抗稻瘟病菌活性木荷皂甙类似物的分离条件及其分离

王纯荣等
摘要:新型木荷各皂甙极性相似,结构相近,给分离带来了极大困难,制约了抗稻瘟病菌活性木荷皂甙先导物的确立。运用单因素(色谱柱填料、流速、流动相配比)探索其色谱行为,综合塔板理论、速率理论及线性放大原理推导,以及菌丝生长速率法测定活性,确定了木荷皂甙的色谱分析条件为:Hypersil BDS C18色谱柱,流速0.8 mL/min,特定的梯度洗脱程序,获得了较为满意的色谱分析图谱。
关键词:木荷皂甙; 色谱行为; 分离; 抗稻瘟病菌活性
M2IGR5R2和M2IGR5R3级分抗稻瘟病菌活性较强,所含成分复杂,经酸水解发现仅含一种皂甙元(见图1),各单体之间主要是糖基上的差异。糖基种类、糖基与甙元的连接方式、连接次序、连接位置等微小差异,虽然是同一类皂甙,但结构相近,性质相似, 给分离带来极大困难。本研究探讨难分离木荷皂甙在不同色谱条件下的色谱行为,推导出半经验半制备分离公式,成功分离到多个木荷皂甙单体,确定了木荷抗稻瘟病菌活性皂甙先导物。
2实验部分
2.1仪器、试剂与材料
Agilent1200分析型液相色谱(配备G1311A 四元泵、G1316A 柱温箱、G1314A VWD检测器、G1313A 标准型自动进样器、G1379B 微量真空脱气机);LC3000中高压制备色谱分离系统(配备P3000高压双泵系统、UV3000紫外可见检测器、 Knauer动态混合器);分析型色谱柱:Thermo Fisher BDS HYPERSIL C18、Venusil XBP C18、Waters Xbridge C18、Agilent ZORBAX SB C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm),半制备型色谱柱:Thermo Fisher BDS HYPERSIL C18(250 mm ×10 mm, 5 μm)。乙腈、甲醇(色谱纯 国药集团化学试剂有限公司)。木荷皂甙级分M2IGR5R2和 M2IGR5R3由本实验室分离制得。稻瘟病菌,由江西省农业科学院植物保护研究所提供。
2.2色谱条件
2.3抗稻瘟病菌活性测定方法
2.3.1含药培养基的配制采用2倍稀释法配制浓度为20.00, 10.00, 5.00, 2.50, 1.25, 0.63, 0.31和0.0 mg/L的含木荷皂甙培养基各10.00 mL,每个培养基中加0.20 g 琼脂,灭菌备用。
2.3.2毒力方程的绘制菌丝生长速率法[5~7]:将各10.00 mL的培养基对号倒入直径为7 cm的平皿中,待其凝固,用打孔器(Φ 5.00 mm)沿菌落边缘打取菌龄长势一致菌块,在含药培养基及对照中接入3个菌块,28 ℃培养60 h后用游标卡尺十字交叉法测量菌落直径(mm),计算其抑菌率。抑菌率计算公式:T(%)=(R0-R2)/(R0-R1)×100;T为抑菌率,R0为空白菌落直径,R1为接入菌块直径,R2为含药菌落直径。以皂甙含量的对数值对抑菌率绘制毒力方程。
利用7.05版DPS软件处理数据。
摘要:新型木荷各皂甙极性相似,结构相近,给分离带来了极大困难,制约了抗稻瘟病菌活性木荷皂甙先导物的确立。运用单因素(色谱柱填料、流速、流动相配比)探索其色谱行为,综合塔板理论、速率理论及线性放大原理推导,以及菌丝生长速率法测定活性,确定了木荷皂甙的色谱分析条件为:Hypersil BDS C18色谱柱,流速0.8 mL/min,特定的梯度洗脱程序,获得了较为满意的色谱分析图谱。
关键词:木荷皂甙; 色谱行为; 分离; 抗稻瘟病菌活性
M2IGR5R2和M2IGR5R3级分抗稻瘟病菌活性较强,所含成分复杂,经酸水解发现仅含一种皂甙元(见图1),各单体之间主要是糖基上的差异。糖基种类、糖基与甙元的连接方式、连接次序、连接位置等微小差异,虽然是同一类皂甙,但结构相近,性质相似, 给分离带来极大困难。本研究探讨难分离木荷皂甙在不同色谱条件下的色谱行为,推导出半经验半制备分离公式,成功分离到多个木荷皂甙单体,确定了木荷抗稻瘟病菌活性皂甙先导物。
2实验部分
2.1仪器、试剂与材料
