标题 | 高效液相色谱法测定食品中3 种碱性橙含量 |
范文 | 李文辉++李窕妍++李俊毅 碱性橙是一种偶氮类碱性工业染料,主要用于纺织品、皮革制品及木制品的染色,已经被认定是一种可以使人致癌的物质,不得用于与人体长期直接接触的纺织和服装产品中。一些不法商贩为了增加食品的色泽光亮,以次充好, 在鲜海鱼、豆制品、腐竹、饮料等食品中使用碱性橙染色, 使消费者的身体健康受到了严重威胁。 碱性橙染料的种类主要有碱性橙21、碱性橙2和碱性橙22等3种,本方法采用高效液相色谱法,在GB/T 23496-2009的基础上,对色谱条件进行试验改进,建立一套更加快速、准确测定食品中非食用色素碱性橙含量的方法。 试验部分 试剂与溶液。除另有规定外,所有试剂均为分析纯,实验用水符合GB/T 6682中一级水要求。 液体样品:饮料; 甲醇,色谱纯; 乙腈,色谱纯; 20mmol/L乙酸铵溶液:称取1.54g乙酸铵溶于1000 mL水中; 定容液:取65mL甲醇加入35mL 20 mmol/L乙酸铵溶液中,混匀; 标准品:碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22,纯度≥95 %; 1.0mg/mL 碱性橙染料标准储备溶液:分别称取100mg(精确至0.1mg)碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22,置于100mL容量瓶中,加无水甲醇溶解并定容至刻度,混匀,该溶液在4 ℃条件下避光保存,有效期为1个月; 0.1mg/mL碱性橙染料标准溶液:准确移取10 mL碱性橙染料标准储备溶液于100mL容量瓶中,用定容液定容至刻度,混匀。 分别移取碱性橙染料标准溶液5.00mL、10.00mL、20.00mL于100 mL容量瓶中,用定容液定容至刻度,混匀,分别相当于5.00μg/mL、10.00μg/mL、20.00μg/mL浓度标准溶液。 仪器与设备。高效液相色谱,附有紫外检测器;天平:感量0.0001g和0.01g;超声波清洗仪;涡旋振荡器;电热板。 试验方法 将样品混匀,称取20g(精确至0.01g)样品于100mL烧杯中,电热板上加热挥发至近干,用定容液溶解转移到刻度试管中并定容至25mL,经0.45μm滤膜过滤后待进样。 高效液相色谱测定 色谱条件。 色谱柱:C18(4.6mm×250mm,5μm); 流动相:甲醇+20mmol/L乙酸铵; 流速:1.0mL/min; 梯度洗脫程序参见表1; 柱温:30 ℃; 检测波长:449nm; 进样量:20μL。 标准曲线绘制。 用配制的碱性橙染料标准工作液绘制以峰面积为纵坐标、工作溶液浓度为横坐标的标准工作曲线。 结果计算 试样中每种碱性橙染料的含量按下式分别计算: X= 式中: X——试样中每种碱性橙染料的含量(mg/kg); c——由标准曲线查出的试样液中每种碱性橙染料的浓度(μg/mL); V——样品最终定容体积(mL); m——试样的质量(g)。 计算结果保留小数点后一位数字。 结果与讨论 标准谱图。如图1。 干扰试验。在色谱条件下,食品中的添加剂苯甲酸、山梨酸、糖精钠、咖啡因在449 nm 处几乎无吸收, 不会干扰碱性橙的测定。 线性关系及检出限。按试验方法对碱性橙2 、碱性橙21 、碱性橙22等3 种碱性橙混合标准溶液系列进行测定,均在5.0~20.0 μg/mL范围内与峰面积呈线性关系, 线性回归方程、相关系数及检出限(3S/N)见表2。 回收试验及精密度。按试验方法对样品做加标回收试验, 结果见表3。 作者简介: 李文辉(1971-),男,广东梅县人,工程师,研究方向:食品检验。 |
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