NB-UVB联合复方白芷酊及卤米松乳膏对进展期白癜风患者AMMC细胞黑素合成量的影响
方兆珺 李俊杰 周韵聪
[摘要]目的：探究窄谱中波紫外线（NB-UVB）联合复方白芷酊及卤米松乳膏对进展期白癜风疗效及患者毛囊外根鞘无色素黑素细胞（AMMC）黑素合成情况的影响。方法：选取2016年12月-2019年3月在笔者医院皮肤科就诊的70例进展期白癜风患者，随机分成常规组（35例）和联合组（35例）。常规组给予卤米松乳膏+NB-UVB治疗，联合组在常规組的基础上加用复方白芷酊。两组患者均连续治疗24周。观察并比较两组疗效、不良反应发生情况及AMMC细胞黑素合成量。结果：治疗12周时，联合组与常规组总有效率比较差异无统计学意义（82.86% vs 68.57%，P>0.05）;治疗24周时，联合组总有效率高于常规组（97.14% vs 80.00%），差异有统计学意义（P<0.05）。两组均有少部分患者出现轻度红斑反应，均在治疗后自行缓解，无其他严重不良反应发生。联合组AMMC细胞黑素合成量为显著高于常规组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：卤米松乳膏+NB-UVB+复方白芷酊对进展期白癜风患者疗效显著，能够提高AMMC细胞黑素合成量，有效促进白斑消退，缓解其临床病症，值得临床推广与应用。
[关键词]进展期白癜风;窄谱中波紫外线;复方白芷酊;卤米松乳膏;毛囊外根鞘;无色素黑素细胞;黑素合成
Abstract： Objective? To investigate the effect of narrow-band ultraviolet B （NB-UVB） combined with compound angelica dahurica tincture and halometasone cream on on the efficacy of vitiligo and melanin synthesis of amelanotic melanocytes （AMMC） in the outer root sheath of hair follicles in patients with progressive vitiligo. Methods? 70 patients with progressive vitiligo who visited the dermatological department of our hospital between December 2016 and March 2019 were randomly divided into the conventional group （35 cases） and the combined group （35 cases）. The conventional group was treated with halometasone cream +NB-UVB， while the combined group was treated with compound dahurian angelica tincture on the basis of the conventional group. All patients were treated continuously for 24 weeks. The curative effects， the occurrence of adverse reactions and in the two groups were observed and compared. Results? After 12 weeks of treatment， there was no significant difference in the total effective rate between the combined group and the conventional group （82.86% vs 68.57%， P>0.05）. At 24 weeks of treatment， the total effective rate in the combined group was higher than that in the conventional group （97.14% vs 80.00%， P<0.05）. A small number of patients in both groups developed mild erythema reaction， which were relieved after treatment without other serious adverse reactions. The amount of melanin synthesis in AMMC cells in the combined group was significantly higher than that in the conventional group， and the difference was statistically significant（P<0.05）. Conclusion? Halometasone cream +NB-UVB+ compound angelica dahurica tincture has a significant effect on patients with advanced vitiligo. It can improve melanin synthesis of AMMC cells， effectively promote leukoplakia regression. It is worthy of clinical promotion and application.
