B超检测技术在羊妊娠中的应用

    王青芳　夏凯凯　张佳兰

    摘要：B超检测技术应用于妊娠羊生产中有利于羊的科学饲养管理，提高繁殖率。妊娠诊断可通过直肠或腹壁B超进行诊断，在母羊妊娠30 d之后最敏感。妊娠最显著的特点是胎儿的心跳，其次是胎盘的发育。在妊娠早期至中期，可以确定胎儿数，从而估计产羔数。此外，在妊娠早期可由生殖结节的位置，在妊娠中期由外生殖器决定胎儿的性别。因此，B超诊断技术有利于不孕羊的淘汰和繁殖决策，可以估计胎儿数和识别胎儿性别，并根据检测结果在整個妊娠期给母羊提供适当的营养，最终有利于羊的健康和生长，提高生产效率和效益。

    关键词：B超检测技术；羊妊娠诊断；胎儿性别识别；胎儿数

    中图分类号：S826 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2018）04-0009-03

    随着养羊业由粗放饲养管理向集约化饲养转型及羔羊育肥技术的发展，品种改良对优良品种的需求增加，繁殖成为养羊业中最重要的环节。妊娠诊断可以提高羊的繁殖效率，减少空怀，降低饲养成本，提高养羊效益。相对于牛来说，羊的怀孕期短，怀孕后期有可能出现妊娠毒血症，较多品种的羊一胎多羔，所以羊的妊娠诊断在集约化饲养中特别重要。超声，也称超声波，是超过人耳听阈的声波，即每秒振荡次数（即振动频率）在20 000赫兹（Hz）以上声波。超声检测仪是将超声转变为电信号，并以波形、光点、声音等形式表示出来，形成影像的仪器[1]。超声检测技术从20世纪80年代开始用于临床兽医检测，具有快速、直观、准确、无损伤等特点[2]。兽医超声检测仪有几种型号。B型（Brightness mode）超声检测仪，简称B型（B-mode）超声或B超，是将回声信号以光点明暗的形式显示出来。光点的强弱反映回声界面反射和衰减超声的强弱。这些光点、光线、光面构成了被探测部位二维断层图像或切面图像，这种图像称为声像图[1]。B超检测与家畜生产结合用于家畜的发情鉴定、早期妊娠诊断、胎儿性别鉴定、卵巢及子宫疾病诊断、胎龄判断及胎儿发育情况监测等方面。近年来，随着超声检测图像清晰度的增加以及超声检测仪器的方便携带，超声检测技术在家畜上的应用越来越普遍。在羊方面传统的妊娠诊断技术存在劳动强度大，准确率低等缺点，且不利于空怀羊的重配，因此，B超检测技术应用于羊的妊娠，可以提高羊的繁殖效率，减少空怀，降低饲养成本。

    1 妊娠羊B超使用方法及注意事项

    B超检测技术在羊上可以通过直肠扫描和腹部扫描进行。直肠扫描需要保定羊并掏出直肠内蓄积的粪便。检查者蹲于羊体一侧，探头涂抹耦合剂后，将探头紧贴皮肤，朝向盆腔入口方向。因为需要保定羊并掏粪，比较费时；在直肠扫描技术不熟练的情况下有可能造成直肠穿孔。腹壁B超检查时，让羊侧卧（左侧卧），经润滑的探头在羊右侧腹股沟从后向前向着腹腔中间进行扫描。妊娠早期可在乳房两侧和乳房直前的少毛区扫描，妊娠中后期可在右侧腹壁进行定点扇形扫描。在少毛区检测不需要剪毛，侧腹壁检测需要剪毛。检查者也可蹲于羊的臀后，手持探头从羊两后肢中间伸向乳房进行扫查，侧腹壁被毛过长，影响检测部位时可提起检测一侧的后肢，暴露检测部位。在怀孕早期，妊娠的羊子宫充满液体，并被瘤胃挤向腹腔右侧，因此在右侧进行扫描比较适合。随着妊娠期的延长，子宫延伸到腹腔，靠近腹壁，这时就需要剔除腹壁的羊毛以便探头与皮肤充分接触。腹壁B超检查时探头不必进入羊体内，对羊的刺激较小，因此相对于直肠B超检查用在每只羊上的时间较少，速度较快。但是，因为看到的子宫图像重叠，因此观察胎儿数容易误差。一般来说，胎儿数和妊娠诊断的准确率随着胎儿数的增加而降低，但随着扫描经验的增加可以提高诊断准确性[3，4]。因此，当采用腹壁B超检查时，需要考虑品种的产羔率、母羊年龄和妊娠阶段等因素。

