植物中硼分离方法的建立及其同位素质谱测定

徐树建等
1引言
硼是植物正常生长所必需的一种微量营养元素。作为植物体的结构组成部分,硼不参与氧化还原反应,只促进碳水化合物的正常运转、植物体生殖器官的建成和发育、细胞分裂和细胞伸长等。硼与光合作用、核酸及蛋白质的合成也有一定的关系,还能提高作物的抗逆性,参与由多酚氧化酶所活化的氧化系统[1, 2]。
自然界中硼有两种稳定同位素:10B和11B,目前对硼和硼同位素组成的应用主要集中于宇宙事件[3,4]、壳幔演化[5]、物质来源判断[6~8]、古海洋和古气候[9~11]以及环境污染[12~15]的研究方面。而硼在植物生长过程的迁移、再循环及生物地球化学作用,都容易引起硼同位素组成的变化,这种作用同时也导致硼循环过程的同位素变化,因此通过了解硼元素在植物体的行为、迁移转化以及生物效应机理,能够更好地优化现代农业的培育种植、重建古营养学结构以及重新认识硼同位素的生物地球化学循环。
然而,植物体中存在的大量有机质,影响了硼同位素测定的精确度和准确度,硼的提取纯化技术成为限制硼同位素在植物领域方面应用的瓶颈[16~18]。通常,植物体中测定硼含量使用的分离方法为传统的HNO3/H2O2湿法消解,这种方法虽然能够有效去除植物中的大量有机质,但是HNO3的引入,容易产生影响硼同位素测定(Cs2BO+2)的同质异位素Cs2CNO+ [19~21],Cs2CNO+能够大大抑制硼同位素离子流的发射。文献[19]建立的微升华法能够去除溶液中存在的有机质,但是不适用含有大量有机质植物样品。
在文献[22]建立的两步法离子交换技术分离硼的基础上,本实验建立了一种快速消除大量有机质的分离方法, 实现了植物中硼的有效分离,并能满足正热电离质谱法测定硼同位素测试的需求,初步探讨在植物体不同组织之间产生硼同位素分馏的原因。
2实验部分
2.1仪器与试剂
全谱直读电感耦合等离子体发射光谱仪(Inductively coupled plasma optical emission spectrometry, ICPOES,美国Varian,Vista MPX型),配40 MHz自激式射频发生器、中阶梯多色器系统和Vista Chip CCD检测器。硼同位素比采用Triton (Thermo Fisher)正热电离质谱计测定,该质谱计配有特制的双法拉第杯系统,可实现309(Cs211BO+2)/308(Cs210BO+2)离子的同步测定[10]。
硼酸、HCl、硼砂均为优级纯试剂。硼元素标准溶液(1 g/L)购自国家标准物质研究中心。使用前,盐酸经一次亚沸蒸馏配制而成。光谱纯石墨与乙醇水(8∶2, V/V)配制的悬浮液作为正热电离质谱发射剂。Amberlite IRA 743树脂(60~100,SigmaAldrich (China)公司),研磨过100目筛。Dowex 50 W×8 H+型强阳离子交换树脂(200~400目)和Ion Exchanger Ⅱ型弱阴离子交换树脂(60~100目),百灵威科技有限公司。硼同位素标准NIST SRM 951硼酸,配制溶液浓度为1.0 g/L。用光谱纯Cs2CO3 (99.994%)配制12.3 g/L的溶液。用甘露醇(HPLC纯) 配制溶液浓度为1.82%。
实验用水均为蒸馏水,并经过亚沸蒸馏和硼特效树脂柱交换后的无硼去离子水。
2.2分离过程
2.2.1样品干灰化植物样品(松果菊和红王子锦带)采用去离子水反复洗涤,以除去表面的附着物和杂质。在40 ℃的温度下气流烘干后, 将样品粉碎,过100目筛。准确称量0.3~0.5 g植物样品,置于干燥的石英坩埚中,然后将样品和坩埚放置于马弗炉中,先升温至200 ℃,将植物样品进行碳化1 h,升温至550 ℃进行干燥灰化4 h,最后在干燥器中冷却至室温。
2.2.2硼特效树脂吸附Amberlite IRA743硼特效树脂(100~200 目)使用前,用0.5 mol/L HCl洗涤,然后用高纯水淋洗至中性,再用0.1 mol/L NH3·H2O洗涤,再用高纯水淋洗至中性,待用[10,23,24]。
