采用SPSS做方差分析，数据采用（x±s）表示，组间对比运用方差分析t检验，得到P<0.05，可知差异有统计学意义。
3 结果
3.1 死亡情况 实验期间小鼠死亡数为0，见表1。
表1 白木香树干木块茶对小鼠的经口急性毒性试验死亡情况
3.2 小鼠行为情况 期间小鼠并未出现断尾、举尾、声音异常、身体震颤、觅食、进水、排便异常等生理现象，未见腹泻、便秘、眼屎分泌、流血、流泪、流鼻涕、呼吸困难和毛色糙乱等异常小鼠活动正常灵活、目光有神、无震颤流涎、大小便失禁、躁动等异常反应，毛发干净、齐整有光泽，饮水进食无异，无明显中毒迹象。见表2。
表2 白木香树干木块茶对小鼠的经口急性毒性试验异常情况
3.3 体重情况 体重保持正常增长。见表3。
表3 白木香树干木块对小鼠的经口急性毒性试验小鼠体重变化情况
3.4 剖检分析 受试小鼠和空白对照组的小鼠各项观察指标未见明显的毒性反应，亦未能有相应的生理组织、和脏器的病变。解剖小鼠观察，胃形状、大小正常，胃黏膜无出血点、坏死等，胃内容物性状正常，心脏、肝脏、脾脏、肠胃、肺、肾脏等主要器官外观颜色、形状、大小比例、表面黏膜附着情况都显示正常，没有发现坏死、组织结构肿瘤、结缔组织结节、肥大增生等病理病变。
4 讨论
14 d的实验观察期间，没有发现小鼠有任何的中毒症状，更无一死亡，结果表明白木香树干木块茶对昆明种小鼠的经口急性毒性剂量大于21.5 g/kg·BW。根据中华人民共和国卫生部《保健食品检验与评价技术规范》中急性毒性的分级标准，白木香树干木块茶属无毒物质。
因为沉香的药材形成周期很长，故而古今都是一味稀有名贵中药材。传统中医中药只用沉香有黑色树脂的木质部来人药，却没有有效地利用沉香树的其他部分如树干、叶、根等资源。现代科学研究表明，白木香包含多种具有抗炎镇痛等生理活性的化学成分，如：多糖、氨基酸、苷类黄酮、酚类黄酮及三萜类黄酮[5];具有镇静、抗菌、抗肿瘤、神经保护等作用[6]且产量巨大，开发前景非常广阔。但对于其毒理学安全性评价方面的研究还很少，国内未见报道。本研究对其经口急性毒性进行探讨，得出其在21.5/kg体重以内无经口急性毒性，望能为进一步的开发利用提供帮助。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2005：128-129.
[2]梅全喜.現代中药药理与临床应用手册[M].北京：中国中医药出版社，2009：404-405.
[3]彭可，梅文莉，吴娇，等.白木香树干中的黄酮类成分[J].热带亚热带植物学报，2010，18（1）：97-100.
[4]中华人民共和国卫生部.食品安全性毒理学评价程序和方法GB15193.1～15193[S].21-2003.
[5]李薇，梅文莉，王昊，等.白木香树干的化学成分研究[J].中国中药杂志，2013，38（17）：2826-2831.
[6]李红念，梅全喜，林焕泽，等.沉香的化学成分、药理作用和临床应用研究进展[J].中国药房，2011（35）：3349-3351.
（收稿日期：2018-04-19）
