益气聪明汤加味对VD大鼠学习记忆能力的影响

    李王杏安 张献文 吉海杰 苏荣叶

    

    

    【摘要】目的 观察益气聪明汤加味对VD大鼠学习记忆能力的影响。方法 采用Pulsinelli四血管阻断法复制大鼠全脑缺血模型，设模型组，假手术组，益气聪明汤加味低、中、高（1 g/kg、2 g/kg和4 g/kg）剂量组，盐酸多奈哌齐阳性对照组（1.5 mg/kg），各组分别灌胃干预连续4周，Morris迷宫测试大鼠学习记忆能力。结果 手术后第21天进行Morris水迷宫试验，益气聪明汤加味不同给药组从第2次开始其逃避潜伏期与模型组比较呈现缩短趋势，尤其以高剂量治疗组逃避潜伏期减少明显，表明益气聪明汤加味具有改善模型大鼠空间学习能力作用。模型大鼠经灌胃给与益气聪明汤加味与多奈哌齐治疗4周后，各给药组定位航行训练逃避潜伏期与模型組比较有减少趋势，同时目标象限时间有增加趋势，其中以多奈哌齐组和高剂量组具有显著性差异。结沦 益气聪明汤加味可提升VD大鼠水迷宫实验学习记忆能力。

    【关键词】益气聪明汤;记忆能力;影响

    【中图分类号】R259 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-6681.2019.19..02

    血管性痴呆（VascularDementia，VD）是指由于脑血管疾病引起的缺血性脑组织缺氧和出血性脑损害所导致的以认知功能缺损为核心症状的获得性临床综合症，在临床的表现多为持续性和获得性的高级认知功能受到严重损伤[1]，是老年痴呆最常见类型之一[2]。中医学在疾病诊治中尤其注重整体调治，认为VD与脾胃虚损，肾阳不升有密切联系。本课题中，我们研究益气聪明汤对VD大鼠水迷宫成绩的改善，并

    探讨其神经保护作用的机制，为其临床应用提供实验参考。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    SPF 级雄性SD大鼠80只，体质量（180±20）g/只（北京华阜康生物科技股份有限公司生产，北京市实验动物许可证号SCXK（京）2014-004）。动物购回后饲养于山西省中医药研究院中心实验室动物房，室温（22±1）℃，相对湿度40%～60%，自由进食、进水。

    1.2 药物与试剂

    益气聪明汤加味颗粒，山西省中西医结合医院制剂室提供;盐酸多奈哌齐片（卫才（中国）药业有限公司，批号1611013）。

    1.3 仪器

    大鼠脑立体定位仪[深圳瑞沃德生命科技有限公司];单通道小动物气体麻醉机[R540，深圳瑞沃德生命科技有限公司];高频电刀[DGD-300B-2，北京贝林电子有限公司];Morris水迷宫[DMS-2，中国医学科学院药物研究所研制]。

    1.4 方法

    1.4.1 分组及全脑缺血模型制备

    实验动物随机分为模型组，对照组，益气聪明汤低、中、高剂量组和假手术组（n=10）。

    （1）模型组：采用Pulsinelli法四血管闭塞复制大鼠全脑缺血模型。

    （2）假手术组：大鼠除不凝闭椎动脉和夹闭颈总动脉外，其余操作与模型大鼠相同。

    1.4.2 给药

    术后5天开始给药。阳性对照组灌胃给予0.5 mg/kg多奈哌齐;益气聪明汤低、中、高剂量组分别灌胃给予1 g/kg、2 g/kg和4 g/kg益气聪明汤加味颗粒;假手术组和模型组大鼠均灌胃相同体积自来水，灌胃体积20 ml/kg。每日灌胃给药一次，连续4周。

    1.5 指标检测

    1.5.1 Morris水迷宫行为学测试

    参照Morris水迷宫实验方法[3]。

    （1）定位航行试验：从给药第三周末开始本实验，实验前1 h给药。每只大鼠每天训练1次，每次60 s，连续训练5天。选平台对面（第Ⅱ象限）为入池位置，将大鼠置于象限边缘1/2弧度处头朝池壁入水，经60 s未找到站台者，将其引领至平台，放置10 s，此时逃避潜伏期记为60 s。第2～5天重复如上操作，记录大鼠找到平台的时间（潜伏期）作为学习成绩，进行统计分析。

    （2）空间探索试验：定位航行试验结束后，将平台撤去，于相同位置将大鼠头朝池壁入水，自由游泳60 s。记录每只大鼠在Morris水迷宫测试中第一次到达平台的时间及60 s内穿越平台所在位置的次数，作为衡量其空间学习记忆能力的指标。同时计算60 s内总游泳距离。

    1.6 统计学方法

    结果以Means±SD表示，采用SPSS 18.0统计软件进行处理，水迷宫实验采用重复测量数据的双因素方差分析（two-way analysis of variance，ANOVA），其他数据比较采用单因素方差分析结合Dunnett-t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

