止咳平喘合剂中药用成分东莨菪碱的安全范围研究

    杨勇帮 代薇薇

    

    

    

    摘要：目的 测定止咳平喘合剂中东莨菪碱的含量，根据东莨菪碱的毒性用法用量判定是否符合药用量规定，并判定出止咳平喘合剂的用法用量是否在安全用量范围内。 方法 色谱柱采用ZORBAX SB-C18柱（4.6×250 mm 5-Micron），流动相为甲醇—水（40∶60∶含0.02 mol·L-1醋酸钠、0.02%三乙胺、用冰醋酸调至pH为6），流速为1.0 mL·min-1，检测波长为205 nm，柱温是30℃。 结果 氢溴酸东莨菪碱在0.004～>0.016 mg·mL-1范围内线性关系良好，r=0.9999，平均回收率为100.1%，RSD=1.6。止咳平喘合剂成人每次口服量为50 mL，实验得到止咳平喘合剂中东莨菪碱含量为0.0075 mg·mL-1，换算即得成人每次口服东莨菪碱量为0.375 mg。另《中国药典》2015年版一部规定洋金花内服用量为0.3～>0.6 g，洋金花原料以东莨菪碱计不得少于0.15%，折算东莨菪碱量为0.45～>0.9 mg，得知止咳平喘合剂中东莨菪碱的含量在相关规定的用药安全范围内。 结论 该方法可用于止咳平喘合剂中東莨菪碱的含量测定，本方法简单便捷、准确度高。

    关键词：止咳平喘合剂;洋金花;东莨菪碱;HPLC;含量

    中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2021）04-0080-05

    止咳平喘合剂是医院住院部用来治疗哮喘咳嗽的协订处方，特别是中老年患者临床效果显著，治愈率高。其处方中的洋金花平喘止咳力强，适用于喘咳无痰，尤宜于寒性哮喘[1]。但本品有毒用药安全备受关注，对止咳平喘合剂处方质量标准进行研究，特别是对方中的东莨菪碱含量进行测定，保证临床患者的用药安全有效，意义重大。

    洋金花为茄科植物白花曼陀罗 Datura metel L.的干燥花。4～>11月初开时采收，晒干或低温干燥。具有平喘止咳，解痉定痛等功效[3]。在止咳平喘合剂中主要效用就是止咳平喘，与枇杷叶配伍使用，有清肺化痰、止咳平喘之功。洋金花中的主要成分是莨菪烷型生物碱，其中以东莨菪碱为主、莨菪碱次之，还有阿托品等[2]。东莨菪碱有毒，使用时需控制其用量。东莨菪碱口服极量为5毫克/次，致死量为8毫克左右[4]。

    1 仪器与试药

    1.1 仪器 高效液相色谱仪（Agilent 1260）、电子天平（赛多利斯BP211D-OCE）、紫外可见分光光度计（Agilent cary60）等。

    1.2 试药 止咳平喘合剂（医院自制）、 氢溴酸东莨菪碱对照品（中国食品药品检定研究院 批号：100049-201310，含量以91.7%）、甲醇（色谱纯）、冰醋酸（分析纯）、 纯化水（超纯水）等。

    2 方法条件确定

    2.1 紫外下检测波长扫描 紫外下多次测定得到对照品在紫外下最大吸收波长为195、205、215 nm。图1所示，波长在205 nm时吸光度最大为3.249。

    2.2 筛选流动相 流动相一：甲醇-水（40∶60;0.02 mol·L-1磷酸二氢钾、0.2%三乙胺、用磷酸调至pH为2），流动相二：甲醇-水（40∶60;0.02 mol·L-1醋酸钠、0.02%三乙胺、用冰醋酸调至pH为6）。如图2

    所示，流动相一，对照品出现两个峰，保留时间较短;流动相二，对照品出现一个峰，保留时间较适宜。最终选定，流动相为流动相二。

    2.3 柱温 在20、30、40℃ 3个不同的柱温下，平行进行实验3次，筛选出比较适宜的柱温。经过试验30℃时的出峰时间最短，最终选定柱温为30℃。

    2.4 色谱柱 通过比较不同的色谱柱，最终确定使用ZORBAX SB-C18柱（4.6×250 mm 5-Micron）分离效果良好。

    2.5 样品提取方法 对使用离心、中性氧化铝柱分离、氯仿萃取等方法进行比较分析并优化最终确定提取方法为：精密量取样品10 mL，用氨水调至碱性（pH 8～>9），再用氯仿萃取4次，每次10 mL。合并4次的氯仿液，置水浴上80℃蒸干。残渣加甲醇溶解，并定容至5 mL。

    3 溶液配制

    3.1 对照品溶液的制备 精密称取10 mg氢溴酸东莨菪碱，用甲醇溶解定容至25 mL，制得0.4mg·mL-1的溶液，再取5 mL溶液用甲醇定容至50 mL，制得0.04 mg·mL-1的对照品溶液。

    3.2 样品溶液的处理 精密量取样品10 mL置分液漏斗中，用氨水调至碱性（pH8-9），再用三氯甲烷提取4次，每次10 mL。合并氯仿溶液，置80℃水浴上蒸干。残渣加甲醇溶解至5 mL容量瓶，加甲醇定容至刻度，滤过，取续滤液，经0.45μm微孔滤膜滤过，即得。