将干燥灰化后的植物样品,用1 mL 0.5 mol/L HCl溶解后,向其中加入1 mol/L NH3·H2O溶液,调至pH 9。将样品溶液以2.5 mL/min流速通过硼特效树脂,用于硼的吸附。待溶液流尽后,用1 mL高纯水洗涤,然后用75 ℃ 10 mL 0.1 mol/L HCl淋洗,收集淋洗液。然后在60 ℃温度下气流蒸发至近干。
2.2.3阴阳离子混合树脂法阳离子树脂在使用前,用HCl 溶液再生,去离子水洗至中性。弱碱性阴离子树脂用饱和NaHCO3溶液淋洗,高纯水洗至中性。将上述阴、阳离子交换树脂均匀混合,备用。由于阴阳离子树脂粒径不一样,因此易于分离和再生使用。
将近干的溶液直接转移至阴阳离子混合交换树脂柱中,然后用10 mL高纯水洗涤,收集淋洗液,然后向其中加入适量的Cs2CO3溶液和甘露醇(使B/Cs 摩尔比为1∶2, B/甘露醇摩尔比为1∶l)。将溶液置于鼓风干燥箱中, 60 ℃温度下浓缩至约0.5 mL时,转移至0.5 mL具塞离心管,继续蒸发溶液至含硼约1 g/L 为止。样品密封,在4 ℃温度下储存,用于硼同位素组成测试。
2.3硼同位素测定方法
采用文献[22]建立的Cs2BO+2正热电离质谱法测定硼同位素组成。钽带(7.5 mm× 0.76 mm× 0.025 mm)在3 A电流下真空去气1 h。涂样时,先将2.5 μL石墨悬浮液涂于钽带表面,在1.2 A电流下蒸至近干,再加入1 μL样品,蒸发至近干,用于质谱测定。
1引言
硼是植物正常生长所必需的一种微量营养元素。作为植物体的结构组成部分,硼不参与氧化还原反应,只促进碳水化合物的正常运转、植物体生殖器官的建成和发育、细胞分裂和细胞伸长等。硼与光合作用、核酸及蛋白质的合成也有一定的关系,还能提高作物的抗逆性,参与由多酚氧化酶所活化的氧化系统[1, 2]。
自然界中硼有两种稳定同位素:10B和11B,目前对硼和硼同位素组成的应用主要集中于宇宙事件[3,4]、壳幔演化[5]、物质来源判断[6~8]、古海洋和古气候[9~11]以及环境污染[12~15]的研究方面。而硼在植物生长过程的迁移、再循环及生物地球化学作用,都容易引起硼同位素组成的变化,这种作用同时也导致硼循环过程的同位素变化,因此通过了解硼元素在植物体的行为、迁移转化以及生物效应机理,能够更好地优化现代农业的培育种植、重建古营养学结构以及重新认识硼同位素的生物地球化学循环。
然而,植物体中存在的大量有机质,影响了硼同位素测定的精确度和准确度,硼的提取纯化技术成为限制硼同位素在植物领域方面应用的瓶颈[16~18]。通常,植物体中测定硼含量使用的分离方法为传统的HNO3/H2O2湿法消解,这种方法虽然能够有效去除植物中的大量有机质,但是HNO3的引入,容易产生影响硼同位素测定(Cs2BO+2)的同质异位素Cs2CNO+ [19~21],Cs2CNO+能够大大抑制硼同位素离子流的发射。文献[19]建立的微升华法能够去除溶液中存在的有机质,但是不适用含有大量有机质植物样品。
在文献[22]建立的两步法离子交换技术分离硼的基础上,本实验建立了一种快速消除大量有机质的分离方法, 实现了植物中硼的有效分离,并能满足正热电离质谱法测定硼同位素测试的需求,初步探讨在植物体不同组织之间产生硼同位素分馏的原因。
2实验部分
2.1仪器与试剂
全谱直读电感耦合等离子体发射光谱仪(Inductively coupled plasma optical emission spectrometry, ICPOES,美国Varian,Vista MPX型),配40 MHz自激式射频发生器、中阶梯多色器系统和Vista Chip CCD检测器。硼同位素比采用Triton (Thermo Fisher)正热电离质谱计测定,该质谱计配有特制的双法拉第杯系统,可实现309(Cs211BO+2)/308(Cs210BO+2)离子的同步测定[10]。