Key words： progressive vitiligo; narrow-band ultraviolet B （NB-UVB）; compound angelica dahurica tincture; halometasone cream; outer root sheath of hair follicle; amelanotic melanocyte（AMMC）; melanin synthesis
白癜风是一种先天性或获得性色素脱失性皮肤病，主要病理特征为黑素细胞渐进性、选择性破坏，亦有研究证实其属于器官特异性自身免疫性皮肤病，T细胞亚群水平，与其病情进展密切相关[1-3]。现阶段，白癜风治疗方法及药物种类众多，但尚无根治办法。如何选择药物以提高白癜风的治疗效果仍为当下研究热点之一。窄谱中波紫外线（Narrow-band Ultraviolet B，NB-UVB）及复方白芷酊、卤米松乳膏等药物治疗是当下常用治疗方法，但关于其联合应用对白癜风的疗效研究报道甚少[4-5]。基于此，本研究对笔者医院皮肤科就诊的70例进展期白癜风患者为研究对象进行对比性研究，旨在为提高白癜风临床治疗效果提供依据，现报道如下。
1? 资料和方法
1.1 一般资料：经医院医学伦理研究委员会审核通过后，选取2016年12月-2019年3月在笔者医院皮肤科就诊的进展期白癜风患者，共70例，根据入院顺序随机分成常规组（35例）和联合组（35例）。常规组：男16例，女19例;年龄21～56岁，平均（34.42±8.43）岁;皮损面积1%～5%，平均（3.27±0.84）%;病程：1个月～15年，平均（8.57±4.04）年;局限型12例，散在型4例，泛发型19例。联合组：男15例，女20例;年龄18～57岁，平均（36.19±8.89）岁;皮损面积1%～5%，平均（3.19±0.82）%;病程：1个月～15年，平均（8.57±4.04）年;局限型13例，散在型5例，泛发型17例。常规组和联合组进展期白癜风患者的性别、年龄、病程、白癜风类型等一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有均衡性。
1.2 纳入标准：①符合《白癜风诊疗共识2018版》中进展期白癜风的相关症状、临床诊断标准及分型[6];②年龄18～60岁，临床资料完整，签署知情同意书;③近1个月内未用过免疫调节剂、抗白癜风药物、抗白癜风物理治疗;④皮损无明显感染征象者;⑤无血液系统疾病、活动性消化道病史、脏器出血性病史者。
1.3 排除标准：①合并银屑病、湿疹、特应性皮炎、梅毒性白斑、多形性日光疹、贫血痣、头癣、无色素痣等其他皮肤病者;②合并自身免疫疾病、恶性肿瘤以及肝肾系统等严重受损者;③皮肤光过敏、存在紫外线照射禁忌、对本研究所用药物过敏者;④合并精神病史、吸毒史、酗酒者;⑤2周内外用过皮质类固醇药物者。
1.4 脱落标准：①疗程中出现症状加重者;②受试期间合并应用其他可能影响白癜风治疗效果的药物者;③未按时复诊者;④不愿继续进行临床试验，主动退出者。
1.5 方法
1.5.1 常规组：给予常规治疗。首先予以卤米松乳膏（生产企业：香港澳美制药厂，批准文号：HC20100039，规格：10g）外用，皮损处涂抹，2次/d;然后给予NB-UVB治疗仪（型号：UVl00L，德国Waldmann公司）照射皮损处，起始剂量为最小红斑量的70%，若出现水疱或红斑持续超过72h，下次治疗剂量减少20%～50%，且治疗时间应推后至症状消失;若以起始剂量持续治疗4次后未出现红斑或红斑持续时间<24h，治疗剂量可增加10%～20%;若红斑持续24～72h，则维持原剂量治疗。每周2～3次。
1.5.2 联合组：在NB-UVB治疗后加用复方白芷酊（生产企业：北京市非凡制药厂，国药准字：B20020555，规格：50ml），于皮损处涂抹，2次/d。两组患者均连续治疗24周。
1.6 疗效评定：全程监测所有患者的生命体征，于治疗前、治疗后12周、24周行常规检查，同时由同一医师对患者皮损分布、面积、色素、白斑消退等的变化情况测量、对比及拍照存档以评价临床疗效，可分为痊愈、显效、有效、无效。白斑全部消退，恢复正常肤色记为痊愈;复色面积≥50%皮损面积，白斑部分消退或缩小记为显效;复色面积为10%～49%，白斑小部分消退或缩小记为有效;复色面积<10%皮损面积，白斑无色素再生或范围扩大记为无效。总有效率=（痊愈+显效+有效）例数/总例数×100%。
