铁冬青芽诱导和增殖的试验初探
严荣斌++庞永容??
摘要：以3 a生铁冬青茎段为外植体，探讨不同培养基对铁冬青芽诱导和增殖效果。结果表明：铁冬青采用MS+6BA 1 ml/L+IAA 02 ml/L诱导，增殖培养基采用1/2MS+6BA 15 ml/L+IAA 05 ml/L，增殖系数为33。
关键词：铁冬青；诱导；增殖
中图分类号：S792文献标识码：A文章编号：1004-3020（2017）04-0023-02
A Preliminary Study on the Induction and Proliferation of the Bud of Ilex
Yan RongbinPang Yongrong
（Yulin Forestry Research InstituteYulin537501）
Abstract： Using 3 year old stem segments of pig iron as explants， the effects of different media on the induction and proliferation of the buds were studied. The results showed that 0.2 ml/L was induced by MS+6BA 1 ml/L+IAA， the proliferation medium was 1/2MS+6BA 1.5 ml/L+IAA 0.5 ml/L， and the proliferation coefficient was 3.3.
Key words：Ilex rotunda；inducing；propagating
铁冬青（Ilex rotunda），别名熊胆木、羊不食、七星香、万紫千红等。可入药，常用于清熱解毒，消肿止痛；用于感冒，扁桃体炎，咽喉肿痛，急性胃肠炎，风湿骨痛；外用治跌打损伤，痈疖疮疡，外伤出血，烧烫伤，具有较高的药用价值[1]。因树体形态优美，花多且密集，常用作行道树和庭院绿化[2]。铁冬青的育苗用一般采用种子播种为主[3]，也有研究表明可以用扦插的方法培育[4]。本试验探索铁冬青的组织培养的可行性，便于铁冬青的育苗生产。
1材料与方法
1.1试验材料
玉林市林科所3 a生铁冬青绿化苗，选取刚进入木质化且无病虫害的枝条作为外植体。常规清理外植体表面后，在超净工作台进行灭菌消毒。消毒方法采用：75%乙醇处理15～20 s和01%升汞处理9～10 min，无菌水洗涤5～6次。裁剪腋芽未萌发茎段作为进行诱导芽的材料。
1.2诱导铁冬青芽的培养基
以MS为基本培养基[5]，内含30 g/L蔗糖、3 g/L琼脂，pH值58～59。分别设置不同质量浓度的细胞分裂素与生长素等进行培养（表1），把处理好的茎段接种于以上的培养基中。接种后的培养基均先常温暗室培养24 h，再转温室培养。温室培养环境温度为23～25 ℃，每天12 h光照，光照强度为1 500～2 000 Lux。记录芽的萌发时间和分化数量。
1.3铁冬青继代增殖的培养基
芽的继代增殖设置不同质量浓度的无机盐、细胞分裂素和生长素。当诱导的芽生长到2～4 cm时，剪切接种到继代增殖培养基上，接种30 d后记录数据。接种后的培养基均先常温暗室培养24 h，再转温室培养。温室培养环境温度为23～25 ℃，每天12 h光照，光照强度为1 500～2 000 Lux。
1.4数据处理分析
采用Excel和SPSS18.0进行数据方差分析。
2结果与分析
2.1不同质量浓度的细胞分裂素和生长素对铁冬青芽诱导的影响
诱导出的芽有单芽也有丛芽。不同质量浓度的6BA对芽的诱导也存在显著差异。表1可见，1 mg/L 的6BA相对于其他浓度，可以在芽的萌发时间有较显著的缩短，萌芽条数也有一定量的增殖，且芽的生长也较好。IAA对萌芽的生长有一定的影响，并没有6BA效果明显。在含6BA浓度为05 mg/L的情况下，增量的IAA只对萌芽条数有影响。不同含量的IAA在1 mg/L6BA下均可诱导芽的增殖。根据萌芽的生长状况，处理6中的激素比在诱导芽的生长状况上效果最好。