硼酸、HCl、硼砂均为优级纯试剂。硼元素标准溶液(1 g/L)购自国家标准物质研究中心。使用前,盐酸经一次亚沸蒸馏配制而成。光谱纯石墨与乙醇水(8∶2, V/V)配制的悬浮液作为正热电离质谱发射剂。Amberlite IRA 743树脂(60~100,SigmaAldrich (China)公司),研磨过100目筛。Dowex 50 W×8 H+型强阳离子交换树脂(200~400目)和Ion Exchanger Ⅱ型弱阴离子交换树脂(60~100目),百灵威科技有限公司。硼同位素标准NIST SRM 951硼酸,配制溶液浓度为1.0 g/L。用光谱纯Cs2CO3 (99.994%)配制12.3 g/L的溶液。用甘露醇(HPLC纯) 配制溶液浓度为1.82%。
实验用水均为蒸馏水,并经过亚沸蒸馏和硼特效树脂柱交换后的无硼去离子水。
2.2分离过程
2.2.1样品干灰化植物样品(松果菊和红王子锦带)采用去离子水反复洗涤,以除去表面的附着物和杂质。在40 ℃的温度下气流烘干后, 将样品粉碎,过100目筛。准确称量0.3~0.5 g植物样品,置于干燥的石英坩埚中,然后将样品和坩埚放置于马弗炉中,先升温至200 ℃,将植物样品进行碳化1 h,升温至550 ℃进行干燥灰化4 h,最后在干燥器中冷却至室温。
2.2.2硼特效树脂吸附Amberlite IRA743硼特效树脂(100~200 目)使用前,用0.5 mol/L HCl洗涤,然后用高纯水淋洗至中性,再用0.1 mol/L NH3·H2O洗涤,再用高纯水淋洗至中性,待用[10,23,24]。
将干燥灰化后的植物样品,用1 mL 0.5 mol/L HCl溶解后,向其中加入1 mol/L NH3·H2O溶液,调至pH 9。将样品溶液以2.5 mL/min流速通过硼特效树脂,用于硼的吸附。待溶液流尽后,用1 mL高纯水洗涤,然后用75 ℃ 10 mL 0.1 mol/L HCl淋洗,收集淋洗液。然后在60 ℃温度下气流蒸发至近干。
2.2.3阴阳离子混合树脂法阳离子树脂在使用前,用HCl 溶液再生,去离子水洗至中性。弱碱性阴离子树脂用饱和NaHCO3溶液淋洗,高纯水洗至中性。将上述阴、阳离子交换树脂均匀混合,备用。由于阴阳离子树脂粒径不一样,因此易于分离和再生使用。
将近干的溶液直接转移至阴阳离子混合交换树脂柱中,然后用10 mL高纯水洗涤,收集淋洗液,然后向其中加入适量的Cs2CO3溶液和甘露醇(使B/Cs 摩尔比为1∶2, B/甘露醇摩尔比为1∶l)。将溶液置于鼓风干燥箱中, 60 ℃温度下浓缩至约0.5 mL时,转移至0.5 mL具塞离心管,继续蒸发溶液至含硼约1 g/L 为止。样品密封,在4 ℃温度下储存,用于硼同位素组成测试。
2.3硼同位素测定方法
采用文献[22]建立的Cs2BO+2正热电离质谱法测定硼同位素组成。钽带(7.5 mm× 0.76 mm× 0.025 mm)在3 A电流下真空去气1 h。涂样时,先将2.5 μL石墨悬浮液涂于钽带表面,在1.2 A电流下蒸至近干,再加入1 μL样品,蒸发至近干,用于质谱测定。
1引言
硼是植物正常生长所必需的一种微量营养元素。作为植物体的结构组成部分,硼不参与氧化还原反应,只促进碳水化合物的正常运转、植物体生殖器官的建成和发育、细胞分裂和细胞伸长等。硼与光合作用、核酸及蛋白质的合成也有一定的关系,还能提高作物的抗逆性,参与由多酚氧化酶所活化的氧化系统[1, 2]。
自然界中硼有两种稳定同位素:10B和11B,目前对硼和硼同位素组成的应用主要集中于宇宙事件[3,4]、壳幔演化[5]、物质来源判断[6~8]、古海洋和古气候[9~11]以及环境污染[12~15]的研究方面。而硼在植物生长过程的迁移、再循环及生物地球化学作用,都容易引起硼同位素组成的变化,这种作用同时也导致硼循环过程的同位素变化,因此通过了解硼元素在植物体的行为、迁移转化以及生物效应机理,能够更好地优化现代农业的培育种植、重建古营养学结构以及重新认识硼同位素的生物地球化学循环。
然而,植物体中存在的大量有机质,影响了硼同位素测定的精确度和准确度,硼的提取纯化技术成为限制硼同位素在植物领域方面应用的瓶颈[16~18]。通常,植物体中测定硼含量使用的分离方法为传统的HNO3/H2O2湿法消解,这种方法虽然能够有效去除植物中的大量有机质,但是HNO3的引入,容易产生影响硼同位素测定(Cs2BO+2)的同质异位素Cs2CNO+ [19~21],Cs2CNO+能够大大抑制硼同位素离子流的发射。文献[19]建立的微升华法能够去除溶液中存在的有机质,但是不适用含有大量有机质植物样品。
