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薏苡种质资源中甘油三油酸酯和薏苡素的测定

范文

蒙秋伊付瑜华申刚

摘要：采用高效液相色谱法（HPLC）分析比较24份薏苡仁中甘油三油酸酯、薏苡根中薏苡素含量的差异，结果表明，24份薏苡种质的薏苡仁中甘油三油酸酯含量存在较大差异，Y78、Y28、Y83、Y24、Y8、Y216、Y14这7份种质的薏苡仁中甘油三油酸酯含量低于0.5%，其他均高于0.5%;甘油三油酸酯含量最高的种质Y166比最低的种质Y78高 3.82倍，薏苡根中薏苡素含量最高的种质Y229比最低的种质Y211高1.22倍;种质Y166、Y164的甘油三油酸酯、薏苡素含量均较高，可作为薏苡品种选育的亲本材料。

关键词：薏苡;甘油三油酸酯;薏苡素;高效液相色谱法

中图分类号： S519.01 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2019）01-0186-03

薏苡（Coix lacryma-jobi L.）为禾本科薏苡属1年生或多年生草本植物，别称薏仁米、六谷子、药玉米等，是传统药食兼用经济作物，具有极高的营养价值和重要的药用价值[1-2]。薏苡干燥成熟种仁具有利水渗湿、健脾止泻、除痹、排脓、解毒散结等功效[3]。有研究表明，薏苡对肉瘤、肝癌、胃癌、肺癌等具有较好疗效[4-6]，其抗肿瘤主要活性成分为薏苡仁油中的甘油三酯类成分（TAGs），其中包括甘油三油酸酯、甘油三亚油酸酯、1，2-油酸-3-亚油酸-甘油三酯、1，2-亚油酸-3-油酸-甘油三酯等，《中国药典》2015年版以甘油三油酸酯作为评价薏苡仁药材质量指标成分[3]。目前，抗肿瘤药康莱特注射液的主要成分就是薏苡仁油，并作为一种较为理想的抗肿瘤药物广泛应用于肺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、鼻咽癌、肾癌等的治疗或辅助治疗[7-9]。薏苡根收载于贵州省中药材、民族药材质量标准（2003年版），为贵州少数民族用药，其作用成分为薏苡素，具有清热利湿、健脾和杀虫等功效，用于治疗热淋、血淋、石淋、黄疸、水肿、白带过多、脚气、风湿痹痛和蛔虫病等症[10]。

薏苡种质资源中甘油三油酸酯和薏苡素的含量差异较大，导致薏苡品质良莠不齐。甘油三油酸酯一般在薏苡种仁中提取[11-14]，而薏苡素则以薏苡根部含量相对最高[15-16]，2种药用成分主要提取部位不同。为达到有效利用，须同时采收薏苡仁、薏苡根分别提取薏苡甘油三油酸酯、薏苡素，而培育一个甘油三油酸酯、薏苡素含量高的“双高”薏苡品种十分有价值。本试验以药典指标成分甘油三油酸酯、薏苡素为研究指标，考察贵州省亚热带作物研究所24份薏苡种质资源其成分含量差异，初步评价其药材品质，为优质“双高”薏苡的选育提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Prominence LC-20A型液相色谱仪，由日本岛津公司生产;Alltech ELSD 3300型蒸发光散射器，北京奥泰科技有限公司提供;KQ5200E型超声波清洗器，由昆山市超声仪器有限公司生产;RE-52型旋转蒸发器，由上海亚荣生化仪器厂生产;FS-Ⅱ型药材粉碎机，由广州航信科学仪器有限公司生产;BSA224S型电子天平，由赛多利斯科学仪器（北京）有限公司生产。使用化学试剂有乙腈、二氯甲烷、甲醇（Merck公司生产，色谱纯）;试验用水为娃哈哈纯净水;对照品甘油三油酸酯、薏苡素，分别购于Sigma公司、卡迈舒（上海）生物技术有限公司，质量分数均大于98.0%。

1.2 试验前期处理

试验于2016年11月在贵州师范大学分析测试中心进行，分别采集24份来源不同的薏苡种质资源（表1）成熟种子及成熟期根;种子脱壳得薏苡仁，烘箱中40 ℃烘24 h，粉碎，过100目筛，备用;成熟期根用烘箱中40 ℃烘干，粉碎，过40目筛，备用。

