辽宁地区不同猪瘟疫苗免疫效果比较试验

    李凤元+宋淑英

    

    摘要：在辽宁选取3个使用不同厂家猪瘟疫苗的生猪养殖场，对受试场的猪瘟疫苗免疫效果进行评估，比较疫苗免疫效果。结果表明，在辽宁地区使用的强制免疫疫苗和杭州某公司生產的猪瘟疫苗，免疫效果较好，其抗体生成率较高，可在辽宁地区生猪饲养场推广应用，以确保辽宁地区猪瘟的综合防控效果。

    关键词：猪瘟疫苗；免疫；效果；辽宁地区

    中图分类号：S858.28；S851 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2017）05-0007-02

    猪瘟（CSF）是由黄病毒科瘟病毒属的猪瘟病毒（CSFV）引起的一种传染病。该病具有传染性强、高度接触性、热性等特点[1]。猪是猪瘟病毒的惟一天然宿主，该病毒能够引起各年龄阶段猪发病。由于具有较高的传染性和致死性，该病被归类为一类动物疫病[2，3]。

    由于我国对猪瘟实施了较长时间的强制免疫，因此该病在我国的流行和发病特点均已出现了较大的变化。目前，该病的发病多为隐性感染，感染病猪多无明显发病症状。亚临床感染或隐性感染病猪多表现为非典型症状[4]，但隐性感染病猪可常期带毒，并向周围环境排出病毒。隐性感染的母猪可将携带的病毒垂直传播给新生的仔猪，造成木乃伊胎、死胎或仔猪带毒。当机体在其他因素作用下出现抵抗能力降低时易造成猪瘟的大规模暴发[5]。给生猪养殖业带来巨大经济损失。疫苗免疫仍是猪瘟防控的首选方案，但目前市场上的猪瘟疫苗品种繁多，各种疫苗免疫效果参差不齐，给猪瘟的防控带来不确定因素[6]。本试验在辽宁选取了3个使用不同厂家猪瘟疫苗的生猪养殖场，对受试场的猪瘟疫苗免疫效果进行评估，比较疫苗免疫效果，为辽宁地区猪瘟防控提供理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 受试猪场 分别在辽宁抚顺、锦州、阜新地区选取3家规模化生猪饲养场，每场选取4窝16头仔猪（公母各半）进行猪瘟疫苗免疫效果比较试验。

    1.1.2 受试疫苗 抚顺猪场使用本省猪瘟强制免疫疫苗；锦州猪场使用杭州某疫苗公司生产的猪瘟疫苗；阜新猪场使用北京某疫苗公司生产的猪瘟疫苗。

    1.1.3 主要材料 猪瘟ELISA抗体检测试剂盒购于深圳康百德生物科技有限公司；无菌注射器、真空采血管、电热恒温培养箱（CDF-DX006）、恒温数显水浴锅（BC303）、多道可调微量移液器（Eppendorf）、单道可调微量移液器（Thermo fisher）等由辽宁省重大动物疫病应急中心提供。

    1.2 方法

    1.2.1 血液样品采集 第1次采血：在仔猪23日龄（首免前2 d）时，对受试仔猪进行前腔静脉采血，用于测量母源抗体。第2次采血：在首免后30 d对各组受试仔猪进行第2次采血。第3次采血：在加强免疫后30 d进行第3次采血。

    1.2.2 疫苗免疫 第1次免疫：在仔猪25日龄时，于颈侧部注射猪瘟疫苗，注射剂量按照说明书参考剂量进行。第2次免疫：在首轮免疫后30 d，仔猪55日龄时，在颈部肌肉进行猪瘟疫苗加强免疫。

    1.2.3 猪瘟抗体ELISA检测

    （1）血清制备。将采集的血液按照常规血清制备方法室温放置，当析出血清后离心。血清应清亮、无溶血。

    （2）洗涤液制备。将浓缩的洗涤液于恒温水浴锅中使其保持在25 ℃，摇动使沉淀的盐溶解后用无菌去离子水进行20倍稀释，稀释后的洗涤液于4 ℃保存。

    （3）样品稀释。在血清稀释板中，按1∶40的体积比稀释待检血清。同时按照1∶40的体积比稀释阳性对照和阴性对照。

    （4）加样方法。取预包被的检测板，将稀释好的待检血清100 μL加入检测板孔中。阴性对照和阳性对照各加2个孔，每孔加入100 μL。轻轻振匀孔中的样品，放置于37 ℃恒温培养箱中温育30 min。

