《华东地区猪繁殖与呼吸综合征流行病学调查研究》-农学论文，农业论文-论文范文参考-科学狗论文网

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华东地区猪繁殖与呼吸综合征流行病学调查研究

范文

洪伟鸣左伟勇宋亮吉光杰张晔杨佳文陈海峰

摘要?为了解华东地区猪繁殖与呼吸综合征的感染状况，应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）/聚合酶链反应（PCR）方法对2017—2018年在华东地区各大中小規模猪场采集的210份临床样品进行病原学检测（肺、脾、淋巴结等），并对分离的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）进行测序，由于2017—2018年江苏、安徽和福建一些中小养殖场发生小规模的流产死胎，因此也对其他一些相关常见病毒[如猪圆环病毒Ⅱ型（PCV2）、猪瘟病毒（CSFV）、猪伪狂犬病毒（PRV）]进行了检测，以确定导致流产死胎的主要原因以及猪繁殖与呼吸综合征的流行情况和流行毒株。结果表明：210份样品中，PRRSV阳性样品78份，阳性率为37.1%;PCV2阳性样品189份，阳性率90.0%;PRV阳性样品5份，阳性率2.4%;CSFV阳性样品0份，阳性率0。在这些阳性样品中，福建、浙江、上海、江苏、安徽、江西和山东等地区抗原阳性率有所差别，但都以PRRSV和PCV2为主。通过此次调查了解了华东地区猪繁殖与呼吸综合征的基本流行情况，为今后猪繁殖与呼吸综合征的防控提供了参考。

关键词?猪繁殖与呼吸综合征;流行病学;阳性率

中图分类号?S851.3?文献标识码?A?文章编号?0517-6611（2020）14-0092-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.14.025

Abstract?In order to obtain the infection status of porcine reproductive and respiratory syndrome in East China， we used RT-PCR/PCR method to detect pathogens in 210 clinical samples collected from large and medium-sized pig farms in East China during 2017-2018 （lung， spleen， lymph nodes，?etc?.， and sequenced the isolated PRRSV. Due to small-scale abortions in some small and medium-sized farms in Jiangsu， Anhui and Fujian during 2017-2018， we also have other related common viruses such as porcine circovirus type 2 （PCV2）， classical swine fever virus （CSFV）， and pseudorabies virus （PRV） were tested to determine the main causes of stillbirth in abortion and the prevalence and prevalence of porcine reproductive and respiratory syndrome. The results showed that among 210 samples， there were 78 positive samples with the positive rate of 37.1%; 189 PCV2 positive samples with the positive rate of 90.0%; 5 positive PRV samples with the positive rate of 2.4%; and CSFV positive sample was 0， the positive rate was 0. Among these positive samples， the positive rates of antigens in Fujian， Zhejiang， Shanghai， Jiangsu， Anhui， Jiangxi and Shandong were different， but they were mainly PRRSV and PCV2. Through this survey， we learned the basic epidemic situation of blue ear disease in East China， and provided references for the prevention and control of porcine reproductive and respiratory syndrome in pigs.

Key words?Porcine reproductive and respiratory syndrome;Epidemiology;Positive rate

繁殖障碍性疾病向来是危害养猪业的头号杀手，而其中又以高致病性猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）为主。高致病性猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）俗称蓝耳病，是一种免疫抑制病，猪是其唯一感染宿主，而且常常继发其他病原感染，猪感染该病毒后2～14周均可通过接触将病毒传播给其他易感猪[1]。临床表现主要是母猪繁殖障碍、仔猪断奶前高死亡率、育成猪的呼吸道疾病三大症状，病理变化主要是无继发感染的病例除淋巴结轻度或中度水肿外，无肉眼可见变化，呼吸系统主要是间质型肺炎，有时有卡他性肺炎，若有继发感染，则可出现如心包炎、胸膜炎、腹膜炎及脑膜炎等相应的病理变化[2]。该病具有地方流行性特性，且会持续存在并感染猪群，各种日龄、品种的猪都可以感染此病毒，其中日龄或孕龄在1月以内的仔猪和妊娠母猪是最易感猪群[3]。

