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超声微波技术萃取不同种无花果中总黄酮含量

范文

杨程宇林婷婷江芷婷金元宝

摘要采用超声-微波萃取法提取无花果（青皮、波姬红、布兰瑞克）中的总黄酮，通过考察液料比、乙醇体积分数、萃取时间对总黄酮提取率的影响，获悉总黄酮最佳萃取的条件参数是：无花果青皮是乙醇体积分数为50%，乙醇液料比50∶1（mL/g），萃取持续时间40min;波姬红是乙醇体积分数为70%，乙醇液料比40：1（mL/g），萃取持续时间30min;布兰瑞克是乙醇液料比为乙醇体积分数比为60%，60：1（mL/g），萃取时间持续20min。本实验以芦丁作为实验的对照品，使用紫外可见分光光度法。在波长510nm荧光波长处，采用的方法是亚硝纳-硝酸铝-氢氧化纳荧光显色法，对无花果的提取物总黄酮含量进行测定，结果：在0.00-0.10mg/mL范围内，芦丁的质量浓度与其吸光度呈良好的线性关系（R2=0.9999），且精密度、稳定性和重复性的RSD均<3%。

关键词无花果总黄酮超声微波萃取紫外可见分光光度法

中图分类号：R917文献标识码：A

无花果（Ficus carica ），又称映日果、阿驲、蜜果、优昙钵。是一种开花植物，属于被子植物门、双子叶植物纲、桑科榕属。分布在我国西北部、中部、南部等多个省份。无花果的化学成分由化合物黄酮、多糖、酚类化合物、挥发油花青素等组成，具有降低血糖、降低血脂和抗氧化等功能，具有非常高的食用价值和医学药用价值。黄酮的提取方法有很多种，目前，比较常见的是浸提法、超声提取法、大孔树脂吸附法、超临界提取、半仿生提取法等。浸提法比较成熟的方法，但效率低而且溶剂所需量过多;超声提取法提取效率高且溶剂的使用量少;大孔树脂吸附法选择性好，吸附速度快，但对工艺的要求较高;超临界法提取效率高，但成本和使用条件很难达到;半仿生提取法虽周期短且成本低，但易引起化学成分的改变。鉴于各种提取方法的优缺点和考虑成本，本试验决定采用超声-微波法探讨不同种无花果总黄酮的提取工艺。目前，国内外主要是从银杏叶、芝麻叶、茶叶等材料中提取总黄酮，而对无花果总黄酮的研究，特别是采用超声-微波法从无花果中提取总黄酮的研究还鲜少报道。

1材料与方法

1.1材料与试剂

市售无花果：青皮（山东威海）、波姬红（广东东莞）、布兰瑞克（山东临沂）;

芦丁标准品（LC）：生产于中国食品药品检定研究院;

无水 C2H5OH（AR）、氢氧化钠（AR）：生产于天津德恩化学试剂有限公司;

亚硝酸钠（AR）：生产于天津登科化学试剂有限公司;

硝酸铝（AR）：生产于天津市恒兴化学试剂制造有限公司;

石油醚（AR，沸程30-60℃）：生产于天津欣宽福利化工厂。

1.2材料与设备

XH-300A微波超声波组合萃取仪：生产于北京祥鹄科技有限公司;

FA2004N 电子分析天平：生产于上海奥豪斯分析仪器有限公司;

T6紫外分光光度计;生产于北京普析通用仪器有限公司;

L-01冻干机：生产于上海东富龙科技有限公司;

EYE-LA 型旋转蒸发仪：生产于日本东京理化株式会社;

高速万能粉碎机：生产于天津泰斯特仪器有限公司。

1.3方法

1.3.1样品预处理

样品：清洗，75%酒精消毒，切片，冻干，粉碎，过100目筛，存于干燥柜中备用。

1.3.2超声微波萃取

称取一定量样品，加入预定体积分数的乙醇，搅拌并避光静置20min，在不同的提取时间，选择不同功率，制备待测样品液。对试验进行多次平行，取算术平均值。

1.3.3标准曲线的绘制

配置对照品溶液：把芦丁标准品精密称取50.0mg放于 50.0 ml 容量瓶中，用体积分数为40 %的乙醇定容，摇匀得到对照品溶液。

40%的乙醇定容，摇匀得到对照品溶液。

第一步，芦丁对照品溶液以0.5 ml、1.0 ml、2.0 ml、3.0 ml、4.0 ml、5.0 ml 精密吸取于10.0 ml 容量瓶。第二步，蘆丁对照品溶液准确吸取 x ml于10.0 ml 容量瓶，再加40%乙醇定容至到5.0 ml，加0.3 ml 5% NaNO2溶液，摇匀，避光静置6 min后，加0.3 ml 10% Al（NO3）3溶液，摇匀，避光静置6 min，加4.0 ml 1.0 mol/ml NaOH 溶液，再用40%乙醇定容至刻度，摇匀，避光静置15 min，。第三步，在200 nm-600 nm 波长范围，用紫外分光光度计进行全波长扫描，最后记录扫描图谱。第三步，空白参比液为不加样品试剂，在510 nm 波长处分别测定吸光度。把横坐标设为芦丁质量浓度（x，mg/ml），纵坐标为吸光度（y，A），线性回归处理得到标准曲线方程。

