利用MALDI-TOFMS对血流感染病原菌快速鉴定的准确性评价

2022.06.14

余德基周凤英陈思颖

【摘要】目的探讨利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）对血流感染病原菌快速鉴定的准确性。方法选取356例（356份）患者的血液样本作为研究对象，分别使用MALDI-TOF MS与 Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统（Vitek 2 Compact）对血流感染病原菌进行检测，并以Vitek 2 Compact鉴定结果为金标准，观察MALDI-TOF MS的鉴定符合率。结果在阳性血培养瓶中，革兰阴性菌主要包括大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌复合菌、阴沟肠杆菌复合群、沙门菌群，种水平鉴定符合率为94.64%（212/224）;革兰阳性菌主要包括表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、屎肠球菌、粪肠球菌、肺炎链球菌，种水平鉴定符合率为94.62%（88/93）。真菌主要包括白色假丝酵母、热带假丝酵母、近平滑假丝酵母、清酒假丝酵母、光滑假丝酵母、新型隐球菌、克柔假丝酵母、葡萄牙假丝酵母，种水平鉴定符合率为80.00%（24/30），另检出马尔尼菲青霉菌9株，因不做生化鉴定未列入对比。结论利用MALDI-TOF MS对血流感染病原菌快速鉴定具有较高准确率，且检测简便、检测时间短。

【关键词】基质辅助激光解析电离飞行时间质谱;血流感染病原菌;快速鉴定

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.07.086

相关临床研究显示，近年来随着广谱抗生素不合理应用与侵入性操作的不断增加，血流感染的发病率及病死率逐年上升，进而对其造成较为严重的损伤[1]，甚至导致患者死亡等不良后果[2]，因此为有效的消除病原菌，提升患者的健康水平，则需要对血流感染病原菌进行有效的鉴定，以便能够采取针对性的措施进行治疗[3]。随着临床检测技术的不断发展，目前临床中多使用MALDI-TOF MS对血流感染病原菌快速

鉴定[4]。本研究探讨MALDI-TOF MS对血流感染病原菌快速鉴定的准确性。现报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料将本院2018年7月～2019年6月收集的356例（356份）患者的血液样本作为研究对象，其中男236例，女132例;平均年龄（58.1±4.9）岁。对所有样本均进行单菌株感染血培养，结果显示，细菌培养阳性317份（革兰阴性224份、革兰阳性93份），真菌培养阳性39份。

1. 2 方法

1. 2. 1 试剂与仪器甲酸、乙腈、Bact/ALERT? 3D 全自动血培养仪、VITEKMS质谱仪、基质液、靶板、VITEK 2 COMPACT及其配套的鉴定板条、血琼脂平板、中国蓝平板、巧克力平板、沙保氏平板、念珠菌显色平板。

1. 2. 2 检测

1. 2. 2. 1 涂片染色镜检使用革兰染色镜对阳性报警的株菌进行检测，以便能够初步对待测菌的种类进行确定，并排除假阳性的干扰。

1. 2. 2. 2 菌种常规鉴定若革兰染色镜检结果为细菌，则采取接种血琼脂平板、中国蓝平板与巧克力平板;若镜检结果为真菌，则采取接种血琼脂平板、中国蓝平板与念珠菌显色平板，并对其进行18～24 h的孵育，之后使用 VITEK 2 COMPACT予以鉴定，并记录鉴定结果。

1. 2. 2. 3 菌种快速鉴定与上述接种操作一样，区别在于只对其进行4 h的孵育，之后用培养的菌膜制备质谱靶板行质谱鉴定。

1. 2. 2. 4 MALDI-TOF MS的鉴定流程点样上清液

1 L至48孔的靶板，在室温下进行干燥，之后添加配套基质液，同时点样大肠埃希菌ATCC8739于质控点，并立即加入配套基质液，待全部干燥后使用MALDI-TOF MS进行检测，若鉴定结果位于60.0%～99.9%说明鉴定结果可靠，其评分标准如下：绿色表示唯一的鉴定结果，可信率为60.0%～99.9%;黄色表示低分辨率有2～4个鉴定结果，可信率>60%，但仍然需要进行进一步的鉴定;红色表示无法鉴定，可信率≤60%。

