血培养布鲁菌在实验室的鉴识
李艳
【摘要】目的 总结布鲁菌在血培养时的表现特性，对其正确鉴定识别。方法 通过对我院2018年8月～2019年1月共151例血培养阳性，经过鉴定为布鲁菌感染且血清学凝集试验阳性（1例为阴性）结果进行回顾性分析总结。结果 血培养时间平均为82.1 h阳性报警，生长曲线具有共同特征，血平板上生长缓慢。结论 实验室人员通过血培养生长曲线特征、菌落特点及生化反应正确识别布鲁菌，为临床提供诊断的金标准，帮助实验室人员及早做出防护，防止实验室感染。
【关键词】布鲁菌;血培养;平均阳性报警时间;生长曲线特征
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095.6681.2020.27..02
布鲁菌是一类人畜共患感染性疾病的病原体，主要通过接触染病牛羊，细菌可经完整的皮肤黏膜进入宿主体内，或者食用未煮熟的染病牛羊肉或奶制品，人类普遍对布鲁菌易感。布鲁菌进入人体后，首先侵犯局部淋巴结，并在淋巴结内生长繁殖形成感染灶，当细菌繁殖到一定数量便侵入血流并释放出内毒素，出现菌血症。外周血中培养出布鲁菌是诊断的金标准[1]，抽取血液进行培养是临床医生普遍使用且容易被病人及家属接受的诊断方法。本文通过对151例血培养检测出布鲁菌的病例资料进行回顾性分析，总结其在自动培养仪上生长曲线特点，转种后生长缓慢，菌落特征及一系列生化反应特点，为检验科微生物工作人员对本菌的正确识别提供参考，及早而准确发放血培养结果，为临床医生提供诊断依据，防止误诊和漏诊。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2018年8月～2019年1月我院门诊及住院病人根据2012年颁布的《布鲁氏菌病诊疗指南（试行）》确诊为布鲁氏菌病，外周血中均有布鲁菌生长的151例病人资料。虎红平板凝集试验（PAT）1+至4+（1例为阴性），血清抗体微量凝集试验：阴性1例，1：50阳性2例，1：100阳性23例，1：200阳性22例，1：400阳性29例，1：800阳性21例，≥1：800阳性53例。临床上表现为不同程度的发热、多汗、关节痛、肝脾肿大并有接触史[2]。
1.2 仪器与试剂
VersaTREK及配套使用的需氧培养瓶。辽宁迪浩生物科技有限公司生产的布鲁氏菌抗体检测试剂盒（虎红平板凝集法）。
1.3 标本采集
无菌采集10 mL血液至需氧培养瓶中，按仪器要求的程序放入培养仪，培养仪自动进行。
1.4 试验室鉴定
VersaTREK自动血培养仪发出阳性报警，查看生长曲线为下降的曲线（如图1），应该高度怀疑布鲁菌生长，为防止试验室污染和操作人员感染，然后按照无菌操作要求在生物安全柜中进行抽取混匀的培养瓶中的样本转种到马血平板和伊红美蓝平板上，放置在35～37℃、5～10﹪CO2培养箱中进行培养（平板上应做好标记，培养后的观察、取菌、接种等一系列的操作都应该在生物安全柜中进行）。24 h后观察血平板上有菌生长但不明显，无法辨识菌落形态。培养至48～72 h血平板上生长出较小、突起、边缘整齐、灰白色、湿润的菌落，麦康凯平板上不生长。取菌涂片进行革兰染色，油镜观察可见革兰阴性球杆菌（如图2），沙滩样。 尿素分解试验5～10分钟出现阳性，氧化酶、触酶阳性，能分解葡萄糖等糖类，产少量酸，能还原硝酸盐，不分解甘露醇，不形成靛基质，不利用枸橼酸盐，甲基红和VP试验阴性。与布鲁菌阳性标准血清发生肉眼可见的凝集反应。
2 结 果