1.3 对照品和供试品溶液的制备

精确称取甘油三油酸酯对照品适量，加流动相制成 0.14 mg/mL 的溶液;精确称取薏苡素对照品适量，加甲醇配制成0.096 mg/mL的溶液。称量薏苡仁粉末0.1 g于20 mL瓶中，加入乙腈、二氯甲烷质量比为59 ∶ 41的流动相5 mL;浸泡过夜，超声30 min;取出，冷却，称质量，加同样的流动相补足质量，摇匀;滤纸过滤，滤液用有机膜过滤;采用高效液相色谱法（HPLC）分析滤液的甘油三油酸酯含量。称量薏苡根粉末大约1 g于索氏提取器，加丙酮提取至无色;待提取液挥发干，25 mL容量瓶中加甲醇溶解定容;有机膜过滤，采用高效液相色谱法（HPLC）分析滤液的薏苡素含量。

1.4 液相色谱条件

测量甘油三油酸酯的色谱条件：色谱柱为250 mm×4.60 mm、5 μm phenomenex C18柱，流动相为乙腈、二氯甲烷质量比为59 ∶ 41，流量为0.7 mL/min，色谱柱温度为30 ℃;蒸发光散射检测器检测。测量薏苡素的色谱条件：色谱柱为250 mm×4.60 mm、5 μm wondasil C18柱;流动相为乙腈、水、磷酸质量比为25 ∶ 75 ∶ 0.1，流速为0.7 mL/min，色谱柱温度为25 ℃，紫外检测器波长为232 nm。对照品和供试品溶液的高效液相色谱见图1。

1.5 高效液相色谱法测试效果检验

1.5.1 线性关系检验分别精确吸取甘油三油酸酯对照品溶液2、5、10、15、20 μL及薏苡素对照品溶液2、4、6、8、10 μL，采用HPLC法分别测定峰面积;以进样量为横坐标（x），峰面积为纵坐标（y），分别绘制甘油三油酸酯、薏苡素的标准曲线，检验线性情况。

1.5.2 精密度檢验分别精确吸取甘油三油酸酯、薏苡素对照品溶液10 μL，HPLC法连续测定6次甘油三油酸酯、薏苡素的峰面积，计算峰面积相对标准偏差（RSD）。

1.5.3 稳定性检验分别精确吸取同一薏苡仁、薏苡根供试品溶液，HPLC法分别测定薏苡仁甘油三油酸酯、薏苡根薏苡素的峰面积，进样时间分别为0、4、8、12、24 h，每次进样量为10 μL，计算峰面积相对标准偏差（RSD）。

1.5.4 重复性检验分别称取已测的同一薏苡仁、薏苡根样品各6份，薏苡仁0.6 g、薏苡根0.2 g，分别制备成供试品溶液;HPLC法分别测定薏苡仁甘油三油酸酯、薏苡根薏苡素的峰面积，每次进样量为10 μL，计算峰面积相对标准偏差（RSD）。

1.5.5 加样回收率检验分别称取同一薏苡仁、薏苡根样品各6份，薏苡仁0.5 g、薏苡根1.0 g，分别加入等量的甘油三油酸酯、薏苡素对照品溶液，甘油三油酸酯、薏苡素添加量分别为0.386、0.296 mg，分别制备成供试品溶液，HPLC法测定薏苡仁、薏苡根分别添加甘油三油酸酯、薏苡素的峰面積，计算甘油三油酸酯、薏苡素平均回收率和RSD值。

1.6 供试样品的测定

分别精确吸取24份薏苡种质薏苡仁、薏苡根供试品溶液各10 μL作为进样，HPLC法分别测定薏苡仁、薏苡根峰面积，按外标法计算甘油三油酸酯、薏苡素含量。每个样品重复3次，取平均值。

2 结果与分析

2.1 高效液相色谱法测试效果检验

2.1.1 线性关系检验试验结果表明，甘油三油酸酯、薏苡素的标准曲线分别为y=1.292x+17.310（r2=0.983 0）、y=1 997.308x+10.692（r2=0.999 9），线性范围分别为 0.335～3.1230、0.280～1.310 μg，线性关系良好。

2.1.2 精密度检验试验结果表明，甘油三油酸酯、薏苡素峰面积相对标准偏差（RSD）分别为1.25%、0.96%，说明试验精密度良好。

2.1.3 稳定性检验试验结果表明，甘油三油酸酯、薏苡素峰面积RSD值分别为0.44%、0.28%，说明试验稳定性良好。

2.1.4 重复性检验试验结果表明，甘油三油酸酯、薏苡素峰面积RSD值分别为1.05%、1.10%，说明试验重复性较好。

2.1.5 加样回收率检验试验结果表明，甘油三油酸酯、薏苡素的平均回收率分别为100.5%、98.80%，RSD值分别为1.02%、1.23%，说明试验方法准确、可靠。