2.2继代培养基中无机盐和激素质量浓度对铁冬青芽增殖的影响
在含不同质量浓度的无机盐处理中，均有丛生芽产生。表2可见，处理C和处理F的增殖系数最高。1/2MS培养基中，含高浓度细胞分裂素和生长素的增殖系数有明显差异。说明在低浓度的无机盐培养基中提高激素含量可以影响芽的增殖。在MS培养基中，激素影响增殖效果并不显著。说明在充足的无机盐培养基中，激素含量并不是影响增殖的主要因素。综合增殖芽的生长状况，处理C和处理F均可以作为铁冬青较好的继代培养基，考虑生产成本的情况下，处理C的为最优。
3小结与讨论
通过茎段诱导芽的培养基情况比较，得出6BA对芽诱导有主导作用，添加量以1 mg/L最为合适，IAA对芽产生能起一定的促进，表现为促进了芽的增殖。但6BA和IAA所用配比不同，导致分化芽的生长情况不同，在添加1 mg/L的6BA，IAA添加到02 mg/L为最佳。
高浓度的无机盐培养基相对于质量浓度减半的培养基有较高的增殖系数。但在加入高浓度的细胞分裂素和生长素后，1/2MS和MS培养基的增殖差异就不显著了。说明在1/2MS培养基中加入足量的激素可以促进增殖，可以达到增加无机盐的质量浓度的效果。处理C和处理F的激素浓度：6BA 15+IAA 05的效果对芽的增殖有较好作用。
综合本实验结果，可得出铁冬青芽诱导增殖培养的方案：选用带芽茎段经过消毒后，裁切转入芽的诱导培养基（处理1）上。待产生足够量的芽，以这些无菌芽作为中间繁殖体，转入继代培养基（处理C）再进一步扩繁。由于本试验仅对铁冬青的芽诱导和继代阶段进行初步研究，得出的也仅为诱导和继代较好的方案，对运用到实际生产中扩繁过程、生根阶段具体培养基配方的配比，需要待进一步的研究。
参考文献
[1]药用植物图像数据库[DB]. 香港浸会大学中医药学院.http：//libproject.hkbu.edu.hk/was40/detail？lang=cn&record=1&channelid=1288&searchword=%28%E9%93%81%E5%86%AC%E9%9D%92%29&extension=all.
[2]中国科学院中国植物志编委会.中国植物志：第 45卷第二分卷[M].北京：科学出版社，1999：13.
[3]刘济祥，朱培林.优良观果树种铁冬青播种育苗试验研究[J].中国林副特产，2008（3）：2829.
[4]温美霞，黄焱辉，胡松竹.铁冬青扦插繁殖技术研究[J].安徽农业科学，2010，38（18）：94239425.
[5]陈正华.木本植物组织培养及应用[M].北京：高等教育出版社，1986.3755.
（责任编辑：夏剑萍）
摘要：以3 a生铁冬青茎段为外植体，探讨不同培养基对铁冬青芽诱导和增殖效果。结果表明：铁冬青采用MS+6BA 1 ml/L+IAA 02 ml/L诱导，增殖培养基采用1/2MS+6BA 15 ml/L+IAA 05 ml/L，增殖系数为33。
关键词：铁冬青；诱导；增殖
中图分类号：S792文献标识码：A文章编号：1004-3020（2017）04-0023-02
A Preliminary Study on the Induction and Proliferation of the Bud of Ilex
Yan RongbinPang Yongrong
（Yulin Forestry Research InstituteYulin537501）
Abstract： Using 3 year old stem segments of pig iron as explants， the effects of different media on the induction and proliferation of the buds were studied. The results showed that 0.2 ml/L was induced by MS+6BA 1 ml/L+IAA， the proliferation medium was 1/2MS+6BA 1.5 ml/L+IAA 0.5 ml/L， and the proliferation coefficient was 3.3.