为了解华东地区高致病性猪繁殖与呼吸综合征的流行情况以及优势毒株，2017—2018年笔者联系当地合作单位，共采集临床样品210份（肺、脾、淋巴结等），同时江苏、安徽和福建一些中小养殖场出现小规模的流产死胎情况，因此笔者利用逆转录-聚合酶鏈反应（RT-PCR）/聚合酶链反应（PCR）方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪圆环病毒Ⅱ型（PCV2）进行病原学检测，并对分离的PRRSV进行了测序。

1?材料与方法

1.1?样品

2017—2018年，从上海、江苏、浙江、安徽、江西、山东、福建等地的规模化猪场采集210份临床样品（肺、脾、淋巴结等），于-80 ℃下保存备用。

1.2?试剂

病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒、反转录试剂盒、2×GC rich PCR MasterMix（KT206）、Marker DL600、DL2000均购自天根生化科技（北京）有限公司;无水乙醇、氯仿、异丙醇等试剂均为国产或进口分析纯产品。

1.3?引物设计与合成

参考文献[4-7]设计引物，并由上海生工生物科技有限公司合成，猪瘟病毒序列采用套式PCR进行扩增，引物序列以及扩增片段大小见表1。

1.4?样品处理?取0.3 g样品，在1.5 mL EP管内剪碎并加入600 μL冰冻PBS缓冲液，然后用匀浆仪高速匀浆;-20 ℃下反复冻融3次，12 000 r/min在4 ℃下离心5 min，取上清备用。

1.5?病毒RNA/DNA的提取与检测

根据TIANGEN公司病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒、反转录试剂盒说明书提取病毒RNA或DNA，并将RNA反转录成cDNA，以cDNA或DNA为模板，分别扩增PRRSV、PRV、CSFV、PCV2。PCR反应程序如下：95 ℃ 3 min;95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 40 s，30个循环;72 ℃延伸10 min。最后的扩增产物用1.5%的琼脂糖凝胶电泳进行检测。

2?结果与分析

2.1?PRRSV RT-PCR检测结果

从210份临床样品中检测出78份阳性，平均阳性率为37.1%。其中上海地区样品阳性率为25.0%、江苏地区样品阳性率为35.0%、浙江地区样品阳性率为25.0%、安徽地区样品阳性率为90.0%、江西地区样品阳性率为18.5%、山东地区样品阳性率为14.8%、福建地区样品阳性率为56.2%，详细结果见表2。

2.2?PCV2 PCR检测结果

从210份临床样品中检测出189份阳性，平均阳性率为90.0%。其中，上海地区样品阳性率为89.3%、江苏地区样品阳性率为90.0%、浙江地区样品阳性率为90.6%、安徽地区样品阳性率为90.0%、江西地区样品阳性率为92.6%、山东地区样品阳性率为88.9%、福建地区样品阳性率为87.5%，详细结果见表3。

2.3?PRV PCR检测结果

从210份临床样品中检测出5份阳性，平均阳性率为2.4%。5份阳性样品均是在安徽地区发现的，其余地区均未检出，详细结果见表4。

3?结论与讨论

该试验主要针对华东地区猪繁殖与呼吸综合征的流行规律以及优势毒株开展，目的是对华东地区猪繁殖与呼吸综合征的流行规律以及优势毒株有所了解，并通过此次调查制定针对性防制措施。由于在此期间有些地区发生了小规模的母猪流产和死胎情况，因此对一些常见的引起母猪流产死胎的病毒性疾病CSFV、PRV进行检测，同时由于PCV2属于免疫抑制性疾病，可以与猪繁殖与呼吸综合征、伪狂犬等混合感染，特对PCV2也进行了检测。

