青年肺结核患者支气管肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群及炎症因子测定价值分析

2022.08.17

何晗唐柳生李世立董捷周游韦显珍

【摘要】?目的?探討青年肺结核患者支气管肺泡灌洗液（BALF）T淋巴细胞亚群、炎症因子表达情况及检测意义。方法?选择2018年1月～2019年11月就诊的青年肺结核患者43例作为青年患病组，选择同期就诊的老年肺结核患者43例作为老年患病组，选择同期体检的健康青年43人作为正常青年组，比较各组BALF中T淋巴细胞亚群、炎症因子水平。结果?青年患病组BALF中CD3+、CD4+表达水平显著高于老年患病组，NK表达水平显著低于老年患病组（P<0.01）;正常青年组BALF中CD3+、CD4+表达水平显著高于青年患病组，NK表达水平显著低于青年患病组（P<0.01）。青年患病组BALF中IFN-γ、IL-4、IL-12、IL-10表达水平显著低于老年患病组（P<0.01）;正常青年组BALF中IFN-γ、IL-4、IL-12、IL-10表达水平显著低于青年患病组（P<0.01）。正常青年组外周血中IgA表达水平显著低于青年患病组、老年患病组，青年患病组外周血中IgA表达水平显著低于老年患病组（P<0.05）。结论?青年肺结核患者BALF中T淋巴细胞免疫功能明显高于老年肺结核患者，但低于健康青年人，炎症反应较老年肺结核患者轻微，但在体液免疫方面无明显差异，检测青年肺结核患者BALF中T淋巴细胞亚群及炎症因子，有利于全面了解患者的细胞免疫功能，评估结核病灶严重程度，为治疗方案选择提供客观依据。

【关键词】?青年肺结核;支气管肺泡灌洗液;T淋巴细胞亚群;炎症因子

中图分类号：R521?文献标志码：A?DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2020.09.010

【Abstract】?Objective?To investigate the expression of T-lymphocyte subsets and inflammatory factors in bronchoalveolar lavage fluid （BALF） of young patients with pulmonary tuberculosis and its significance of detection.Methods?43 young patients with tuberculosis admitted to hospital from January 2018 to November 2019 were selected as young patients group，43 elderly patients with tuberculosis in the same period as old patients group，and 43 healthy young people who came to hospital for physical examination in the same period as normal young people group.And then，the levels of T-lymphocyte subsets and inflammatory factors in BALF of each group were compared.Results?The expression levels of CD3+ and CD4+ in BALF of the young patients group were significantly higher than those of the old patients group，but the expression level of NK was significantly lower than that of the old patients group （P<0.01）.The expression levels of CD3+ and CD4+ in BALF of the normal young people group were significantly higher than those of the young patients group，but the expression level of NK was significantly lower than that of the young patients group （P<0.01）.The expression levels of IFN-γ，IL-4，IL-12 and IL-10 in BALF of the young patients group were significantly lower than those of the old patients group （P<0.01）.The expression levels of IFN-γ，IL-4，IL-12 and IL-10 in BALF of the normal young people group were significantly lower than those of the young patients group （P<0.01）.The expression level of IgA in the peripheral blood of the normal young people group was significantly lower than that of the young patients group and the old?patients group，and the expression level of IgA in the peripheral blood of the young patients group was significantly lower than that of the old patients group （P<0.05）.Conclusion?The immune function of T-lymphocyte in BALF of young patients with pulmonary tuberculosis is significantly higher than that of old patients，but lower than that of healthy young people，and the inflammatory reaction is milder than that of old patients，but there is no significant difference in humoral immunity.The detection of T-lymphocyte subsets and inflammatory factors in BALF of young patients with pulmonary tuberculosis is conducive to fully understanding the cellular immune function of patients and evaluating?the severity of the tuberculosis focus，so as to provide an objective basis for the choice of treatment plan.

【Key words】?youth tuberculosis;BALF;T-lymphocyte subsets;inflammatory factors

肺结核是临床上常见的慢性肺部感染性疾病，是由结核分枝杆菌感染所致，具有严重传染性，患者常表现出咳嗽、咳痰、咯血、胸痛等症状，严重危及患者的身体健康，且多数患者因非特异性症状误诊、漏诊，导致治疗延迟，影响预后[1]。因此，在肺结核发病早期及时、准确诊断，对提高患者治疗效果具有重要意义。目前，诊断肺结核主要依靠细菌实验、病理活检、X线、血清学检测及临床症状观察等，其中结核杆菌培养是诊断肺结核的金标准，虽然具有较高灵敏度，但耗时长且含菌量少时不能快速、准确鉴别结核分枝杆菌。随着支气管镜技术的提高，其成为辅助诊断肺结核的重要手段[2]。研究发现，肺结核是以T淋巴细胞所介导的迟发型变态反应为主，机体被结核杆菌感染后产生保护性免疫作用，多为CD4+淋巴细胞释放的各种细胞因子而出现的免疫反应，分为Th1与Th2两种亚型，Th1与Th2的应答平衡在肺结核发病中起着决定性作用，Th1/Th2表达平衡被打破会促进结核分枝杆菌免疫逃逸的发生，Th1主要产生IFN-γ、IL-12，诱导细胞免疫，Th2主要分泌IL-4、IL-10，激活B细胞产生抗体以抑制巨噬细胞功能[3]。目前关于肺结核患者支气管肺泡灌洗液（BALF）中T淋巴细胞亚群、炎症因子表达情况的研究较少。因此，本研究通过检测43例青年肺结核患者T淋巴细胞亚群、炎症因子表达情况，并分析与老年肺结核患者、健康青年人群之间的差异，以期为肺结核的诊断、治疗提供参考依据，现报道如下。