    2 结 果

    手术后第21天进行Morris水迷宫定位航行试验，单只大鼠放入Morris水迷宫60 s让其寻找安全平台，记录其逃避潜伏期，每日1次，连续5天。假手术组大鼠随着训练次数的增加其逃避潜伏期逐渐缩短，由首次的（59.9±0.9）s减少到末次（16.3±6.8）s，并且所有大鼠均能找到安全平台;模型组大鼠逃避潜伏期亦随着训练次数的增加而逐渐缩短，但其在第2次逃避潜伏期与假手术组比较即明显延长，差异有统计学意义（P<0.05），末次逃避潜伏期假手术组比较，差异有统计学意义（P<0.01），表明全脑缺血可引起大鼠空间学习能力受损。益气聪明汤加味不同给药组从第2次开始其逃避潜伏期与模型组比较呈现缩短趋势，尤其以高剂量治疗组逃避潜伏期减少明显，表明益气聪明汤加味具有改善模型大鼠空间学习能力作用。见表1。

    大鼠连续进行5天定位航行训练后，第6天撤去安全平台进行空间探索试验。各组大鼠1 min探索总路程无统计学差异;假手术组大鼠首次穿越平台位置的潜伏期为（13.2±5.6）s，并且在目标象限探索累积时间为（25.1±5.3）s，而模型组大鼠分别为（31.8±11.2）s和（16.9±4.6）s，与假手术组比较，差异有统计学意义（P<0.05），表明全脑缺血可引起大鼠空间记忆能力受损。模型大鼠经灌胃给与益气聪明汤加味与多奈哌齐治疗4周后，各给药组逃避潜伏期

    与模型组比较有减少趋势，同时目标象限时间有增加趋势，其中以多奈哌齐组和高剂量组具有显著性差异。见表2。

    3 讨 论

    3.1 Morris水迷宫实验学习记忆能力

    Morris水迷宫是啮齿类动物神经认知模型研究中普遍公认的工具，同时也是评价神经递质、分子转导通路以及药物之间作用的手段之一。本实验在VD大鼠灌胃治疗干预后进行Morris水迷宫定位航行测试和空间探索实验测试，两者均为评估大鼠获取空间记忆能力的指标。本研究结果显示，VD大鼠的学习记忆能力显著下降，通过益气聪明汤加味干预可有效改善其学习记忆能力。

    3.2 脾胃虚损与VD

    近年来随着脑卒中、心血管等疾病的剧增，血管性痴呆在全球发病率上升趋势明显[4]，在我国，VD的患病率為1.1%～3.0%。通过不断的临床实践，我们发现VD患者除了常见的学习、记忆能力的改变外，多包括有神疲意散、少气懒言，四肢无力，困倦少食的特点，遣方立药中结合补益后天、提升中气之品，每每可以取得良效。特别是早期的痴呆患者，补益脾胃，使得清阳上升，荣养脑络;重镇潜降，浊阴下行，浮阳不升，脑络清明;兼化瘀通络逐痰贯穿，可使中州之土无犯，至高之阳不损，经络之气无堵，血脉之血无瘀。在临床的病机分析中，患者尚有心理上的障碍，往往伴有情绪的不畅和抑郁，若适当加以疏肝活络，潜降重镇之品，多获良效。据此我们对VD的病机加以完善，认为其病理基础应该是清阳不升，浊阴不降，脉络瘀阻，气络不宁，在理论

    上和实践上进行了有效补充，揭示了VD病机变化的复杂性。

    3.3 益气聪明汤加味防治VD

    益气聪敏汤加味，由益气聪明汤、不忘方联合水蛭组成，益气聪明汤是金元时期著名医家李东垣益气升阳的代表方剂，现代已有学者[5]用于VD治疗并获得较好疗效。不忘方源自《备急千金要方》，具有补肾养心益志之功效。方中人参、黄芪甘温以补脾胃，甘草甘缓以和脾胃，葛根、升麻、蔓荆轻扬升发，能入阳明，鼓动胃气，上行头目，中气既足，清阳上升，白芍敛阴和血，黄柏补肾生水，菖蒲，茯苓，茯神，健脾开窍醒神化痰，两方联合水蛭，可升清阳降浊阴，化痰通络，兼具补脾、补肾、平肝之功，使精气上行充养清窍，改善学习记忆能力。

    参考文献

    [1] 吴江，贾建平，崔丽英，等.神经病学[M].2版.北京：人民卫生出版社，2010：190.

    [2] BLACK S.Vascular cognitive impairment：epidemiology，subtypes，diagnosis and management[J].JR Coll Physicians Edinb，2011，41（1）：49.

    [3] 刘利兵.实验基础医学[M].西安：第四军医大学出版社，进行水迷宫实验，2009：362-363.

    本文编辑：刘欣悦