| 标题 | 基于2015年版《中华人民共和国药典》探讨真伪大黄鉴别的关键指标土大黄苷的最佳检测方法 |
| 范文 | 宋晓莉+张桂杰+赵建刚+陈明霞+刘晔+连增林+李镐 摘要：目的 建立操作简便、专属性强的大黄中土大黄苷检查方法。方法 通过对比聚酰胺、硅胶薄层色谱法（TLC）和高效液相色谱法（HPLC）检测大黄药材中的土大黄苷的研究，考察鉴别正、伪品大黄的最佳方法。结果 采用聚酰胺、硅胶TLC方法检查大黄中土大黄苷的耐用性较差，HPLC更适用于土大黄苷的检测。结论 本研究确定的HPLC方法准确可靠，可用于大黄药材的质量控制，为药典用大黄的真伪鉴别提供参考。 关键词：大黄；土大黄苷；薄层色谱法；高效液相色谱法 DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.12.021 中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2017）12-0085-03 Optimum Detection Method for the Key Indicators of Authenticity for Rhaponticin Identification in Rhei Radix et Rhizoma Based on 2015 Edition of Chinese Pharmacopoeia SONG Xiao-li1， ZHANG Gui-jie1， ZHAO Jian-gang2， CHEN Ming-xia2， LIU Ye2， LIAN Zeng-lin1，3， LI Gao1 （1. Pharmacy College of Yanbian University， Yanji 133000， China； 2. Beijing Handian Pharmaceutical Co.， Ltd.， Handian Group， Beijing 102600， China； 3. Institute of Biological Chinese Medicine， Beijing Yichunag Industry Research Institute of Biological Technology， Beijing 101111， China） Abstract： Objective To establish a simple and specific method for the determination of rhaponticin in Rhei Radix et Rhizoma. Methods A comparison of the methods of polyamide， silica gel TLC and HPLC in the determination of rhaponticin was studied to investigate the optimum way to identify authentic Rhei Radix et Rhizoma. Results The durability of polyamide and silica gel TLC method for the determination of rhaponticin in Rhei Radix et Rhizoma was poor. HPLC method was more suitable for the detection of rhaponticin. Conclusion HPLC method is accurate and reliable， and can be used for the quality control of Rhei Radix et Rhizoma and provide references for the authenticity of Rhei Radix et Rhizoma. Key words： Rhei Radix et Rhizoma； rhaponticin； TLC； HPLC 近年來，由于商业利益的驱动，市场上出现了许多中药伪品，其中包括用量大、使用范围广的大黄。蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.或药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根及根茎为药典规定的正品大黄[1]。而同属波叶组植物华北大黄、天山大黄等则为伪品大黄。为去伪存真，建立操作简便、灵敏度高、专属性强的鉴别方法是保证安全用药的重要手段。 基金项目：北京市科技计划“十病十药”中药专项（Z161100001816007） 通讯作者：连增林，E-mail：zenglinlian@aliyun.com； 李镐，E-mail：gli@ybu.edu.cn 有研究显示，正品大黄中均不含土大黄苷，而伪品大黄中的土大黄苷为其特征成分[2]，因此，以该成分为关键指标鉴别大黄真伪切实可行。本试验通过将2015年版《中华人民共和国药典》收载的检测方法与其他文献建立的方法进行比较，建立一种鉴别真伪大黄的最佳检测方法，为大黄的安全使用提供参考。 1 仪器与试药 Agilent 1260 Infinity高效液相色谱仪，TB-215D电子分析天平（Denver），KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），聚酰胺薄膜（武汉鑫思锐科技有限公司），硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂分厂，批号20170106）。 土大黄苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号110794-201607）；对照药材掌叶大黄（批号121249-201304）、唐古特大黄（批号120902-201311）、药用大黄（批号120984-201202）、华北大黄（批号121676-201201），中国食品药品检定研究院；掌叶大黄药材（甘肃，批号1610055）；甲醇（北京化工厂，批号20161212），乙醇（北京化工厂，批号20160928），娃哈哈纯净水（批号20170315）。 2 方法与结果 2.1 聚酰胺薄层色谱法 2.1.1 药典方法 取掌叶大黄药材粉末0.1 g，加甲醇10 mL，超声处理（功率500 W，频率40 kHz）20 min，过滤，作为供试品浓溶液；取供试品浓溶液1 mL，加甲醇稀释至10 mL，作为供试品稀溶液。