    2 早期妊娠诊断

    妊娠诊断是羊饲养管理的一部分。及时准确的妊娠诊断可以加强羊的饲养管理，提高羔羊成活率。B超检查发现子宫具有胚胎植入和胎儿的心跳的特征，说明胎儿已经生存，以此在羊上可以进行早期妊娠诊断。在怀孕的头20 d里，子宫位于盆腔内，与未孕羊子宫位置相同，因此很难区分母羊是否怀孕[5，6]。由于子宫位置的原因，直肠B超扫描非常适合早期妊娠诊断（一般在妊娠30 d之前），因为这时B超探头靠近子宫壁[6，7]。随着妊娠天数的增加，子宫延伸到腹壁，腹壁B超扫描图像受限制，也适合直肠B超扫描方法进行妊娠诊断[4，8]。对同一群羊在妊娠早期通过直肠和腹壁B超检查进行比较，直肠B超检查比较费时（分别为2.1 min/只、1.04 min/只），但在妊娠30 d前准确率高[9]，孕囊长度与妊娠日龄的关系较大[10]。然而，近年来成像技术的进步和曲线探头的发展提高了扫描的穿透深度，使腹壁B超扫描的范围更广。因此，使用新设备，腹壁B超扫描进行妊娠诊断可与直肠B超扫描相媲美。

    不管是直肠B超或腹壁B超扫描，母羊在妊娠40 d之前都能观察到相同的胎儿发育特点。妊娠可观察到的第一个特征是子宫角发育，变长变大，因此可以区分膀胱和妊娠的子宫。直肠B超扫描时，在妊娠17～19 d时可以观察到增加的子宫液性暗区[9，11-13]，腹壁B超扫描在妊娠25～28 d时才能观察到[4，12]。然而，子宫液性暗区并不是妊娠的惟一指标，子宫液性暗区也与发情和子宫异常有关。伴随着子宫液性暗区出现孕囊和胎儿的心跳才能确认母羊妊娠。许多报道关于羊妊娠15～30 d之间妊娠诊断及胎儿检测有差异，可能是B超的型号、羊的品种、胎儿数和操作人员技能差异造成的[14]。经直肠B超检查，在妊娠16 d时可以检测到胎儿心跳，在妊娠24～36 d时，妊娠准确率达90%。经腹壁B超检查，在妊娠27～30 d时可以检测到胎儿心跳。另外，多胎比单胎更早检测到胎儿，导致B超妊娠诊断时，多胎比单胎诊断时间早3 d[4]。

    随着检测到胎儿可以观察到胎盘结构的发育，胎盘进一步确认妊娠并建立母婴连接[11，15]。不管直肠或腹壁B超扫描，绵羊在妊娠32～33 d，可以直观地看到胎盘，最初呈不规则形状出现在子宫壁，在妊娠39～40 d时，形成中空半球结构[4，11]。类似的，山羊直肠B超扫描，可以看到在妊娠35 d时胎盘成像为小结节，在妊娠42 d后形成胎盘结构[11，16，17]。

    另外，妊娠早期，超聲扫描可以观察到胎儿的四肢、生殖器和脐带的发育。在绵羊，妊娠32～33 d时，可以观察到肢芽是从胎儿躯干开始延伸；在妊娠38 d时可以观察到生殖结节，在妊娠40 d时可以观察到胎儿腹部伸出的脐带，在妊娠42 d后可以观察到胎儿的肋骨[4]。在山羊，在妊娠39 d时可以观察到脐带，在妊娠42 d时可以观察到肢芽开始延伸，在妊娠48 d时可以观察到骼结构包括肋骨、脊柱和头骨[16]。

    总之，在确定配种时间的情况下，在配种后30～40 d进行早期妊娠诊断比较准确；在不知道配种时间的情况下，可在配种季节公母羊混群后的75 d，或者在公、母羊分群后的40 d进行妊娠诊断[18]。

    3 检查胎儿数量

    妊娠诊断及清楚母羊怀羔数有利于孕期饲养管理和助产。可以根据胎儿数的多少提供母羊适当的营养以满足胎儿生长需要，减少饲料成本。已知胎儿数可以估计妊娠母羊的预产期，在妊娠后期监控母羊妊娠危险因子或妊娠毒血症，并在母羊临产时及时管理。这些技术应用到羊生产实践中可以提高羔羊成活率和促进出生后的生长，提高后备母羊质量和商品羊的经济效益。

    一般来说，直肠或腹壁B超扫描确定胎儿数准确率随着胎儿数和妊娠期的增加而降低。在妊娠早期，妊娠诊断时可以识别单羔，识别多羔则要在妊娠31 d后，多羔识别的准确率大于80%[4，19-22]。然而，在妊娠70 d后，确定胎儿数的准确率下降，因为通过B超很难辨别胎儿之间的轮廓[20]。