    3.3 阴性对照溶液的处理 取不含洋金花药材的空白样品照样品溶液处理方法制备，即得阴性对照溶液。

    4 色谱条件

    固定相：ZORBAX SB-C18柱（4.6×250 mm 5-Micron），流动相：甲醇-水（40∶60;0.02 mol·L-1醋酸钠、0.02%三乙胺、用冰醋酸调至pH为6），柱温：30℃，进样量对照溶液10 μL、样品溶液20 μL，检测波长：205 nm。

    5 检测方法及结果

    5.1 专属性考察 按样品溶液处理方法处理阴性对照一份，进样20 μL。如图3所示，阴性对照在与对照品相近的保留时间段未出现样品峰，说明其它组分对实验无干扰。

    5.2 线性关系考察

    5.2.1 标准曲线的配制 取0.4 mg·mL-1对照品母液，加甲醇分别配制成浓度为0.16、0.08、0.04、0.02、0.01、0.005 mg·mL-1的溶液。

    5.2.2 线性关系的测定 取由对照品母液配制而成的6份溶液各一份，用微孔滤膜过滤，进样，测定峰面积，计算浓度和峰面积的回归方程，最后计算r值。见表1及图4。

    氢溴酸东莨菪碱在0.005～>>0.16 mg·mL-1范围内线性关系良好，r为0.9999。

    5.3 精密度实验 取浓度为0.04 mg·mL-1的对照品溶液，平行进样5次，每次进样10 μL，测定峰面积，计算RSD值。见表2。RSD值为0.27，实验的精密度良好。

    5.4 稳定性实验 取止咳平喘合剂样品溶液按照样品溶液处理方法处理一份，在0、0.5、4、8、32 h分别进样20 μL，分别测定峰面积，计算RSD值。见表3。

    RSD值为1.18，说明氢溴酸东莨菪碱在0～>32 h内稳定性良好。

    5.5 重复性实验 按照样品溶液处理方法，平行处理5个样品溶液，每个样品进样20 ul，测定峰面积，计算各个样品溶液中氢溴酸东莨菪碱的含量，计算含量的RSD值。见表4。RSD值为1.024，说明在进行此实验时，进样系统的重复性良好。

    5.6 样品溶液中氢溴酸东莨菪碱的含量比较 按照样品溶液处理方法平行处理三个批次的样品溶液各一份，各进样20 μL，进对照品溶液10 μL，测定各自的峰面积，计算氢溴酸东莨菪碱含量，进行3个批号止咳平喘合剂中氢溴酸东莨菪碱的含量比较。

    5.7 加样回收实验 取5 mL止咳平喘合剂样品溶液和1 mL浓度为0.0485 mg·mL-1对照品溶液置分液漏斗中，用氨水调至碱性（pH8～>9），用氯仿萃取4次，每次10 mL，合并氯仿溶液，置80℃水浴上蒸干，残渣加甲醇定容至5 mL，作为加样回收的样品。平行处理5份。分别进样20 μL，测定峰面积，计算各自的含量和回收率，最终计算回收率的RSD值。见表6。加样回收率在95～10%，RSD值为1.6。

    6 讨论

    东莨菪碱的安全性。据文献报道，东莨菪碱口服极量为5 mg/次，致死量为8 mg左右。根据《中国药典》2015版一部规定洋金花内服用量为0.3～>0.6 g，洋金花原料以东莨菪碱计不得少于0.15%，折算东莨菪碱量为0.45～>0.9 mg。

    每日用量：从试验得知，止咳平喘合剂氢溴酸东莨菪碱含量为0.0108 mg·mL-1，折算得到东莨菪碱含量为0.0075 mg·mL-1（东莨菪碱=氢溴酸东莨菪碱/1.445）[2]，本方洋金花用量1.5 g，最终制成250 mL药液。包装规格为50 mL/袋，共5袋。成人每次口服50 mL，换算即得每次口服东莨菪碱量为0.375 mg，疗程用量：每个疗程用药5次，换算即得每个疗程用藥量中含东莨菪碱1.875 mg。

    综上所述，止咳平喘合剂中东莨菪碱的含量在相关规定的用药安全范围内。

    参考文献：

    [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典临床用药须知（2010年版）中药饮片卷[M].北京：中国医药科技出版社，2010：903.

    [2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2015：1332.

    [3]盛涵恩，王红玲.桂附理中丸治疗不稳定型心绞痛心肾阳虚证临床研究[J].中医学报，2016，31（8）：1182-1185.

    [4]田育望.应用药理学[M].北京：中国中医药出版社，2008：75.

    [5]吕聪.东莨菪碱在急诊中的应用[J].临床荟萃，1994，9（8）：343-345.

    [6]陈朋朋，付传香，吴泽宇，等.东莨菪碱医药中间体的研究进展[J].安徽化工，2017，43（6）：1-4.

    [7]井佳楠，吕邵娃，王秋红，等.洋金花化学成分和药理作用及临床应用研究进展[J].中草药，2016，47（19）：3513-3521.

    [8]张宏利，杨学军，刘文国，等.曼陀罗化学成分与生物活性研究现状及展望[J].西北林学院学报，2004，19（2）：98-102.

    [9]Kirchner A.On the mydriatic alkaloids of Dature Arch Pharm.1905，243：309-328.

    [10]Bellila A，Tremblay C，Pichette A，et al.Cytotoxic activity of withanolides isolated from Tunisian Datura metel L[J].Phytochemistry，2011，72（16）：2031-2036.

    [11]李红红，陈朋朋，付传香，等.HPLC法同步测定洋金花中东莨菪碱和莨菪碱的含量[J].安徽化工，2018，44（5）：92-94.

    （收稿日期：2020-11-28）