布鲁菌在VersaTREK自动血培养仪上的生长曲线为下降的曲线，VersaTREK是根据感受到的培养瓶中气体压力变化自动报警，布鲁菌在生长过程中消耗气体，所以生长曲线为下降曲线。151例病例最短的报阳时间为53.0 h，最长报阳时间为209.7 h，平均报阳时间为82.1 h。接种到血平板上放置5～10%CO2培养箱进行培养24 h，可见细菌生长但无法辨识菌落特征。继续培养至48～72 h，可见细小、突起、边缘整齐、灰白色、湿润的菌落。革兰染色为阴性球杆菌，沙滩样，尿素分解试验5～10分钟出现阳性，氧化酶、触酶阳性，能分解葡萄糖等糖类，产少量酸，能还原硝酸盐，不分解甘露醇，不形成靛基质，不利用枸橼酸盐，甲基红和VP试验阴性，与布鲁菌阳性标准血清做玻片凝集试验，发生肉眼可见的颗粒凝集反应，可推断为布鲁菌生长。
3 讨 论
目前，布鲁氏菌病流行呈现新的趋势，出现分散点状，多发特点。病人多出现不同程度的反复发热、多汗、关节痛、肝脾肿大并有接触史，外周血中培养出布鲁菌是诊断的金标准[1]，抽取血液进行培养是临床医生普遍使用且容易被病人及家属接受的诊断方法。临床医生为寻找病源大多会进行血液培养，如果在VersaTREK培养仪上出现上述特征的生长曲线时，应高度怀疑布鲁氏杆菌感染，布鲁菌的主要致病物质是内毒素。光滑型菌的荚膜有较强的侵袭力，细菌产生的透明质酸酶和H2O2 酶可帮助细菌能通过完好的黏膜和呼吸道进入宿主体内，为避免实验室操作人员实验室内感染，后序的操作应该在生物安全柜中进行。
布鲁菌生长缓慢，本文中的151例菌株的平均报阳时间为82.1 h，最短报阳时间为53.0 h，最长报阳时间为209.7 h。全自动血培养仪系统广泛应用，对布鲁氏菌培养的报道也逐渐增多。[4]
布鲁菌在血平板上生长缓慢，菌落特征为较小、突起、边缘整齐、灰白色、湿润光滑。革兰染色阴性球杆菌，呈现沙滩样，应与其他革兰染色阴性杆菌相区别。布鲁菌有较强的侵袭力，人类对其普遍易感，可通过完整的皮肤黏膜、呼吸道、消化道感染人类，常可导致实验室污染感染，被认为是存在极大的危害的病原菌，[5] 常通过气溶胶使微生物操作人员获得感染，多篇文献中有实验室暴发感染的相關报道，[6]我国也有实验室感染的相关报道。[7]布鲁氏杆菌抵抗力强，如在水、土壤、粪便、皮毛肉和乳制品中可存活数周至数月。因此，对于微生物实验室的检验人员，应熟练掌握对布鲁菌的认识，做到早期识别，规避实验室感染的风险。
参考文献
[1] 董巧荣，4例菌血症布鲁氏菌血培养特性分析[J].甘肃医药，2017，36（5）：375–376.
[2] 王荣英，贺振银，陈亚津，等.布鲁杆菌病患者流行病学及临床特征分析[J].中国全科医学，2017，20（8）：988-991.
[3] 刘凡瑜，王 平，王 迪，等.吉林省西部牧区养羊户布鲁杆菌病感染现况调查[J].吉林大学学报（医学版），2015，41（1）：175-180.
[4] 陈日荣，李惠冰，周美容.不同种类微生物在全自动血培养仪中的生长曲线特点及意义[J].中国感染控制杂志，2006，5（3）：206-208.
[5] 陈东科，孙长贵.实用临床微生物学检验与图谱[M].第一版，北京：人民卫生出版社，2011：497.
[6] Robichaud S，Libman M，Behr M，et al.Prevention of laboratory-acquired brucellosis[J].Clin Infect Dis.2004，38（12）：e119-e122.
[7] 王 帝，翟 璐.东北农业大学28名师生因动物实验感染严重传染病[N].中国青年报，2011-09-03.
