| 标题 | 黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展 |
| 范文 | 张雪 摘要：在综述国内黄芪中黄芪甲苷含量测定方法基础上，分析黄芪中的黄芪甲苷含量测定方法研究进展，包括HPLC-ELSD法、HPLC/ESI-MS联用法、HPLC-UV法、UPLC-MS法、HPLC-DAD-ELSD法等，旨在为进一步开展黄芪相关研究提供理论借鉴。 关键词：黄芪甲苷;含量測定;黄芪;HPLC-ELSD;HPLC/ESI-MS 中图分类号：R284.2? ? 文献标识码：A? ? 文章编号：1674-1161（2019）04-0049-03 黄芪具有补气升阳、益卫固表、利水消肿和托疮生肌等功效。目前，主要用黄芪皂苷中的黄芪甲苷（astraga bside IV）作为评价黄芪药材质量的标准。在查阅收集大量文献的基础上，综述黄芪甲苷的检测方法研究进展，为黄芪甲苷相关研究提供技术借鉴。 1 黄芪中黄芪甲苷含量测定方法 黄芪甲苷的检测方法主要有HPLC-ELSD法、HPLC/ESI-MS联用法、HPLC-UV法、UPLC-MS法、HPLC-DAD-ELSD法、近红外光谱法等。 1.1 HPLC-ELSD法 蒸发光散射检测器作为通用型检测器，不依赖于化合物光学性质，对非挥发组分均有较好的响应，广泛应用于皂苷类、萜类、生物碱类、糖类等中药成分的质量控制。 崔雪莹等探讨蒸发光散射检测器高效液相色谱法（HPLC-ELSD）测定黄芪中4种皂苷类活性成分含量的可行性。采用ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，以水-乙腈为流动相梯度洗脱，流速0.8 mL/min，载气流速1.2 L/min，漂移管温度105 ℃。测定结果表明，黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ的含量分别为4.40 ，0.2，1.42，1.31 mg/g，分别在0.476～5.712，0.139～8.340，0.434～6.944，0.392～4.704 μg范围内呈线性关系，精密度分别为2.25%，0.81%，2.52%，2.31%，平均回收率分别为101.84%，98.96%，103.27%，100.35%。 林宏琳等通过HPLC-SPD-ELSD串联系统比较、样品前处理及色谱条件优化，测定保健食品中黄芪甲苷的量。以甲醇为提取溶剂对样品进行超声提取，色谱柱选用Thermo Accucore XL C8（150 mm×4.6 mm，4 μm），流动相为乙腈-水（32∶68），柱温35 ℃，体积流量1 mL/min，紫外检测波长192 nm，进样量20 μl，漂移管温度40 ℃，氮气压力308 kPa。测定结果表明：黄芪甲苷在0.05～0.25 mg/ml范围呈良好线性关系，ELSD和SPD分别为0.999 8和0.999 2;方法检出限为0.02，0.04 mg/g;3批样品黄芪甲苷平均含量分别为1.06，1.03，1.05 mg/g和1.11，1.06，1.09 mg/g，平均加样回收率为96.80%，98.70%。该法便捷经济、准确可靠，可根据实际情况选择ELSD或SPD检测器，为保健食品中黄芪甲苷的质量控制与评价及相关研究提供适用方法。 1.2 HPLC/ESI-MS联用法 电喷雾质谱（ESI-MS）是一种可得到每个色谱峰的紫外光谱图、保留时间、相对分子质量和特征碎片等信息的软电离质谱技术，与质谱联用可弥补常规紫外检测对某些紫外吸收弱的化合物不灵敏、提供分子结构信息较少的缺点。 张文敬等利用高效液相色谱法制备黄芪水煎液中的黄芪甲苷，并通过质谱对收集到的组分进行鉴定。分析型色谱条件为：色谱柱EcliPseXDB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）柱，乙腈-水梯度洗脱，柱温25 ℃，流速0.8 mL/min，检测波长254 nm，进样量20 μL。制备型色谱条件为：Hypersil C18（20 mm×300 mm，10 μm）柱，流速10 mL/min，进样量2 mL，其他同分析型色谱。质谱分析法为电喷雾离子化（electrospray ionization，ESI）源，电压3.5 kV，正、负离子检测，鞘气（N2）流速80 a.u.，辅助气（N2）流速15 a.u.，碰撞气体为氦气，毛细管温度350 ℃，毛细管电压±5 V。