重组禽流感病毒H5+H7二价灭活疫苗免疫效果初步评价
徐娟 王永雄 杜芬
摘要：为了解重组禽流感病毒（AIV）（H5+H7）二价灭活疫苗的免疫效果，对9家养禽场8万多羽家禽进行了免疫效果评价。结果显示，免疫后7 d内家禽死亡率低于0.1%，产蛋率下降幅度小于3%；按照推荐剂量免疫1次，H7亚型禽流感免疫抗体合格率达到90%以上，H5亚型禽流感免疫抗体合格率则低于30%，免疫2次后H5亚型禽流感免疫抗体合格率达到90%以上。分析认为，政府统一供应的重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗免疫副反应小，可放心使用，但须免疫2次才能产生良好的免疫效果。该试验对执行国家禽流感强制免疫政策、提高免疫效果具有实践指导意义。
关键词：H7亚型禽流感；H5亚型禽流感；免疫效果；副反应
中图分类号：S851.33 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2018）08-0010-03
2013年至2014年第一季度，人感染H7N9流感的冲击波给我国养禽业带来了不可挽回的巨大损失。自此，每年冬春季节防控家禽H7N9禽流感成为了各级畜牧兽医主管部门的首要任务。为全面减少易感动物，有效降低家禽感染和传播H7N9流感病毒的风险，2017年下半年，农业部将H7亚型禽流感全面纳入动物强制免疫病种。湖北省于10月份开始使用政府统一采购的重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗对所有存笼家禽实施普免。为了解重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗的免疫效果，正确指导养殖场户禽流感的免疫，我们组织开展了重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗的免疫效果观察评估工作。
1 材料与方法
1.1 主要试验对象和材料
试验选择荆州市松滋市4个乡镇（湖区乡镇和丘陵乡镇各2个）的9家家禽养殖场，共存笼家禽80 776羽，家禽品种涉及鸡、鸭、鹅。其中，养鸡场7家，共存笼59 826羽；养鸭场1家，存笼18 000羽；养鹅场1家，存笼2 950羽。免疫使用青岛xx生物工程有限公司生产的重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗（H5N1Re-8株+H7N9-Re1株），生产批号为171514501，有效期为20180813。免疫抗体检测试剂使用哈尔滨维科生物技术开发公司生产的禽流感5亚型、H7亚型血凝抑制抗原及阳性、阴性对照血清。
1.2 试验方法及判断标准
对供试家禽采用肌肉注射的方式免疫，观察记录免疫后7 d内的副反应情况。其中，场二首次免疫30 d后对其中已免疫的100羽进行第二次免疫。每次免疫剂量均为鸡0.5 mL/羽，鸭1 mL/羽，鹅1.5 mL/羽。对首次免疫群体分别于免疫10～47 d后随机抽样，对场二第二次免疫15 d后再次抽样。对所有采集血样检测H5和H7亚型禽流感免疫抗体。
禽流感免疫抗体采用血凝和血凝抑制（HA/HI）[1]试验方法检测。试验测得禽流感H5亚型阳性对照血清抑制效价为8log2，禽流感H7亚型阳性对照血清抑制效价为9log2，阴性对照血清抑制效价均<1log2。检测样本对应抗体抑制效价>4log2判定为抗体合格，群体抗体合格率≥70%认定群体抗体合格率达标。
2 结果与分析
2.1 免疫后7 d内副反应情况
9家家禽养殖场共免疫80 776羽，观察并记录免疫后7 d内免疫群体的免疫副反应[2]情况，重点观察禽死亡情况、精神状况、采食量和产蛋率（蛋禽）的变化等。详见表1。
由表1可见，免疫后7 d内被免疫群體产生的副反应较小，且不同种类家禽之间无明显差异。9个场中有5个场产生了不同程度的副反应；免疫的80 776羽家禽中，死亡22羽，其中19羽为发生跛行后被同群鸡踩踏致死；采食量下降的两个禽场均在3 d后恢复正常；处于产蛋期的5个蛋鸡场中有2家产蛋率下降2%～3%，其余无明显变化；1个鸭场在免疫后有20%的鸭出现精神不振和部分稀便的状况，调查发现该鸭群系散养在活动场内，分析认为精神不振可能与免疫时驱赶捕捉应激反应较大有关。