1.7 观察指标：毛囊外根鞘无色素黑素细胞（AMMC）黑素合成情况：分别于治疗前后采集两组相关组织并进行培养得AMMC细胞，参照Ando等[7]的方法对黑素合成情况进行测定。AMMC细胞培养：把组织剪成小块，在1% PBS（含20μg/ml庆大霉素、双抗）中浸泡1h;再在0.5%～1%的Dispase中浸泡过夜;于第2天分离表皮、真皮，将表皮放入0.05%～0.1% Trypsin，并在37℃培养箱孵化15min，同时加入等量的10%胰酶抑制剂;然后取1 000g离心7min，加入1% PBS洗1遍;分别取3×106细胞放入培养瓶（75cm2），加入相应的黑色素细胞培养液。黑素合成情况测定：收获AMMC细胞后，用血细胞计数器计数，PBS液洗2次，依次加入200μl双蒸水、1ml的乙醇、乙醚混合液（1：1）放置15min（室温），离心5min（3 000r/min），取沉淀加入1ml NaOH（1mol/L，含10% DMSO），置80℃环境下30min溶解黑素，加入双蒸水4ml把NaOH稀释成0.2mol/L，然后分光光度计测定黑素的吸光度（A475nm） 。黑素含量可表示为（药物处理组A475nm/细胞数）/（空白对照组A475nm/细胞数）×100。每一实验重复4次。
1.8 统计学分析：患者白斑消退情况为计数资料，以例数（百分数）[例（%）]表示，使用卡方检验进行分析;AMMC细胞黑素合成情况为计量资料，使用均數±标准差（x?±s）来表示，组间比较使用独立样本t检验，组内比较使用配对t检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。使用SPSS 17.0统计软件进行分析。
2? 结果
2.1 两组治疗后12周、24周白斑消退情况比较：治疗12周时，联合组总有效率为82.86%，常规组总有效率为68.57%，组间比较差异无统计学意义（P>0.05）;治疗24周时，联合组总有效率为97.14%，常规组总有效率为80.00%，组间比较差异有统计学意义（P<0.05），见表1。
2.2 两组不良反应发生情况比较：两组均有少部分患者出现轻度红斑反应，均在治疗后自行缓解，无其他严重不良反应发生。
2.3 两组治疗后AMMC细胞黑素合成情况比较：治疗前患者AMMC细胞黑素合成情况设定为1，治疗后，联合组AMMC细胞黑素合成量为4.32±1.27，常规组为3.29±1.15，联合组显著高于常规组，差异有统计学意义（t=3.557，P=0.001）。
3? 讨论
白癜风病因及发病机制较为复杂，临床主要表现为皮肤黏膜脱色性白斑。进展期白癜风患者多表现为皮损逐渐扩大、增多，可伴痒感等，严重影响患者的身心健康。在为进展期白癜风患者制定治疗方案时，应当充分明确其临床分型、皮损面积、部位、既往治疗史和家族史等一般资料，并根据其制订合理治疗方案[8]。随着中西医的不断发展，中西医结合治疗白癜风成为当下的热点。其中，NB-UVB为常用西医疗法。而白癜风的治疗在中医中已有几千年历史，复方白芷酊为其临床常用中药，具有良好的祛风散邪、养血活血等功效[9-10]。本研究采用NB-UVB联合复方白芷酊对进展期白癜风患者进行治疗取得了较好效果。
祖国医学认为，风邪挟瘀是进展期白癜风的主要病理机制，又称白驳风、白癜等，文献记载：“白癜风……肝肾亏虚，风邪挟瘀阻络而致病”，故临床治疗应以祛风散邪、养血活血、滋补肝肾为主[11]。复方白芷酊主药为补骨脂、白芷、蛇床子，同时辅以防风、冰片、秦艽、马齿苋、甘草、栀子等，其中补骨脂等可补气补血、滋养肝肾、理气活血;甘草、白芷等可润泽、祛风、发散通络;甘草可调和诸药，全方可养血益肤、祛风通络、调和气血、润泽颜色、乌鬓等对进展期白癜风患者发挥较好的治疗效果。此外，复方白芷酊的主药中均含有呋喃香豆类成分，配合NB-UVB照射后，可抑制表皮细胞DNA的合成、细胞的分裂，亦可增加细胞数量、提高其活性，还能使酪氨酸酶的活性显著增强，促进黑色素的生成，亦可保護黑素细胞DNA，使其避免氧化损伤，促进AMMC细胞黑素合成，从而使白斑恢复正常肤色[12-13]。故而，在常规治疗基础上加用复方白芷酊软胶囊，可显著提高治疗效果，治疗24周时，联合组总有效率高于常规组（97.14% vs 80.00%）。
卤米松乳膏为外用糖皮质类固醇药物，具有良好的收缩血管、抗过敏、抗炎、止痒、抗表皮增生等作用[14-15]。NB-UVB穿透性强，对皮肤的损伤及致癌性均较小，能够有效促进黑素细胞向皮损处移行，同时刺激或激活皮肤处及其周围黑素细胞产生黑素，进而促进毛囊黑素细胞增殖。复方白芷酊中的中药成分大多具有调节免疫的功能，进而有效改善T淋巴细胞的表达水平，且补骨脂、白芷则为光敏药物，可增强皮肤对紫外光的敏感性，进而有效激发黑素细胞内的酪氨酸酶，促进黑素的生成，蛇床子、秦艽、防风等则可活血通脉、改善局部微循环，加速黑素再生，亦可祛风止痒，缓解患者的临床症状[16-17]。故而，卤米松乳膏+NB-UVB+复方白芷酊对进展期白癜风患者具有良好的治疗作用，且不良反应发生较少，安全性高。
[参考文献]
[1]杨铠源，施伟民.益气祛白冲剂联合308nm准分子激光控制白癜风扩散及对白斑复色的影响[J].医学综述，2016，22（21）：4306-4308，4315.