    甩掉孔中的溶液，用洗涤液洗板5次，每孔加入洗涤液200 μL，每次静置3 min，在干净的吸水纸上拍干。

    每孔加入羊抗猪酶标二抗100 μL，放置于37 ℃恒温培养箱中孵育30 min。洗涤5次并在吸水纸上拍干。

    每孔先加底物液A 50 μL，再加底物液B 50 μL，混匀后室温避光显色10 min。

    每孔加入终止液50 μL，并在10 min内进行结果测定。

    （5）结果判定。在酶标仪中测量各孔OD630 nm。试验成立条件为阳性对照孔平均OD630 nm≥1.0，阴性对照孔平均OD630 nm<0.30。样品OD630 nm>0.35为阳性，否则为阴性。

    2 结果与分析

    经猪瘟ELISA抗体检测试剂盒检测，3不同生产厂家生产的猪瘟疫苗免疫后抗体生成率具体情况见表1。由表1可知，受试养殖场猪瘟母源抗体水平均较低，其中阜新场母源抗体水平最低，为0；抚顺受试场较高，为6.25%；锦州受试场母源抗体水平最高，为18.75%；首免后，抚顺受试场强制免疫疫苗抗体生成水平最高，检测抗体阳性率为100%；北京某公司生产的猪瘟疫苗（阜新受试场）抗体检测阳性率次之，为87.50%；杭州某公司生产的猪瘟疫苗（锦州受试场）抗体检测阳性率最低，为81.25%。加强免疫后，杭州某公司生产的猪瘟疫苗（锦州受试场）抗体检测阳性率最高，为100%；强制免疫疫苗（抚顺受试场）的抗体生成水平次之，检测抗体阳性率为93.75%；北京某公司生产的猪瘟疫苗（阜新受试场）抗体检测阳性率最低，为75.00%。

    综合分析表1的3种疫苗抗体检测结果，辽宁地区使用的猪瘟强制免疫疫苗和杭州某公司生产的猪瘟疫苗在此次试验中猪瘟抗体阳性率相对较好。强制免疫疫苗在首免后，疫苗保护率可达100%，加强免疫后抗体保护率可达93.75%；杭州某公司生产的疫苗可在加强免疫后达到100%的抗体保护率，且首免后抗体保护率也相对较高，达到81.25%。因此这两种疫苗抗体水平和保护率较为理想。

    3 讨论

    猪瘟为OIE规定的A类传染病，是国际贸易中重要的检查传染病。该病最早在1833于美国发现，初称为猪霍乱[7]。最初许多欧洲国家如荷兰、比利时、意大利等已宣布消灭该病，但有报道指出上述国家又相继暴发猪瘟。在我国，猪瘟流行特点变化较大，主要以隐性感染和慢性感染为主，易造成母猪带毒，使仔猪先天性感染，对猪群健康造成潜在风险，是影响生猪养殖业的主要疫病之一，给养殖业造成巨大的经济损失[8-10]。

    目前，猪瘟的防控主要是以疫苗免疫为主。但目前市售猪瘟疫苗种类众多，免疫效果也不尽相同。因此选择免疫效果好、抗体保护率高的疫苗，对猪瘟进行有效地综合防控具有较为实际的应用意义。本试验对辽宁地区使用较多的3种猪瘟疫苗的免疫效果进行了评估，结果表明，在辽宁地区使用的强制免疫疫苗和杭州某公司生产的猪瘟疫苗其免疫效果较好，抗体生成率较高，可在辽宁地区生猪饲养场推广应用，以确保辽宁地区猪瘟的综合防控效果。

    参考文献：

    [1] 刘 建，汤德元，李春燕，等.我国猪瘟流行新趋势与防控措施[J].猪病防控，2013（2）：37-39.

    [2] 赵 耘，宁宜宝.猪瘟疫苗研究进展[J].动物医学进展，2004，25（1）：39-42.

    [3] 何志强，何雪红，王 鑫，等.影响猪瘟免疫效果的因素及防治措施[J].畜牧与饲料科学，2010，31（1）：188-189.

    [4] 栾培贤，肖建华，赵 靓，等.猪瘟国内外流行情况概述[J].东北农业大学学报，2013，44（9）：155-160.

    [5] 李 娜，孙 元，仇华吉.猪瘟DNA疫苗研究进展[J].生物工程学报，2010，26（3）：281-289.

    [6] 王娟萍，姚敬明，吳 忻，等.规模化种猪场猪瘟免疫情况调研[J].中国畜牧兽医，2012，39（1）： 184-187.

    [7] 姚文生，范学政，王 琴，等.我国猪瘟流行现状与防控措施建议[J].中国兽药杂志，2011，45（9）：44-47.

    [8] 王春花，孙 元，仇华吉.新型猪瘟疫苗研究进展[J].生物工程学报，2013，29（7）：880-890.

    [9] 王 琴.猪瘟流行现状及中国猪瘟净化策略[J].猪病防控，2012（10）：45-47.

    [10] 修金生，吴顺意，周伦江，等.不同规模猪场种猪猪瘟抗体检测与猪瘟净化[J].福建农业学报，2010，25（2）：235-238.