Agilent1200分析型液相色谱(配备G1311A 四元泵、G1316A 柱温箱、G1314A VWD检测器、G1313A 标准型自动进样器、G1379B 微量真空脱气机);LC3000中高压制备色谱分离系统(配备P3000高压双泵系统、UV3000紫外可见检测器、 Knauer动态混合器);分析型色谱柱:Thermo Fisher BDS HYPERSIL C18、Venusil XBP C18、Waters Xbridge C18、Agilent ZORBAX SB C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm),半制备型色谱柱:Thermo Fisher BDS HYPERSIL C18(250 mm ×10 mm, 5 μm)。乙腈、甲醇(色谱纯 国药集团化学试剂有限公司)。木荷皂甙级分M2IGR5R2和 M2IGR5R3由本实验室分离制得。稻瘟病菌,由江西省农业科学院植物保护研究所提供。
2.2色谱条件
2.3抗稻瘟病菌活性测定方法
2.3.1含药培养基的配制采用2倍稀释法配制浓度为20.00, 10.00, 5.00, 2.50, 1.25, 0.63, 0.31和0.0 mg/L的含木荷皂甙培养基各10.00 mL,每个培养基中加0.20 g 琼脂,灭菌备用。
2.3.2毒力方程的绘制菌丝生长速率法[5~7]:将各10.00 mL的培养基对号倒入直径为7 cm的平皿中,待其凝固,用打孔器(Φ 5.00 mm)沿菌落边缘打取菌龄长势一致菌块,在含药培养基及对照中接入3个菌块,28 ℃培养60 h后用游标卡尺十字交叉法测量菌落直径(mm),计算其抑菌率。抑菌率计算公式:T(%)=(R0-R2)/(R0-R1)×100;T为抑菌率,R0为空白菌落直径,R1为接入菌块直径,R2为含药菌落直径。以皂甙含量的对数值对抑菌率绘制毒力方程。
利用7.05版DPS软件处理数据。
摘要:新型木荷各皂甙极性相似,结构相近,给分离带来了极大困难,制约了抗稻瘟病菌活性木荷皂甙先导物的确立。运用单因素(色谱柱填料、流速、流动相配比)探索其色谱行为,综合塔板理论、速率理论及线性放大原理推导,以及菌丝生长速率法测定活性,确定了木荷皂甙的色谱分析条件为:Hypersil BDS C18色谱柱,流速0.8 mL/min,特定的梯度洗脱程序,获得了较为满意的色谱分析图谱。
关键词:木荷皂甙; 色谱行为; 分离; 抗稻瘟病菌活性
M2IGR5R2和M2IGR5R3级分抗稻瘟病菌活性较强,所含成分复杂,经酸水解发现仅含一种皂甙元(见图1),各单体之间主要是糖基上的差异。糖基种类、糖基与甙元的连接方式、连接次序、连接位置等微小差异,虽然是同一类皂甙,但结构相近,性质相似, 给分离带来极大困难。本研究探讨难分离木荷皂甙在不同色谱条件下的色谱行为,推导出半经验半制备分离公式,成功分离到多个木荷皂甙单体,确定了木荷抗稻瘟病菌活性皂甙先导物。
2实验部分
2.1仪器、试剂与材料
Agilent1200分析型液相色谱(配备G1311A 四元泵、G1316A 柱温箱、G1314A VWD检测器、G1313A 标准型自动进样器、G1379B 微量真空脱气机);LC3000中高压制备色谱分离系统(配备P3000高压双泵系统、UV3000紫外可见检测器、 Knauer动态混合器);分析型色谱柱:Thermo Fisher BDS HYPERSIL C18、Venusil XBP C18、Waters Xbridge C18、Agilent ZORBAX SB C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm),半制备型色谱柱:Thermo Fisher BDS HYPERSIL C18(250 mm ×10 mm, 5 μm)。乙腈、甲醇(色谱纯 国药集团化学试剂有限公司)。木荷皂甙级分M2IGR5R2和 M2IGR5R3由本实验室分离制得。稻瘟病菌,由江西省农业科学院植物保护研究所提供。
2.2色谱条件
2.3抗稻瘟病菌活性测定方法
2.3.1含药培养基的配制采用2倍稀释法配制浓度为20.00, 10.00, 5.00, 2.50, 1.25, 0.63, 0.31和0.0 mg/L的含木荷皂甙培养基各10.00 mL,每个培养基中加0.20 g 琼脂,灭菌备用。
2.3.2毒力方程的绘制菌丝生长速率法[5~7]:将各10.00 mL的培养基对号倒入直径为7 cm的平皿中,待其凝固,用打孔器(Φ 5.00 mm)沿菌落边缘打取菌龄长势一致菌块,在含药培养基及对照中接入3个菌块,28 ℃培养60 h后用游标卡尺十字交叉法测量菌落直径(mm),计算其抑菌率。抑菌率计算公式:T(%)=(R0-R2)/(R0-R1)×100;T为抑菌率,R0为空白菌落直径,R1为接入菌块直径,R2为含药菌落直径。以皂甙含量的对数值对抑菌率绘制毒力方程。
利用7.05版DPS软件处理数据。
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