[2]张倩，坚哲，刘玲，等.白癜风细胞免疫学发病机制研究进展[J].中国麻风皮肤病杂志，2018，34（1）：50-52.
[3]李博为，李舒丽，杨钰琪，等.白癜风免疫微环境对黑素细胞表达的影响[J].中国麻风皮肤病杂志，2017，33（1）：8-11.
[4]贾玲芝，王松芬.长波紫外线1联合复方卡力孜然酊治疗稳定期白癜风的临床疗效[J].医学综述，2018，24（20）：4152-4155，4160.
[5]Van TN，Minh TT，Huu DL，et al.Successful treatment of vitiligo vietnamese patients with vitilinex? herbal bio-actives in combination with phototherapy[J].Open Access Maced J Med Sci，2019，7（2）：283-286.
[6]林茂，张德利，刁庆春.毫火针联合补肾活血方对寻常型进展期白癜风的疗效及对血清可溶性细胞间黏附分子-1水平的影响[J].世界中医药，2019，14（5）：1306-1309.
[7]Ando H，Ztoh A，Mishima Y，et al.Correlation between the number of melanosomes，tyrosinase mRNA levels， and tyrosinase activity in cultured murine melanoma cells in response to various melanogenesis regulatory agents[J].J Cell Physiol，1995，163（3）：608-614.
[8]Li YL，Wang H，Qi RQ，et al.Proteomic analysis of the serum of patients with stable vitiligo and progressive vitiligo[J].Chin Med J（Engl），2018，131（4）：480-483.
[9]张蓓，陆捷洁.中药联合窄谱中波紫外线对白癜风患者治疗效果及对其免疫功能的影响[J].世界中医药，2018，13（9）：2244-2246.
[10]雷勇，王晶晶，张少光.中西医结合治疗对白癜风的临床疗效和血清炎性因子的影响[J].世界中医药，2016，11（6）：1016-1019.
[11]徐彦圣，孟莉.中药治疗白癜风的作用机制研究进展[J].上海中医药大学学报，2017，31（5）：102-106.
[12]陈婷.308nm准分子激光联合复方白芷酊治疗局限性白癜风疗效观察[J].江西医药，2016，51（10）：1118-1119.
[13]李剑，盛友渔，胡瑞铭，等.中药芪白颗粒治疗进展期白癜风的双盲随机对照研究[J].临床皮肤科杂志，2018，47（3）：182-185.
[14]吴敏，魏洪平，赵平鸽.对儿童过敏性紫癜免疫功能的影响及疗效观察[J].中国现代应用药学，2018，35（9）：1388-1392.
[15]罗光浦，王天晶，任盈盈，等.桂枝汤加味治疗气血不和型儿童白癜风及对自身免疫的调节[J].中国实验方剂学杂志，2017，23（22）：188-193.
[16]魏伟，何奕德，李萌，等.调节性T细胞在白癜风发病机制中的作用及治疗应用[J].中国美容医学，2018，27（1）：133-136.
[17]刘哲，曲生明，巫毅，等.白癜风的免疫学发病机制及吡美莫司治疗白癜风的研究进展[J].中国老年学杂志，2017，37（10）：2588-2592.
[收稿日期]2019-10-18
本文引用格式：方兆珺，李俊杰，周韵聪，等.NB-UVB联合复方白芷酊及卤米松乳膏对进展期白癜风患者AMMC细胞黑素合成量的影响[J].中国美容医学，2020，29（4）：105-108.