1.3.4优化总黄酮提取条件的单因素试验

分别以乙醇体积分数、液料比、萃取时间为影响因素，设置3个因素的不同水平，在不同提取条件下，分析对无花果（青皮、波姬红、布兰瑞克）中总黄酮提取率的影响。

2结果与分析

2.1芦丁标准曲线

横坐标为芦丁质量浓度（X，mg/ml），纵坐标为吸光度值（Y，A），绘制芦丁标准曲线。由图1知，芦丁标准曲线的回归方程是：Y=3065.2x+0.2665，相关系数为R2 =0.9999。表明在0.00～0.10mg/mL范围内，该标准曲线是良好的线性关系。

2.2单因素试验结果

2.2.1 乙醇的体积分数对总黄酮提取率影响

品种青皮：实验可知，总黄酮的提取率随着乙醇的体积分数增加呈现为正相关，在乙醇体积分数50%时最高，推测原因是：原料中的某些物质在乙醇体积分数较高时，也被乙醇溶解，因此影响试验效果。故提取青皮的最佳乙醇体积分数确定为50%。

品种波姬红：实验可知，在乙醇体积分数70%时最高出现拐点，所以波姬红乙醇体积分数在70%时，黄酮的提取率最大。推测拐点前增长的原因是乙醇体积增大使样品与乙醇分子充分接触，使得接触面积增大，从而导致了总黄酮的提取率也增加。

品种布兰瑞克;实验可知，在乙醇体积分数60%时，出现最高峰，之后随着体积分数增大呈负相关。因此，布兰瑞克乙醇体积分数在60%时，黄酮提取效果最好。

2.2.2液料比对无花果总黄酮提取的影响

品种青皮：实验可知，液料比小于50∶1（mL∶g）时，总黄酮提取率随液料比的增大而增大，液料比大于50∶1（mL∶g）时，呈现则为负相关。所以，液料比在50∶1（mL∶g）时，总黄酮提取率最大。

品种波姬红：实验可知，液料比在40∶1（mL∶g）时，总黄酮提取率最大。因此，最佳液料比确定为40∶1（mL∶g）。而在70：1时，轻微向上的趋势，推测其原因是在这一浓度下，样品中的某种物质恰好溶出，对黄酮含量测定有轻微影响。

品种布兰瑞克：实验可知，液料比小于60∶1（mL∶g）时，总黄酮提取率随液料比的增加而增加，液料比大于60∶1（mL∶g）时，则为负相关。液料比在60∶1（mL∶g）时，总黄酮提取率最大。因此，布兰瑞克提取黄酮的最佳液料比确定为60∶1（mL∶g）。

2.2.3萃取时间对无花果总黄酮提取的影响

品种青皮：实验可以看出，萃取时间小于40min时，呈现为正相关;在超声微波 40min 时，总黄酮提取率达到峰值而后缓慢降低。其原因可能是由于超声波的热效应导致黄酮的分解，所以出现了萃取时间过长而总黄酮提取率下降的现象。因此超声时间选择 40 min 左右最为合适。

品种波姬红：实验知，超声微波时间在 30min 时，总黄酮提取率达到最大值而后缓慢降低，因此超声时间选择 30 min 左右较为合适。

品种布兰瑞克：实验可知，超声微波时间在20min 时，总黄酮提取率达到最大值而后快速下降。因此超声时间选择 20 min 左右较为合适。

3结论

据单因试验的结果，得到超声微波萃取法提取無花果（青皮、波姬红、布兰瑞克）中的总黄酮的最佳提取工艺条件是：青皮乙醇分数50%，液料比50：1，萃取时间40min;波姬红乙醇分数70%，液料比40：1，萃取时间30min;布兰瑞克乙醇分数60%，液料比60：1，萃取时间20min。超声-微波法具有提取时间短，提取率高的特点。本实验弥补了前人实验上的空白：对比不同种无花果黄酮提取含量。本实验不足之处在于对比因素过少，可以在微波时间、微波功率、超声时间、超声功率方面进行实验，这也是我们接下来的工作之一。

*通讯作者：金元宝

作者简介：杨程宇（1999-），女，汉，广东河源人，吉林大学珠海学院学生，本科在读，研究方向为药物成分提取;通讯作者：金元宝，1982.9，男，汉，吉林扶余，硕士研究生，实验师，天然药物提取及药物剂型研究。

参考文献

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