1. 3 观察指标及判定标准分析单菌株血流细菌感染鉴定结果、单菌株血流真菌感染鉴定结果。种水平鉴定符合率=种水平鉴定正确率+种水平鉴定错误率。

2 结果

2. 1 单菌株血流细菌感染鉴定结果在阳性血培养瓶中，革兰阴性菌主要包括大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌复合菌、阴沟肠杆菌复合群、沙门菌群，种水平鉴定符合率为94.64%（212/224）;革兰阳性菌主要包括表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、屎肠球菌、粪肠球菌、肺炎链球菌，种水平鉴定符合率为94.62%（88/93）。见表1。

2. 2 单菌株血流真菌感染鑒定结果真菌主要包括白色假丝酵母、热带假丝酵母、近平滑假丝酵母、清酒假丝酵母、光滑假丝酵母、新型隐球菌、克柔假丝酵母、葡萄牙假丝酵母，种水平鉴定符合率为80.00%（24/30），另检出马尔尼菲青霉菌9株，因不做生化鉴定未列入对比。见表2。

3 讨论

血流感染将会对机体健康造成严重的不良影响，只有明确感染病原菌的类型才可予以及时有效的针对性治疗[5， 6]。

随着检测技术的不断发展提升，目前临床中多使用MALDI-TOF MS进行检测，该检测技术的主要原理在于通过对比已知菌种建立数据库，将检测获得微生物的蛋白质图谱与数据库中的微生物图谱进行比较，以便能够获得良好的鉴定结果[7]。通过临床实践可知，该种检测方式具有如下优势：①具有简便的操作方式，并且无需花费过多的检测费用;②具有较为快速的检测能力，因而无需等待较长时间。

本研究结果显示，通过使用短期培养法联合质谱的检测结果显示，在阳性血培养瓶中，革兰阴性菌主要包括大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌复合菌、阴沟肠杆菌复合群、沙门菌群，种水平鉴定符合率为94.64%（212/224）;革兰阳性菌主要包括表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、屎肠球菌、粪肠球菌、肺炎链球菌，种水平鉴定符合率为94.62%（88/93）。真菌主要包括白色假丝酵母、热带假丝酵母、近平滑假丝酵母、清酒假丝酵母、光滑假丝酵母、新型隐球菌、克柔假丝酵母、葡萄牙假丝酵母，种水平鉴定符合率为80.00%（24/30）。与Vitek 2 Compact常规培养标本检测结果相比具有较高的准确率，因而能够在较大程度上满足临床检测需求。

综上所述， MALDI-TOF MS对血流感染病原菌快速鉴定具有较高准确率，并且具有检测简便、时间短等优势，可作为临床中首选的检测方式。但临床检测人员仍然需要加强对该种检测方式的研究，以便能够获得更加准确的检测结果，从而为患者提供更好的服务。

参考文献

[1] 张航烽，黄文芳. 利用MALDI-TOFMS对血流感染病原菌快速鉴定的研究进展. 中国微生态学杂志， 2013， 25（2）：242-246.

[2] 方毅，张景皓，赵虎. MALDI-TOFMS直接鉴定血培养阳性标本中的病原菌. 老年医学与保健， 2017， 23（6）：523-527.

[3] 周道红，黎敏，鲁卫平. 利用MALDI-TOFMS快速鉴定经固体培养基短时培养的阳性血培养物中的病原菌. 国际检验医学杂志， 2018， 39（22）：2746-2749.

[4] 盛微翔，吳亮，史伟峰，等. 分离胶促凝管联合MALDI-TOFMS快速检测血培养阳性瓶中细菌的探讨. 现代诊断与治疗， 2017， 28（22）：4117-4119.

[5] 陈峰，李媛睿，皇甫昱婵，等. 分离胶促凝管联合MALDI-TOFMS直接检测血培养阳性细菌. 检验医学， 2015， 30（2）：113-121.

[6] 张蓓，赵丽娜，韩清珍，等. 皂素处理联合MALDI-TOFMS直接鉴定血培养阳性病原菌. 检验医学与临床， 2018， 15（17）：

2525-2528.

[7] 周志美，张磊，吴尚为. 对血流感染实验室诊断的最新认识. 中华医院感染学杂志， 2013， 23（7）：1735-1737.

[收稿日期：2019-07-25]