该试验对从华东地区等地大中小规模猪场采集的210份临床样品进行检测，结果显示PRRSV阳性率37.1%，PCV2阳性率90%，PRV阳性率2.4%，且均在安徽地区发现，各地均未检测出猪瘟阳性;在上海、江苏、浙江、安徽、江西、山东、福建均存在不同程度的PRRSV感染，PRRSV阳性率与国内其他研究结果相符;PCV2几乎在每个猪场都存在，且阳性率较高，这与祝卫国[8]对PCV2的研究结果相符。这也说明可能是PRRSV与PCV2或者PRV混合感染造成的流产。

韦正吉等[9]在2008—2010年共从桂中地区采集221份临床病料，通过RT-PCR方法对PRRSV进行检测，结果显示高致病性PRRSV阳性率为37.56%，经典PRRSV阳性率为7.24%。朱丽等[10]在2017年对云南部分地区猪场PRRSV感染情况进行调查，分别检测了PRRSV抗体和抗原，结果显示PRRSV抗体阳性率为73.56%，抗原阳性率为18.31%;同时笔者还对猪瘟病毒、伪狂犬病毒和猪圆环病毒Ⅱ型抗原抗体进行了检测，结果表明这3种病毒均被检测到，说明也存在混合感染情况，而且PRRSV和PCV2阳性率最高。马振乾等[11]对我国2017年上半年4种猪常见疾病流行特点进行了检测分析，共检测了8 091份血清和415份病料，结果显示PRRSV抗体阳性率为85.04%，抗原阳性率为27.56%，也说明了我国一直都存在着PRRSV感染情况。在该试验中PCV2抗原检出率远远高于其他研究，有可能是采集样本的猪场有部分发病以及用来采集样本的猪群圆环病毒病感染率高但并未表现出明显病变。

这些研究表明，我国华东地区普遍存在高致病性猪繁殖与呼吸综合征感染，但各地区感染率有所差别，而且存在与PCV2或者PRV以及其他病原体混合感染的情况。针对2017—2018年华东部分地区猪场主要疫病的监测结果，确定存在猪伪狂犬病散发，猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病感染率增高的情况;应加强对猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病的防控，加强猪伪狂犬病的净化。不同猪场应该结合猪场的实际情况加强监测，选择适合的疫苗并制订适合自己猪场的免疫程序，防控主要疫病的发生。

参考文献

[1]鲍海梅.高致病性猪蓝耳病的预防对策[J].畜牧兽医科技信息，2018（11）：81.

[2]芦先英，许豆艳，郭金生，等.高致病性猪蓝耳病的诊断及防控措施[J].畜禽业，2016（11）：9-10.

[3]谭伟，邓显文，谢芝勋.猪繁殖与呼吸综合征病毒及疫苗的研究进展[J].中国畜牧兽医，2014，41（6）：240-247.

[4]ZHANG L J，FENG Y，MARTIN D P，et al.Genetic diversity and phylogenetic analysis of the ORF5 gene of PRRSV from central China[J].Research in veterinary science，2017，115：226-234.

[5]施研进，杨蓓，屈勇刚，等.新疆北疆部分地区PCV2的PCR检测及基因型分析[J].中国猪业，2014，9（3）：32-34.

[6]刘中原，刘石，徐卫松，等.利用PCR技术对猪伪狂犬疫苗含毒量的评价[J].浙江农业科学，2013（4）：475-477.

[7]刘梅芬，王淑娟，闫若潜，等.猪瘟病毒巢式RT-PCR检测方法的建立与应用[J].中国畜牧兽医，2016，43（9）：2285-2290.

[8]祝卫国.猪圆环病毒2型（PCV2）的研究[D].杨凌：西北农林科技大学，2008.

[9]韦正吉，黄溢泓，严斯刚，等.桂中地区2008-2010年猪瘟及猪繁殖与呼吸综合征的流行病学调查[J].黑龙江畜牧兽医（科技版），2011（9）：101-102.

[10]朱丽，苏琳琳，吕念词，等.2017年云南地区部分猪场主要疫病病原及血清学检测与分析[J].黑龙江畜牧兽医，2018（22）：80-83，247.

[11]马振乾，杨旭兵，刘晓东，等.2017年上半年我国4种常见猪病流行特点分析[J].黑龙江畜牧兽医，2018（18）：97-99.

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