2.2 供试样品的测定结果

由表2可见，24份薏苡种质中，薏苡仁中甘油三油酸酯含量达到0.8%以上的有6份种质，分别为Y107、Y164、Y44、Y184、Y84、Y166，其中含量最高的为Y166，达到0.945%;甘油三油酸酯含量低于0.5%的有7份种质，分别为Y78、Y28、Y83、Y24、Y8、Y216、Y14;根中薏苡素含量达到560 mg/kg以上的有6份种质，分别为Y78、Y14、Y24、Y164、Y166、Y229，其中薏苡素含量最高的为Y229，达到666.7 mg/kg，最低的为Y211，薏苡素含量为300.0 mg/kg。由图2可知，薏苡仁中甘油三油酸酯含量与薏苡根中薏苡素含量无相关性。

3 结论

《中国药典》2015年版中规定，薏苡仁中甘油三油酸酯（C57H104O6）含量不得少于0.50%[3]。本试验测定24份薏苡种质的薏苡仁甘油三油酸酯含量发现，不同种质的薏苡仁中甘油三油酸酯含量存在较大差异，Y78、Y28、Y83、Y24、Y8、Y216、Y14这7份种质的薏苡仁中甘油三油酸酯含量低于 0.5%，其他均高于0.50%，符合药典标准;甘油三油酸酯含量最高的Y166比最低的Y78高3.82倍;薏苡根中薏苡素量含量相对最高的Y229比最低的Y211高1.22倍;24薏苡种质的薏苡根中薏苡素含量与薏苡仁中甘油三油酸酯含量无相关性。综合各种质中甘油三油酸酯、薏苡素含量看，种质Y166、Y164二者相对较高，可作为“双高”药用薏苡品种的亲本材料。

参考文献：

[1]蒙秋伊，刘鹏飞，张志勇. 薏苡种质资源及育种研究进展[J]. 贵州农业科学，2013，41（5）：33-37.

[2]刘荣，申刚，罗晓青，等. 薏苡遗传育种研究进展[J]. 河南农业科学，2015，44（3）：1-4.

[3]王颖，赵兴娥，王微，等. 薏苡不同部位营养成分分析及评价[J]. 食品科学，2013，34（5）：255-259.

[4]Qi F H，Zhao L，Zhou A Y，et al. The advantages of using traditional Chinese medicine as an adjunctive therapy in the whole course of cancer treatment instead of only terminal stage of cancer[J]. Bioscience Trends，2015，9（1）：16-34.

[5]Fu F，Wan Y，Mulati，et al. Kanglaite injection combined with hepatic arterial intervention for unresectable hepatocellular carcinoma：a meta-analysis[J]. Journal of Cancer Research and Therapeutics，2014，10（1）：38-41.

[6]Liu X，Yang Q，Xi Y，et al. Kanglaite injection combined with chemotherapy versus chemotherapy alone in the treatment of advanced non-small cell lung carcinoma[J]. Journal of Cancer Research and Therapeutics，2014，10（1）：46-51.

[7]许健，沈雯，孙金权，等. 薏苡仁油对人原位胰腺癌BxPC-3细胞生长及VEGF和bFGF表达的影响[J]. 中草药，2012，43（4）：724-728.

[8]李晶，刘小军，赵达. 康莱特软胶囊联合化疗治疗晚期卵巢癌的临床研究[J]. 西部中医药，2013，26（1）：1-4.

[9]贵州省药品监督管理局. 贵州省中药材、民族药材质量标准（2003年版）[M]. 贵州：贵州科技出版社，2003.

[10]范蕾，余乐，余华丽，等. HPLC-ELSD法测定丽水薏苡仁中甘油三油酸酯的含量[J]. 中国民族医药杂志，2016（4）：49-50.

[11]刘聪燕，黄萌萌，周静，等. 不同产地薏苡仁药效成分含量与体外抗肺癌活性的相关性分析[J]. 中国实验方剂学杂志，2015，21（11）：7-10.

[12]崔媛，王小明，杨勇，等. 薏苡仁油融合指纹图谱研究[J]. 中草药，2014，45（12）：1698-1701.

[13]任江剑，俞旭平，张斌，等. 不同种源薏苡仁中甘油三油酸酯含量比较[J]. 中国现代中药，2011，13（4）：15-17.

[14]黄克俊，裴学海，蒋让勇，等. 高效液相法测定薏苡中各部位薏苡素的含量[J]. 化工设计通讯，2016，42（7）：68.

[15]李厚聪，刘圆，袁玮，等. RP-HPLC法测定薏苡中薏苡素的含量[J]. 西南大学学报（自然科学版），2009，31（11）：154-157.周白雪，谢君，包垠秋，等. 低温贮藏对莲藕酚类物质组成的影响[J]. 江苏农业科学，2019，47（1）：189-191.

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