1?资料与方法

1.1?一般资料

选择2018年1月～2019年11月于我院就诊的青年肺结核患者43例作为青年患病组，选择同期就诊的老年肺结核患者43例作为老年患病组，并选择同期来我院体检的健康青年人群43人作为正常青年组。按照世界卫生组织（WHO）年龄划分标准，青年人≤44岁，老年人≥60岁。青年患病组：男27例，女16例，年龄18～40（26.97±4.19）岁，BMI 21～24（22.71±1.76）kg/m2;老年组：男26例，女17例，年龄60～77（68.35±3.05）岁，BMI 22～25（23.05±1.93）kg/m2;正常青年组：男25人，女18人，年龄22～38（26.81±7.62）岁，BMI 21～24（22.86±1.84）kg/m2;三组患者的一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性，且本研究已征得我院医学伦理委员会批准。

1.2?纳入及排除标准

纳入标准：⑴均经影像学、病原菌检查及临床症状观察证实，符合《肺结核诊断和治疗指南》中的诊断标准，患者有咳嗽、咳痰、痰中带血症状，胸片检查提示有活动性肺结核，痰液经结核杆菌培养显示为阳性，抗酸染色为阳性[4];⑵具有正常的认知沟通能力;⑶首次发病，入院前未接受抗结核治疗;⑷签署知情同意书。排除标準：⑴合并内分泌疾病者;⑵合并恶性肿瘤者;⑶合并严重肝肾疾病者;⑷合并自身免疫疾病者;⑸合并其他肺部疾病或艾滋病者;⑹服用免疫抑制剂者;⑺妊娠期、哺乳期妇女。

1.3?方法

⑴按照《纤维支气管镜临床应用指南（方案）》中的操作方法进行肺泡灌洗，研究对象均予以阿托品0.5 mg、苯巴比妥100 mg肌肉注射，予以2%利多卡因咽部及鼻腔黏膜局部麻醉，采用日本Olympus公司生产的BF-1T-240支气管镜经口或鼻插入到右肺中叶或左肺舌段的支气管，将其顶端契入支气管分支开口，收集研究对象BALF 10 mL，采用美国BD公司生产的FACSCalibur型流式细胞仪抗体双标法对BALF中T淋巴细胞亚群进行分析，检测CD3+、CD4+、CD8+、NK表达水平，并准确计算CD4+/CD8+值，采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测IFN-γ、IL-4、IL-12、IL-10表达水平。⑵采集研究对象的外周静脉血5 mL于肝素抗凝管中，30 min内送检，采用ELISA法测定IgA、IgM、IgG表达水平。

1.4?统计学方法

采用SPSS 25.0计算数据，计量资料用（±s）表示，计量资料符合正态分布且方差齐性，采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，检验水准：α=0.05，双侧检验。

2?结果

2.1?三组BALF中T淋巴细胞表达情况比较

青年患病组BALF中CD3+、CD4+表达水平显著高于老年患病组，NK表达水平显著低于老年患病组（P<0.01）;正常青年组BALF中CD3+、CD4+表达水平显著高于青年患病组，NK表达水平显著低于青年患病组（P<0.01）。见表1。

2.2?三组外周血中IgA、IgM、IgG表达情况比较

正常青年组外周血中IgA表达水平显著低于青年患病组、老年患病组，青年患病组外周血中IgA表达水平显著低于老年患病组（P<0.01）。见表2。

2.3?三组BALF中炎症因子表达情况比较

青年患病组BALF中IFN-γ、IL-4、IL-12、IL-10表达水平显著低于老年患病组（P<0.01）;正常青年组BALF中IFN-γ、IL-4、IL-12、IL-10表达水平显著低于青年患病组（P<0.01）。见表3。