在文献[22]建立的两步法离子交换技术分离硼的基础上,本实验建立了一种快速消除大量有机质的分离方法, 实现了植物中硼的有效分离,并能满足正热电离质谱法测定硼同位素测试的需求,初步探讨在植物体不同组织之间产生硼同位素分馏的原因。
2实验部分
2.1仪器与试剂
全谱直读电感耦合等离子体发射光谱仪(Inductively coupled plasma optical emission spectrometry, ICPOES,美国Varian,Vista MPX型),配40 MHz自激式射频发生器、中阶梯多色器系统和Vista Chip CCD检测器。硼同位素比采用Triton (Thermo Fisher)正热电离质谱计测定,该质谱计配有特制的双法拉第杯系统,可实现309(Cs211BO+2)/308(Cs210BO+2)离子的同步测定[10]。
硼酸、HCl、硼砂均为优级纯试剂。硼元素标准溶液(1 g/L)购自国家标准物质研究中心。使用前,盐酸经一次亚沸蒸馏配制而成。光谱纯石墨与乙醇水(8∶2, V/V)配制的悬浮液作为正热电离质谱发射剂。Amberlite IRA 743树脂(60~100,SigmaAldrich (China)公司),研磨过100目筛。Dowex 50 W×8 H+型强阳离子交换树脂(200~400目)和Ion Exchanger Ⅱ型弱阴离子交换树脂(60~100目),百灵威科技有限公司。硼同位素标准NIST SRM 951硼酸,配制溶液浓度为1.0 g/L。用光谱纯Cs2CO3 (99.994%)配制12.3 g/L的溶液。用甘露醇(HPLC纯) 配制溶液浓度为1.82%。
实验用水均为蒸馏水,并经过亚沸蒸馏和硼特效树脂柱交换后的无硼去离子水。
2.2分离过程
2.2.1样品干灰化植物样品(松果菊和红王子锦带)采用去离子水反复洗涤,以除去表面的附着物和杂质。在40 ℃的温度下气流烘干后, 将样品粉碎,过100目筛。准确称量0.3~0.5 g植物样品,置于干燥的石英坩埚中,然后将样品和坩埚放置于马弗炉中,先升温至200 ℃,将植物样品进行碳化1 h,升温至550 ℃进行干燥灰化4 h,最后在干燥器中冷却至室温。
2.2.2硼特效树脂吸附Amberlite IRA743硼特效树脂(100~200 目)使用前,用0.5 mol/L HCl洗涤,然后用高纯水淋洗至中性,再用0.1 mol/L NH3·H2O洗涤,再用高纯水淋洗至中性,待用[10,23,24]。
将干燥灰化后的植物样品,用1 mL 0.5 mol/L HCl溶解后,向其中加入1 mol/L NH3·H2O溶液,调至pH 9。将样品溶液以2.5 mL/min流速通过硼特效树脂,用于硼的吸附。待溶液流尽后,用1 mL高纯水洗涤,然后用75 ℃ 10 mL 0.1 mol/L HCl淋洗,收集淋洗液。然后在60 ℃温度下气流蒸发至近干。
2.2.3阴阳离子混合树脂法阳离子树脂在使用前,用HCl 溶液再生,去离子水洗至中性。弱碱性阴离子树脂用饱和NaHCO3溶液淋洗,高纯水洗至中性。将上述阴、阳离子交换树脂均匀混合,备用。由于阴阳离子树脂粒径不一样,因此易于分离和再生使用。
将近干的溶液直接转移至阴阳离子混合交换树脂柱中,然后用10 mL高纯水洗涤,收集淋洗液,然后向其中加入适量的Cs2CO3溶液和甘露醇(使B/Cs 摩尔比为1∶2, B/甘露醇摩尔比为1∶l)。将溶液置于鼓风干燥箱中, 60 ℃温度下浓缩至约0.5 mL时,转移至0.5 mL具塞离心管,继续蒸发溶液至含硼约1 g/L 为止。样品密封,在4 ℃温度下储存,用于硼同位素组成测试。
2.3硼同位素测定方法
采用文献[22]建立的Cs2BO+2正热电离质谱法测定硼同位素组成。钽带(7.5 mm× 0.76 mm× 0.025 mm)在3 A电流下真空去气1 h。涂样时,先将2.5 μL石墨悬浮液涂于钽带表面,在1.2 A电流下蒸至近干,再加入1 μL样品,蒸发至近干,用于质谱测定。
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