山羊同时接种口蹄疫O—A—亚Ⅰ型三价灭活疫苗和小反刍兽疫活疫苗后30d内抗体动态研究

    邓林玉+杨登林+杨莉+黄丽+李盛琼+王文礼

    摘要：随机选择从未接种过小反刍兽疫（PPR）、口蹄疫（FMD）O-A-亚Ⅰ型三价灭活疫苗且经检测体内未含相关抗体的健康山羊40只，随机分成4组：第1组接种小反刍兽疫活疫苗，第2组接种口蹄疫O-A-亚Ⅰ型三价灭活疫苗，第3组同时接种小反刍兽疫活苗、口蹄疫O-A-亚Ⅰ型三价灭活疫苗，第4组不接种任何疫苗作为对照组，观察各组免疫副反应。在接种后7、14、21、28 d采血，用ELISA抗体检测试剂盒检测抗体动态。结果显示，接种后7 d时PPR单独免疫组和联合免疫组中PPR抗体阳性率均能达到80%；14～28 d时PPR抗体阳性率均能达到100%，PPR组和联合免疫组中同期PPR抗体OD450nm值之间比较差异均不显著；接种后第7天时FMD O-A-亚Ⅰ型三价灭活疫苗单独免疫组和联合免疫组中FMD O型抗体阳性率均能达到60%，14 d时FMD O型抗体阳性率均能达到100%；接种后14 d时FMD O-A-亚Ⅰ型三价灭活疫苗单独免疫组和联合免疫组中亚FMD亚Ⅰ型和A型抗体阳性率均能达到国家规定的70%的标准。

    关键词：小反刍兽疫（PPR）；口蹄疫O-A-亚Ⅰ型；联合免疫；抗体效价

    中图分类号：S858.27 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2016）07-0026-02

    小反刍兽疫（PPR）俗称羊瘟，是由小反刍兽疫病毒引起的一种急性病毒性传染病，主要感染小反刍动物，以发热、口炎、腹泻、肺炎为特征。口蹄疫（FMD）（属一类传染病）俗名“口疮”、“辟癀”，是由口蹄疫病毒所引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。主要侵害偶蹄兽，偶见于人和其他动物。其临诊特征为口腔黏膜、蹄部和乳房皮肤发生水疱。小反刍兽疫和口蹄疫是危害山羊的两种主要的传染病，生产实践中一般采用疫苗预防为主。本试验比较了单独接种口蹄疫O-A-亚Ⅰ型三价灭活疫苗和小反刍兽疫（PPR）活疫苗及同时接种两种疫苗后山羊体内抗体情况，旨在为实际生产中预防小反刍兽疫和口蹄疫提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    小反刍兽疫活疫苗：每头份疫苗含有的小反刍兽疫弱毒病毒至少为103TCID50，性状为乳白色或淡黄色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱落，加稀释液后迅速溶解，新疆天康畜牧生物技术股份有限公司生产，批号为2015023-2。

    牛羊口蹄疫O型-A型-亚洲Ⅰ型三价灭活疫苗（O/HB/HK/99株+AF/72+Asia-1/XJ/KLMY/04株）：含灭活的口蹄疫O型病毒O/HB/HK/99株、A型（AF/72）株和亚型Ⅰ（Asia-1/XJ/KLMY/04株）病毒株，灭活前病毒含量分别至少为107.0TCID50/mL或107.0LD50/mL，性状为乳白色或淡红色粘滞性均匀乳状液，中牧实业股份有限公司兰州生物制药厂生产，批号为1506001。

    试验用抗体检测试剂盒：小反刍兽疫抗体检测试剂盒（货号EPPPR-1002）Kernel.Inc制造。8150 Derry Street，Suite B，Harrisburg，PA 17111，USA 。口蹄疫O（货号7610420）、A（货号7610850）、亚Ⅰ型（货号7610870）抗体检测试剂盒均由荷兰莱利斯塔德农业公司生产。