3?讨论

肺结核是目前全世界公认的健康难题，感染性强，感染率居高不下，致死率高，严重危及患者的生命安全。结核分枝杆菌是诱发肺结核的主要病原体，可在单核-巨噬细胞中生长、繁殖，当结核分枝杆菌侵入机体后，会产生T淋巴细胞介导的细胞免疫，导致大量炎症因子及促炎因子分泌，从而调控免疫反应[5]。支气管镜作为辅助手段应用于肺结核诊断中，通过BALF直接获取肺内免疫效应细胞，以检测肺部免疫状态，从而提高肺结核的诊断准确性[6]。T淋巴细胞是机体中细胞免疫的主要效应细胞，能够介入细胞的免疫反应，通过调节亚群细胞以调控机体免疫[7]。CD3+分布于T淋巴细胞表面，可起到信号转导作用，能够激活T淋巴细胞以使机体产生细胞免疫;CD4+是辅助性T淋巴细胞区域，能够促进免疫细胞增殖分化以增强免疫反应;CD8+有抑制免疫细胞增长的作用，能够刺激机体释放抑制性细胞因子从而抑制机体免疫功能，发挥免疫功能负调节作用，使免疫功能下降[8]。当机体受到结核分枝杆菌感染时，CD3+、CD4+表达水平降低，CD8+表达水平略有增高，导致机体免疫功能紊乱、失调，免疫功能下降，使得疾病发生[9]。NK细胞是机体免疫系统中参与排斥反应的固有细胞，具有强大的细胞溶解能力，可发挥防止病原体感染的作用，在结核分枝杆菌的机体免疫中发挥着重要作用，当机体被结核分枝杆菌侵入后，NK细胞被快速激活，通过细胞毒作用以杀伤结核分枝杆菌[10]。

本研究结果中，正常青年组BALF中CD3+、CD4+表达水平显著高于青年患病组，青年患病组BALF中CD3+、CD4+表达水平显著高于老年患病组。结果说明，与老年肺结核患者相比，青年肺结核患者的CD3+、CD4+表达下降幅度更小，其机体巨噬细胞或者效应性因子的激活作用仍存在，效应细胞对结核杆菌的吞噬作用未明显降低。对于青年肺结核患者来说，其免疫器官、组织机能良好，但受结核分枝杆菌感染、疲劳等因素影响，机体免疫功能出现暂时性降低，激活机体适应性免疫应答抑制病原菌，使得青年肺结核患者的免疫功能受损情况更为轻微，而老年肺结核患者免疫器官衰老，其组织器官机能降低，且常结合多种基础疾病，导致产生免疫细胞的能力降低，受到感染后机体的适应性免疫应答未被激活，导致CD3+、CD4+表达水平低于青年肺结核患者及健康青年。本研究中，正常青年组BALF中NK表达水平显著低于青年患病组，青年患病组BALF中NK表达水平显著低于老年患病组。结果提示，与老年肺结核患者相比，青年肺结核患者的NK表达下降幅度较小，究其原因在于青年肺结核患者被病原菌侵入后，其NK细胞激活，T淋巴细胞及适应性免疫应答随之激活，免疫调节系统为避免正常细胞被杀伤而抑制NK细胞表达，使得NK细胞表达率降低，而老年肺结核患者感染病原菌后，机体固有免疫发挥作用使得NK细胞被激活，在病原菌杀伤中起着主要作用[11]。

表2中，正常青年组外周血中IgA表达水平显著低于青年患病组和老年患病组，青年患病组外周血中IgA表达水平显著低于老年患病组。结果提示，肺结核患者的体液免疫功能受影响较小，仅IgA水平在各组中存在差异，IgA在机体黏膜防御中发挥着重要作用，具有抑制病原菌、抗病毒的作用。一些学者认为，Th1与Th2细胞在肺结核发生、发展、治疗及转归方面中起着重要作用，Th1在结核分枝杆菌感染会分泌IFN-γ等细胞因子以促使单核-巨噬细胞系统激活，IFN-γ能够促进Th1细胞增殖，从而增强抗病原菌的能力;Th2能够释放IL-4、IL-10等细胞因子，激活B细胞产生抗体，抑制巨噬细胞活化[12]。表3中，青年患病组BALF中IFN-γ、IL-4、IL-12、IL-10表达水平显著低于老年患病组，正常青年组BALF中IFN-γ、IL-4、IL-12、IL-10表达水平显著低于青年患病组。结果提示，结核分枝杆菌侵入机体后，导致Th1與Th2细胞失衡，机体分泌大量的炎症因子，通过检测BALF中炎症因子有利于了解机体炎症状态，反映病情严重程度，为寻找肺结核治疗的合适靶点提供帮助。

综上所述，青年肺结核患者BALF中T淋巴细胞免疫功能明显高于老年肺结核患者，但低于健康青年人，炎症反应较老年肺结核患者轻微，但在体液免疫方面无明显差异，检测青年肺结核患者BALF中T淋巴细胞亚群、炎症因子，有利于全面了解患者的细胞免疫功能，评估结核病灶严重程度，为治疗方案选择提供客观依据。

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（收稿日期：2020-02-19?修回日期：2020-05-12）

（编辑：潘明志）