全离子扫描范围50～2 000 m/z。经分析型色谱得标准曲线回归方程为：A=0.1717 C+0.4657，r=0.999 6，在0.01～0.2 mg/mL范围内线性关系良好。制备型色谱方法得到的峰型较好，峰间隔适当，能够将相邻组分分离。收集保留时间为26 min的组分，经分析型色谱和ESI-MSn鉴定为黄芪皂甙IV（astragaloside IV），即黄芪甲苷，且纯度可达95%。 1.3 HPLC-UV法 高效液相色谱法是检测药材中成分含量的一种常用方法。紫外检测器灵敏度高，噪间低，线性范围宽，选择性好，对环境温度、流动相组成变化和流速波动不敏感，可用于等浓度洗脱，也可用于梯度洗脱。 姜丽丽等建立黄芪干根中HPLC-UV法测定黄芪甲苷的方法，比较蒙古黄芪、野生黄芪和膜荚黄芪3种不同来源样本的黄芪甲苷含量。采用HPLC-UV法，色谱柱为Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm），流动相为乙腈∶水（32∶68），流速1.0 ml/min，检测波长203 nm。黄芪甲苷在0.05～0.50 mg/ml范围内线性关系良好（r=0.999），平均回收率为98.216%（RSD=2.85%）;黄芪甲苷含量为野生黄芪>膜荚黄芪≈蒙古黄芪。 1.4 UPLC-MS法 用超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS法）测定物质含量，具有准确、快速、高效、灵敏等优点，可用于黄芪中黄芪甲苷的快速测定，提高分析效率。 夏义平将黄芪用甲醇-氨水（3：1，V/V）超声提取30 min，采用多反应监测（MRM）模式，以m/z 785.4/143.108和m/z 785.4/473.391为定性离子对，m/z 785.4/143.108为定量离子对，用UPLC-MS外标法测定黄芪中黄芪甲苷含量。测定结果显示：黄芪甲苷在60.0～12 000 ng/ml濃度范围内有良好线性关系（r=0.999 3），平均回收率91.7%，最低检测限68.2 μg/kg。该方法具有简便、快速和灵敏度高的特点，可用于黄芪中黄芪甲苷测定。 1.5 HPLC-DAD-ELSD法 研究表明，皂苷和黄酮是黄芪的主要成分，但皂苷类化合物没有紫外吸收或只在200 nm处有微弱吸收。因此，单用二极管阵列检测器（DAD）无法同时测出黄芪中这两类不同性质的化合物。蒸发光散射检测器（ELSD）是一种通用型检测器，特别适用于没有紫外吸收的皂苷类化合物测定。 王亚丽等建立HPLC-DAD-ELSD同时测定黄芪药材中4个黄酮类成分（毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素）和6个皂苷类成分（黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅱ、异黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅰ）含量的方法，比较7批不同产地的黄芪药材中效成分含量。色谱柱选用Waters Symmetry C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），0.3%冰醋酸（A）-乙腈（B）梯度洗脱，柱温25 ℃，流速1.0 mL/min，检测波长260 nm，蒸发光散射检测器（ELSD）漂移管温度60 ℃，供气压力25 psi。该条件下10个成分的分离度良好，在对应线性范围内与峰面积呈良好的线性关系。 1.6 近红外光谱法 战皓等采用近红外漫反射光谱法对黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和黄芪甲苷的含量进行快速无损检测。以液相色谱质谱联用分析值为参比，采用偏最小二乘法建立黄定量分析模型。结果显示，毛蕊异黄酮葡萄糖苷近红外光谱经多元散射校正（MSC）+一阶导数+Savitzky-Golay卷积平滑预处理后模型最优，模型参数R2为0.826 6，RMSEP值为0.022 7，校正集R2为0.863 5，RMSEC值为0.019 0;黄芪甲苷近红外光谱经二阶导数+Savitzky-Golay卷积平滑预处理后模型最优，模型参数R2为0.854 8，RMSEP值为0.006 41，校正集R2为0.796 3，RMSEC值为0.007 99。