    1.2 试验山羊分组和检测方法

    在某养羊场随机选择已断奶的且未经过任何疫苗免疫过的健康山羊40只，由专人饲养和管理，饲喂相同的草料和相同适量精料，自由饮水。试验前对所选的山羊进行全面健康检查，体重15 kg/只左右，呼吸为12～20次/min，脉搏为70～80次/min，体温在38.5～39.7 ℃，食欲正常，精神状态良好；经颈静脉采血检测，PPR抗体、FMD O型、A型、亚洲Ⅰ型抗体均呈阴性。40只山羊随机分成4组，第1组接种小反刍兽疫活疫苗，第2组接种口蹄疫O-A-亚Ⅰ型三价灭活疫苗，第3组同时接种小反刍兽疫活苗、口蹄疫O-A-亚Ⅰ型三价灭活疫苗，第4组不接种任何疫苗作为对照组，观察各组免疫副反应。在接种后7、14、21、28 d采血，用相应的抗体检测试剂盒检测抗体动态。

    1.3 结果判定

    使用小反刍兽疫抗体检测试剂盒和口蹄疫O-A-亚Ⅰ型抗体检测试剂盒分别检测各组山羊的抗体动态，具体方法及结果判定参照试剂盒说明书。

    1.4 数据统计和分析

    将所得样品OD450nm值用SPSS10.0软件的One-Way ANVOA方法进行统计学分析。

    2 结果与分析

    2.1 临床接种副反应

    接种疫苗后72 h内观察山羊，没有出现不良反应，其体温、呼吸、脉搏、饮食情况均在正常范围内。

    2.2 各组山羊血清抗体动态

    经检测，试验开始前所有被选择试验用山羊和试验开始后对照组山羊血清中均未检出PPR和FMD O、A和亚Ⅰ型抗体，说明整个试验期间，试验组山羊所产生的PPR和FMD O、A、亚Ⅰ型抗体均源自接种相应疫苗后而产生，山羊均不存在自然感染PPR和FMD O、A、亚Ⅰ型病毒后产生相应抗体的可能性。

    从PPR抗体阳性率变化方面来看，PPR活疫苗无论是单独免疫还是与FMD O、A、亚Ⅰ型三价灭活疫苗同时免疫，FMD O、A、亚Ⅰ型三价灭活疫苗在接种后28 d内对PPR抗体的产生没有任何负面影响，PPR单独免疫组和联合免疫组中PPR抗体阳性率均能达到80%；14～28 d时PPR抗体阳性率均能达到100%，两个试验组之间各期PPR抗体OD450nm值差异均不显著（P>0.05）。

    从FMD O型抗体阳性率变化看，无论FMD O、A、亚Ⅰ型三价灭活疫苗单独接种还是和PPR活疫苗同时接种山羊，在接种后14～28 d内FMD O型抗体阳性率均能达到100%，两试验组之间FMD O型抗体OD450nm均值差异不显著（P>0.05），两试验组与对照组相比较，其OD450nm均值均差异显著（P<0.05），说明PPR活疫苗和FMD O、A、亚Ⅰ型三价灭活疫苗同时接种，PPR疫苗在接种后7～28 d内对FMD O型抗体的产生没有任何负面影响。

    从FMD A型及亚洲Ⅰ型抗体阳性率变化看，FMD O、A、亚Ⅰ型三价灭活疫苗和PPR活疫苗同时接种山羊，PPR疫苗对FMD A型及亚洲Ⅰ型抗体的产生没有影响，FMD O、A、亚Ⅰ型三价灭活疫苗无论单独还是和PPR活疫苗同时接种，两试验组之间A型及亚洲Ⅰ型抗体OD450nm均值差异均不显著（P>0.05），而两试验组与对照组之间A型及亚洲Ⅰ型抗体OD450nm值比较均差异显著（P<0.05）。在接种后14 d时A型和亚Ⅰ型抗体阳性率均能达到70%；在接种后21d可达到100%的抗体阳性率。