Key words：Ilex rotunda；inducing；propagating
铁冬青（Ilex rotunda），别名熊胆木、羊不食、七星香、万紫千红等。可入药，常用于清熱解毒，消肿止痛；用于感冒，扁桃体炎，咽喉肿痛，急性胃肠炎，风湿骨痛；外用治跌打损伤，痈疖疮疡，外伤出血，烧烫伤，具有较高的药用价值[1]。因树体形态优美，花多且密集，常用作行道树和庭院绿化[2]。铁冬青的育苗用一般采用种子播种为主[3]，也有研究表明可以用扦插的方法培育[4]。本试验探索铁冬青的组织培养的可行性，便于铁冬青的育苗生产。
1材料与方法
1.1试验材料
玉林市林科所3 a生铁冬青绿化苗，选取刚进入木质化且无病虫害的枝条作为外植体。常规清理外植体表面后，在超净工作台进行灭菌消毒。消毒方法采用：75%乙醇处理15～20 s和01%升汞处理9～10 min，无菌水洗涤5～6次。裁剪腋芽未萌发茎段作为进行诱导芽的材料。
1.2诱导铁冬青芽的培养基
以MS为基本培养基[5]，内含30 g/L蔗糖、3 g/L琼脂，pH值58～59。分别设置不同质量浓度的细胞分裂素与生长素等进行培养（表1），把处理好的茎段接种于以上的培养基中。接种后的培养基均先常温暗室培养24 h，再转温室培养。温室培养环境温度为23～25 ℃，每天12 h光照，光照强度为1 500～2 000 Lux。记录芽的萌发时间和分化数量。
1.3铁冬青继代增殖的培养基
芽的继代增殖设置不同质量浓度的无机盐、细胞分裂素和生长素。当诱导的芽生长到2～4 cm时，剪切接种到继代增殖培养基上，接种30 d后记录数据。接种后的培养基均先常温暗室培养24 h，再转温室培养。温室培养环境温度为23～25 ℃，每天12 h光照，光照强度为1 500～2 000 Lux。
1.4数据处理分析
采用Excel和SPSS18.0进行数据方差分析。
2结果与分析
2.1不同质量浓度的细胞分裂素和生长素对铁冬青芽诱导的影响
诱导出的芽有单芽也有丛芽。不同质量浓度的6BA对芽的诱导也存在显著差异。表1可见，1 mg/L 的6BA相对于其他浓度，可以在芽的萌发时间有较显著的缩短，萌芽条数也有一定量的增殖，且芽的生长也较好。IAA对萌芽的生长有一定的影响，并没有6BA效果明显。在含6BA浓度为05 mg/L的情况下，增量的IAA只对萌芽条数有影响。不同含量的IAA在1 mg/L6BA下均可诱导芽的增殖。根据萌芽的生长状况，处理6中的激素比在诱导芽的生长状况上效果最好。
2.2继代培养基中无机盐和激素质量浓度对铁冬青芽增殖的影响
在含不同质量浓度的无机盐处理中，均有丛生芽产生。表2可见，处理C和处理F的增殖系数最高。1/2MS培养基中，含高浓度细胞分裂素和生长素的增殖系数有明显差异。说明在低浓度的无机盐培养基中提高激素含量可以影响芽的增殖。在MS培养基中，激素影响增殖效果并不显著。说明在充足的无机盐培养基中，激素含量并不是影响增殖的主要因素。综合增殖芽的生长状况，处理C和处理F均可以作为铁冬青较好的继代培养基，考虑生产成本的情况下，处理C的为最优。
3小结与讨论
通过茎段诱导芽的培养基情况比较，得出6BA对芽诱导有主导作用，添加量以1 mg/L最为合适，IAA对芽产生能起一定的促进，表现为促进了芽的增殖。但6BA和IAA所用配比不同，导致分化芽的生长情况不同，在添加1 mg/L的6BA，IAA添加到02 mg/L为最佳。
高浓度的无机盐培养基相对于质量浓度减半的培养基有较高的增殖系数。但在加入高浓度的细胞分裂素和生长素后，1/2MS和MS培养基的增殖差异就不显著了。说明在1/2MS培养基中加入足量的激素可以促进增殖，可以达到增加无机盐的质量浓度的效果。处理C和处理F的激素浓度：6BA 15+IAA 05的效果对芽的增殖有较好作用。
综合本实验结果，可得出铁冬青芽诱导增殖培养的方案：选用带芽茎段经过消毒后，裁切转入芽的诱导培养基（处理1）上。待产生足够量的芽，以这些无菌芽作为中间繁殖体，转入继代培养基（处理C）再进一步扩繁。由于本试验仅对铁冬青的芽诱导和继代阶段进行初步研究，得出的也仅为诱导和继代较好的方案，对运用到实际生产中扩繁过程、生根阶段具体培养基配方的配比，需要待进一步的研究。
参考文献
[1]药用植物图像数据库[DB]. 香港浸会大学中医药学院.http：//libproject.hkbu.edu.hk/was40/detail？lang=cn&record=1&channelid=1288&searchword=%28%E9%93%81%E5%86%AC%E9%9D%92%29&extension=all.
[2]中国科学院中国植物志编委会.中国植物志：第 45卷第二分卷[M].北京：科学出版社，1999：13.
[3]刘济祥，朱培林.优良观果树种铁冬青播种育苗试验研究[J].中国林副特产，2008（3）：2829.
[4]温美霞，黄焱辉，胡松竹.铁冬青扦插繁殖技术研究[J].安徽农业科学，2010，38（18）：94239425.
[5]陈正华.木本植物组织培养及应用[M].北京：高等教育出版社，1986.3755.
（责任编辑：夏剑萍）