近红外光谱技术结合偏最小二乘法可快速、准确的对黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和黄芪甲苷的含量进行检测。此外，通过主成分分析发现，甘肃产黄芪与其他产地黄芪差异不大，排除甘肃产黄芪后，山西、四川和吉林的样本区分度较高。 1.7 声光可调-近红外漫反射光谱法 近红外漫反射光谱法作为一种快速分析方法，具有快速、无损、环保等优点，可直接测定固体、液体和气体样品，无需复杂的前处理过程。应用声光可调-近红外漫反射光谱法结合偏最小二乘法，建立快速通用的多指标测定方法。 任绪华等采用声光可调-近红外漫反射光谱法结合偏最小二乘法建立预测黄芪药材中含量的定量模型（作为预测值）。根据参考值采集60批药材样品，用一阶导数联合平滑降噪法预处理光谱，水分、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量预测的最佳波段分别为 1 100～2 300、1 080～2 160、1 170～2 230 nm。分析结果显示，水分、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法学考察符合要求。水分、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷定量模型校正均方根偏差分别为0.132 3， 0.006 6，0.002 5，预测均方根偏差分别为0.237 1， 0.016 3，0.004 7，校正集内部交叉验证相关系数分别为0.975 9，0.953 3，0.968 0;定量模型内部验证偏差分别为1.43%，1.90%，1.84%，外部验证偏差分别为1.73%，2.68%，2.71%。 1.8其他方法 除以上含量测定方法外，也有很多研究采用了其他技术，如高效毛细管电泳法、近红外漫反射光谱法、反相高效液相色谱法、薄层比色法、薄层扫描法等，均取得了较好效果。 2 结语 黄芪是一类药食兼用的传统天然植物，具有很高的药用价值和保健价值，而黄芪甲苷是黄芪中的有效成分之一。因此，开展黄芪中黄芪甲苷的含量测定方法研究，对于黄芪资源的进一步开发利用具有重要意义。 参考文献 [1] 崔雪莹，刘阿娜，陈迩东，等.HPLC-ELSD法测定黄芪中四种皂苷类成分的含量[J].山东中医杂志，2017，36（5）：411-413. [2] 张文敬，张倩，张涛，等.高效液相色谱法分析和制备黄芪中的黄芪甲苷含量[J].北京农学院学报，2016，31（03）：80-85. [3] 王亚丽，田曼，李江，等.HPLC-DAD-ELSD法同时测定黄芪中10个成分的含量[J].中南药学，2018，16（9）：1 268-1 271. [4] 任绪华，苏婷，姜文月，等.声光可调-近红外漫反射光谱法快速评价黄芪药材质量[J].中国药房，2018，29（2）：168-171. [5] 战皓，吴宏伟，张东，等.近红外光谱法测定不同产地黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和黄芪甲苷含量[J].光谱学与光谱分析，2017，37（5）：1 391-1 396. Abstract： This article analyzed the research progress on the determination method of astragaloside in Astragalus menmbranaceus on the basis of summarizing the methods for determination of astragaloside in astragalus at home， including HPLC-ELSD， HPLC/ESI-MS， HPLC-UV， UPLC-MS， HPLC-DAD-ELSD， etc. The purpose is to provide a theoretical reference for carrying out further correlation study of Astragalus menmbranaceus. Key words： astragaloside; content determination; Astragalus membranaceus; HPLC-ELSD; HPLC/ESI-MS |
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