    胎儿损失率使得预期的胎儿数减少，导致妊娠早期使用B超高估了胎儿数，在生产管理中应该考虑到这种情况。在羊上，妊娠25 d前胚胎和胎儿损失率最大，达到20%，妊娠25 d到产羔这段时间胎儿损失率下降[23，24]。另外，妊娠25 d后，大多数胎儿的损失导致胎儿数减少，而不是完全流产[23]。高估胎儿数量也可能是重复计算胎儿导致。在腹壁B超扫描时，观察点是子宫交叉部分而不是每个子宫角。为了避免高估胎儿数，Jones等[4]以在同一B超屏幕上看到的胎儿数作为腹壁B超扫描时的计数标准。双羔可以在妊娠的23～44 d时观察到，而三羔则能观察到的时间范围较窄，在妊娠25～34 d。总之，胎儿数预测准确率为78%，用这样的标准来确定胎儿数导致胎儿数比母羊真正怀胎数要少，反而使精确饲养管理比较困难。现在技术的发展使得B超仪器方便携带、灵明度高，适用于生产中检测大群羊，并能容易地检测母羊怀胎数。

    4 识别胎儿性别

    在妊娠35 d之后，生殖器结节的发展和迁移使得通过超声来辨别胎儿性别成为可能。生殖结节向脐带方向迁移则是雄性的象征，而向尾部迁移则是雌性的象征[25，26]。这种迁移发生在15 d的时间内，且在绵羊（妊娠35～51 d）比在山羊（妊娠40～55 d）更早观察到。在同一羊种中，雄性和雌性的生殖器结节的迁移发生的时间段相同[26]。在绵羊中，鉴定雄性比雌性更容易，100%的雄性单羔在妊娠60～69 d之间能被准确识别，而雌性只有77%被准确识别[25]。识别生殖器结节位置的能力可以通过实践来掌握。一旦掌握这项技能，不管任何品种就可以在妊娠早期结束之后和妊娠中期开始之前成功地识别胎儿性别[26，27]。妊娠50 d之后绵、山羊胎儿性别的识别主要靠识别外部生殖器结构，包括阴囊和外阴，因为生殖结节已经没法辨认[27]。然而，胎儿性别的准确性随着妊娠期的增加而减少，因为胎儿位置的原因很难直接看到外生殖器。在山羊中，胎儿性别指数在单羔和多羔之间没有差异[7]。然而，随着妊娠期的增加，胎儿性别识别的准确性下降。即在妊娠40～60 d之间，直肠B超声检查胎儿性别的准确率为93.3%；妊娠61～70 d之间，准确率下降到81.6%；在妊娠90～109 d准确率仅为56.8%[7]。由于胎儿性别鉴定比较费时，而母羊怀多羔时，有利的信息较少，所以在大群的商品羊群中没有必要进行胎儿性别鉴定，而对育种群进行胎儿性别鉴定有利，例如选留种公羊，培育繁殖群等。

    5 小结

    B超检测技术在绵、山羊生产中还没有广泛应用。在羊饲养管理比较粗放的条件下，早期妊娠诊断可以预测分娩日期和胎儿数，从而确保母羊妊娠后期及产前的饲养管理。生产中就可以根据胎儿数和NRC建议科学地饲养管理母羊，增强妊娠后期饲喂的准确性，最终降低饲料成本，可以根据早孕诊断结果淘汰不孕羊或重配空怀羊。总之，B超诊断技术用于妊娠羊中可以进行早期妊娠诊断、估计胎儿数以及鉴定胎儿性别。早期妊娠诊断最好在妊娠30～40 d时，通过直肠超声检测的方式来进行准确率最高。胎儿数的检测在妊娠早期最准确，多胎最好在同一超声屏中都能看到胎儿以保证同一胎儿只计数一次。在绵山羊妊娠35～60 d时通过检测生殖结节或外生殖器鉴别性别最准确。

    参考文献：

    [1] 熊道焕，王书林，陈兆英，等.兽医超声诊断学[M]. 北京： 中国农业出版社，1992.

    [2] GINTHER O J. How ultrasound technologies have expanded and revolutionized research in reproduction in large animals[J].Theriogenology，2014，81：112-125.

    [3] FRIDLUND C， HUMBLOT P， BAGE R， et al. Factors affecting the accuracy of pregnancy scanning in ewes[J].Vet Rec，2013，173：607.

    [4] JONES A K， GATELY RE， MCFADDEN K K， et al. Transabdominal ultrasound for detection of pregnancy， fetal and placental landmarks， and fetal age before day 45 of gestation in the sheep[J].Theriogenology，2016，85：939-945.

    [5] BUCKRELL B C. Applications of ultrasonography in reproduction in sheep and goats[J].Theriogenology，1988，29：71-84.