另取土大黄苷对照品，加甲醇制成0.1 mg/mL的溶液，作为对照品浓溶液；取1 mL对照品浓溶液，加甲醇稀释至10 mL，作为对照品稀溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5 ?L，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-甲酸乙酯-丙酮-甲醇-甲酸（30∶5∶5∶20∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果显示，对照品稀溶液和供试品稀溶液色谱图清晰度不足；供试品浓溶液色谱中，在对照品色谱相应的位置不显相同颜色的蓝色斑点；但供试品色谱的清晰度仍然不足，而且与对照品相应位置的供试品斑点辨识较困难。 2.1.2 改进方法 取药用大黄、掌叶大黄、唐古特大黄和华北大黄粉末各0.1 g，加甲醇10 mL，超声处理20 min，过滤，作为供试品溶液。另取土大黄苷对照品，加甲醇制成0.1 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5 ?L，分别点于同一聚酰胺薄膜上，采用5个展开剂，分别为甲苯-甲酸乙酯-丙酮-甲醇-甲酸（30∶5∶5∶20∶0.1）、乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10∶7∶1∶1）、甲苯-甲酸乙酯-甲酸-甲醇（30∶10∶0.1∶20）、醋酸-水（1∶3）、醋酸-水（1∶1），展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果显示，各供试品斑点颜色明显；药用大黄、掌叶大黄、唐古特大黄供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置不显相同颜色的蓝色斑点，但与对照品相应位置的供试品斑点辨识较困难；华北大黄供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置显相同颜色的蓝色斑点，主斑点附近无干扰。 2.2 硅胶薄层色谱法 取“2.1.2”项下供试品溶液及对照品溶液各5 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（10∶3.5∶0.2∶0.3）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果显示，各供试品斑点清晰度较聚酰胺板要差；药用大黄、掌叶大黄、唐古特大黄供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置不显相同颜色的蓝色斑点；华北大黄供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置显相同颜色的蓝色斑点，主斑点附近无干扰。样品在硅胶板显色时间较短。 2.3 高效液相色谱法 2.3.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱为Kromasil 100-5 C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m），流动相为甲醇-水（33∶67），流速1.0 mL/min，检测波长320 nm，柱温30 ℃。在上述条件下，供试品中土大黄苷色谱峰与其他杂质峰分离度>1.5。色谱图见图1。 2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取土大黄苷对照品适量，加稀乙醇制成每1 mL含土大黄苷50 ?g的溶液。 2.3.3 供试品溶液的制备 取大黄对照药材0.1 g，精密称定，精密加入稀乙醇10 mL，超声处理（功率500 W，频率40 kHz）20 min，过滤，取续滤液1 mL，加稀乙醇至10 mL，即得。 2.3.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 ?L，注入液相色谱仪，测定。 2.3.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 ?L，重复进样6次，测得土大黄苷含量，计算RSD=1.2%，表明仪器精密度良好。 2.3.6 稳定性试验 取土大黄苷对照品及华北大黄供试品溶液，分别在0、2、4、6、12、24 h进样10 ?L，其峰面积RSD分别为0.45%、0.56%，结果表明对照品溶液和样品溶液稳定性良好。 3 讨论 土大黄苷为二苯乙烯的衍生物，属于茋苷[3]，在紫外光下显亮蓝色強荧光，溶于稀乙醇、热丙酮和热水，微溶于乙醚、乙醇、丙酮和冷水，对光和热极不稳定。采用药典方法专属性不强，容易误判。有文献报道，采用HPLC检测土大黄苷可提高检测敏感性[4-7]。为此，本研究采用HPLC对土大黄苷进行了检测，发现主峰附近无干扰，易于判别，操作相对简便，能够准确判断大黄的真伪。 本试验建立的HPLC方法能得到检测峰分离度高、质量好的色谱图，可以准确地检测出大黄中的土大黄苷，该方法灵敏度高、准确、合理、可靠，能有效控制大黄药材的质量，鉴别大黄真伪，从而保证用药的安全性。建议将HPLC收载为《中华人民共和国药典》“大黄”项下土大黄苷的检查方法之一，为大黄的去伪存真提供更加有效的技术支持。 参考文献： [1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2015：23. [2] 肖培根.新编中药志[M].北京：化学工业出版社，2002：66. [3] 徐颖，郭增军，谭林.土大黄苷研究进展[J].中国现代应用药学，2009， 26（7）：549-552. [4] 沈于兰，杨敏智，栾洁，等.对大黄中土大黄苷检测方法的改进[J].中国药事，2010，24（5）：493-495. [5] 陈国清，申兰慧.牛黄消炎片、妇乐颗粒中掺入土大黄的鉴别方法研究[J].西北药学杂志，2010，25（6）：434-435. [6] 彭乃焕.RP-HPLC同时测定三黄片中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、土大黄苷含量[J].中成药，2009，31（12）：1860-1862. [7] 沈兵，傅静芝，高洪琳.RP-HPLC法检测炎可宁片中土大黄苷方法的探讨[J].中国药事，2010，24（9）：901-902. （收稿日期：2017-07-18） （修回日期：2017-08-21；编辑：陈静） |
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