2.2 免疫抗体监测结果
2.2.1 H5亚型禽流感免疫抗体检测结果 对9个场点随机采集血样270份，检测270份，H5亚型禽流感免疫抗体合格193份，合格率71.5%。其中，6个场曾免疫注射过H5N1禽流感疫苗，H5亚型禽流感抗体免疫合格率均为100%。3个未免疫过H5N1禽流感疫苗的场H5亚型禽流感免疫抗体均不合格，免疫抗体合格率在0～30%之间，平均合格率为14.4%（表2）。
其中场二首免间隔30 d后在群体中随机抽取100羽进行了家禽重组禽流感病毒H5+H7二价灭活疫苗第二次免疫，二免15 d后采样检测，H5亚型禽流感抗体合格率从0上升为93.3%，平均抑制滴度从<1log2提高至5.92log2。
2.2.2 H7亚型禽流感免疫抗体检测结果 9个场点随机采集血样270份，检测H7亚型禽流感血样269份（其中1份无效），免疫抗体合格263份，合格率97.8%。各场点H7亚型禽流感免疫抗体合格率均在90%以上，其中6个场合格率为100%（表3）。
其中场二第二次免疫后H7亚型禽流感抗体平均滴度从7.33log2提高至9.75log2，抗体离散度从1.325降低至0.772。
2.2.3 不同类别、品种、日龄家禽之间的禽流感免疫抗体水平 不同类别家禽之间免疫抗体水平无明显差异。只免疫一次重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗，7个鸡场、1个鸭场和1个鹅场H7亚型禽流感免疫抗体合格率均在90%以上，未曾免疫过H5N1禽流感灭活疫苗的场一、场二、场五3个养禽场中鸡、鸭、鹅H5亚型禽流感免疫抗体合格率均≤30%（表4）。
不同品种之间抗体水平无明显差异。从监测的7个鸡场来看，肉用土鸡和蛋鸡，罗曼粉、海南褐、灵山土鸡的免疫抗体水平差异不大，H7亚型禽流感免疫抗体合格率均在90%以上，平均抗体滴度在5.20log2～7.03log2之间。由于场九免疫了两次重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活苗，所以其H7亚型禽流感平均免疫抗体水平明显高于其他鸡场。
不同日龄禽之间抗体水平无明显差异。8个只免疫一次重组禽流感（H5+H7）二价灭活疫苗的养禽场中试验家禽免疫日龄从35～510日龄不等，H7亚型禽流感免疫抗体水平差异不明显，平均抗体滴度在5.20log2～7.33log2之间。
3 结论
供试疫苗免疫副反应小，免疫后基本不影响家禽的生产性能，能为广大家禽养殖场（户）所接受。虽然疫苗使用说明书仅标注用于鸡，但本试验也用于鸭和鹅，其免疫效果与鸡无显著差异，建议及早申报备案用于水禽的免疫。
只免疫一次该疫苗H7亚型禽流感抗体合格率高于90%， H5亚型禽流感抗体合格率低于30%，加强免疫后H5亚型禽流感免疫抗体合格率达到90%以上，H7亚型禽流感免疫抗体水平和抗体离散度也明显向好。建议在生产实践中间隔4周左右进行加强免疫或补免H5N1禽流感疫苗。提示生产厂家对疫苗进一步改进，以期免疫一次即可保证H5、H7两种亚型禽流感免疫抗体达标，减少家禽养殖生产环节的免疫成本[3]。重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗的全面普免，减少了易感畜群，必将有效降低第六波H7亚型禽流感的发病和传播风险。
由于时间紧，本试验完全模拟生产实践中免疫程序操作，未设置空白对照组，也未对抗体水平的消涨规律作跟踪监测，无法进行差异性分析。副反应信息采集均来源于养殖场主的反映，可能与实际情况存在一定的偏差。
参考文献：
[1] 国家质量监督检疫检验总局.GB/T 18936—2003高致病性禽流感诊断技术[S].北京：中国标准出版社，2003.
[2] 胡至刚，孙泽祥，王维金，等.禽流感免疫接种后的不良反应观察[J].上海畜牧兽医通讯，2006（3）：44.
[3] 谭 伟，谢丽基，谢芝勋.禽流感病毒疫苗研究进展[J].广西农业科学，2014，45（3）：1492-1497.
