标题 | 超高压提取罗汉果中罗汉果甜苷V的工艺优化 |
范文 | ![]() ![]() ![]() 罗汉果为葫芦科植物罗汉果Siraitia grosvenorii C. Jeffrey ex A. M. Lu et Z. Y. Zhang的干燥果实,性凉、味甘,清热润肺,滑肠通便,用于肺火燥咳,咽痛失音,肠燥便秘。罗汉果苷V作为罗汉果中的主要成分,是评价其质量的指标性成分[2]。本实验以罗汉果甜苷V的提取率为评价依据。 超高压技术应用于中药有效成分提取时,是利用100MPa以上的流体静压力作用于溶剂和中药的混合液,保压一段时间(几分钟)后卸压,然后进行分离纯化。超高压提取是在一个密闭的环境中进行的,没有溶剂的挥发,因此该技术更加符合绿色环保的要求。 本文采用超高压技术,通过单因素实验结合正交试验优化了罗汉果甜苷V的提取工艺,以期为开发罗汉果皂苷类活性成分提供理论依据。 材料与方法 材料与试剂。罗汉果;罗汉果甜苷标准品;甲醇、乙醇(分析纯);乙腈为(色谱纯);水为蒸馏水。 主要仪器与设备。SB25-12D型超声波提取仪;HPP.L3型超高压生物提取设备;岛津高效液相色谱仪LC-15C。 实验方法。 (1)样品的预处理 将罗汉果干燥后粉碎,过40目筛得到样品。 (2)提取罗汉果甜苷V的方法 精确称量用同一批次的样品0.5g,分别按照1:15的料液比加入纯净水,用不同的方法提取罗汉果甜苷。所有实验重复三次,取平均值。提取方法: ①超高压提取(UPE):提取条件的确定见第二部分[4]; ②超声提取(UAE):30KHz下,分别提取10min和30min; ③加热回流提取(HRE):100℃下分别水浴提取10min、30min和60min。 (3)色谱条件 提取液用0.45m微滤膜过滤,再用乙醇定容到50ml。检测条件为:Hypersil ODS C18色谱柱(4.0 mm×150 mm, 5m);柱温30℃;检测波长203nm;进样量10μL;流动相A为乙腈,B为水;流速1mL·min-1;梯度洗脱程序为:0-15min,23%乙腈;15-16min,23%-100%乙腈;16-25min,100%-100%乙腈。 (4)标准曲线的绘制 精确配制0.59mg/mL的罗汉果甜苷标准品溶液,分别进样10μL、16μL、28μL、35μL、40μL、60μL,测得标准溶液的HPLC图谱。绘制标准曲线,得回归方程:Y=496.3+38.92X,R2=0.9999。 结果与讨论 单因素实验。 (1)提取溶剂对罗汉果甜苷V提取率的影响 罗汉果甜苷的提取溶剂采用纯甲醇、纯乙醇、80%甲醇、80%乙醇和纯净水,选取料液比1:15(g/ml),200MPa下浸提2min,结果如图1所示。 从图1可知,纯净水提取率最高,且无毒、无不良气味。所以选择纯净水作为提取溶剂。 (2)浸泡时间对罗汉果甜苷V提取率的影响 提取溶剂为纯净水,选取料液比1:15(g/ml),分别浸泡0、2h、4h、7h和15h,200MPa下提取2min,结果如图2所示。 由图2可得,纯净水可以在较短的时间内溶解目标化合物,不需要浸泡。 (3)提取压力的影响 在其它条件相同的情况下,分别在压力100、200、300、400、500Mpa下浸提2min,结果如图3所示。 压力多方面影响了罗汉果甜苷V得率。由图3可以看出,200Mpa之前提取率随着压力的升高而提高,超过200MPa后提取率反而有所下降。因此,选取200Mpa作为提取压力。 (4)保压时间对罗汉果甜苷V提取率的影响 在其它条件相同的情况下,200Mpa下分别浸提1、2、3、4、5min,提取结果见图4。 由图4可见,保压时间3min最适宜。 (5)不同料液比对罗汉果甜苷V提取率的影响 在其它条件相同的情况下,选取料液比分别为1:5、1:10、1:20、1:30、1:40(g/mL),浸提3min,结果如图5。 由图5可得,选取料液比1:10左右比较适宜。 正交试验优化。 对以上单因素实验取得的结果,用正交试验进一步优化。见表1、表2。 由表2可知,影响罗汉果甜苷V提取率最大的因素是料液比,其次是压力。由极差分析结果得到的最佳提取工艺为:料液比1:10,压力300MPa,保压时间3min,提取率为52.269mg/g。 对比其他提取工艺。对比了UPE、UAE和HRE的提取技术,结果如表3所示。 由表可知,超高压的提取时间仅为3min,且提取率远高于超声和加热回流的提取率。所以,超高压提取罗汉果中的罗汉果甜苷Ⅴ是一种低耗高效的提取工艺。 本文对罗汉果甜苷进行了超高压提取。与传统方法相比,超高压提取能耗低、提取率高,且后續操作简便易行。常温提取能保持罗汉果甜苷的药理活性。而且超高压提取技术环境友好,是对罗汉果甜苷进行提取可优先考虑的方法。 作者简介: 王迪(1989-),女,山东聊城人,硕士研究生,聊城大学东昌学院,助教,研究方向:食品质量与安全。 |
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