    [6] GARCIA A，NEARY M K，KELLY G R，et al. Accuracy of ultrasonography in early pregnancy diagnosis in the ewe[J].Theriogenology，1993，39：847-861.

    [7] AMER H A. Determination of first pregnancy and foetal measurements in Egyptian Baladi goats （Capra hircus）[J].Vet Ital，2008，44：429-437.

    [8] KANDIEL M M，WATANABE G，TAYA K. Ultrasonographic assessment of fetal growth in miniature Shiba goats（Capra hircus）[J].Anim Reprod Sci，2015，162：1-10.

    [9] 田 超，楊开红. 湖羊体表和直肠超声妊娠检查方法对比[J]. 中国兽医杂志，2015，51（11）：64-65.

    [10] PETRUJKIC B T，COJKIC A，PETRUJKIC K，et al. Transabdominal and transrectal ultrasonography of fetuses in Wurttemberg ewes：correlation with gestational age[J].Anim Sci J，2016，87：197-201.

    [11] DOIZE F，VAILLANCOURT D，CARABIN H，et al. Determination of gestational age in sheep and goats using transrectal ultrasonographic measurement of placentomes[J].Theriogenology，1997，48：449-460.

    [12] PADILLA-RIVAS G R，SOHNREY B，HOLTZ W.Early pregnancy detection by real-time ultrasonography in Boer goats[J].Small Rumin Res，2005，58：87-92.

    [13] AMER H A. Ultrasonographic assessment of early pregnancy diagnosis，fetometry and sex determination in goats[J].Anim Reprod Sci，2010，117：226-231.

    [14] FRIDLUND C，HUMBLOT P，BAGE R，et al. Factors affecting the accuracy of pregnancy scanning in ewes[J].Vet Rec，2013，173：607.

    [15] GANAIE B A，KHAN M Z，ISLAM R，et al. Evaluation of different techniques for pregnancy diagnosis in sheep[J].Small Rumin Res，2009，85：135-141.

    [16] KUMAR K， CHANDOLIA R K， KUMAR S， et al. Two-dimensional and three-dimensional ultrasonography for pregnancy diagnosis and antenatal fetal development in Beetal goats[J]. Vet World，2015，8：835-840.

    [17] KARADAEV M，FASULKOV I，VASSILEV N，et al. Ultrasound monitoring of the first trimester of pregnancy in local goats through visualisation and measurements of some biometric parameters[J].Bulg J Vet Med，2016，19：209-217.

    [18] BARBAGIANNI M S，IOANNIDI K I，VASILEIOU N G C，et al. Ultrasonographic examination of pregnant ewes：From early diagnosis of pregnancy to early prediction of dystocia[J].Small Ruminant Research，2017，152：41-55.

    [19] TAVERNE M A，LAVOIR M C，VAN OORD R，et al. Accuracy of regnancy diagnosis and prediction of foetal numbers in sheep with linear-array real-time ultrasound scanning[J].Vet Q，1985，7：256-263.

    [20] GEARHART M A，WINGFIELD W E，KNIGHT A P，et al. Real-time ultrasonography for determining pregnancy status and viable fetal numbers in ewes[J].Theriogenology，1988，30：323-337.

    [21] KAREN A，SAMIR H，ASHMAWY T，et al. Accuracy of B-mode ultrasonography for diagnosing pregnancy and determination of fetal numbers in different breeds of goats[J].Anim Reprod Sci，2014，147：25-31.

    [22] MEDAN M，WATANABE G，ABSY G，et al. Early pregnancy diagnosis by means of ultrasonography as a method of improving reproductive efficiency in goats[J].J Reprod Dev，2004，50：391-398.

    [23] DIXON A B，KNIGHTS M，WINKLER J L，et al. Patterns of late embryonic and fetal mortality and association with several factors in sheep[J].J Anim Sci，2007，85：1274-1284.

    [24] SAMIR H，KAREN A，ASHMAWY T，et al. Monitoring of embryonic and fetal losses in different breeds of goats using real-time B-mode ultrasonography[J].Theriogenology，2016，85：207-215.

    [25] COUBROUGH C A，CASTELL M C.Fetal sex determination by ultrasonically locating the genital tubercle in ewes[J].Theriogenology，1998，50：263-267.

    [26] AZEVEDO E M，DOS SANTOS M H，FILHO C R，et al. Migration time of the genital tubercle in caprine and ovine fetuses：comparison between breeds， sexes and species[J].Acta Vet Hung，2009，57：147-154.

    [27] DE FREITAS NETO L M，DOS SANTOS M H，DE AGUIAR FILHO C，et al. Ultrasonographic fetal sex identification in pregnant sheep derived from natural mating and embryo transfer[J].J Reprod Dev，2010，56：347-350.