超高效液相色谱质谱联用法测定蔬菜中多杀霉素等4种农药残留的分析探讨
刘鑫++张伟++李中
测定实验
首先，材料与试剂。标准品为德国Dr. Ehrenstorfer公司提供的有证标准物质，如茚虫威、噻虫嗪、氟硅唑、多杀霉素；同时试剂包括无水硫酸镁、Milli-Q高纯水、甲酸、乙腈、甲醇、氯化钠等。其次，样品前处理。取超过1000g样品，如大白菜、黄瓜、芹菜、空心菜、丝瓜等，去除杂物后取可食部分，将样品缩分至500g，通过处理进行密封，冷藏保存在4℃的环境中。①样品提取。称取10g样品，将其加入到100mL的离心管中，适当加入20mL的乙腈，高速匀浆1min；然后在离心管中加入3～5g的氯化钠，剧烈振摇1min，在室温下静置1h。②样品净化。移取上清液5～50mL到小烧杯中，并在50℃水浴温度下氮吹至1mL，上样之前用5mL乙腈-甲苯预淋PC/NH2串联柱；如果液面达到填料的顶部，必须要将样品浓缩液转移到净化柱上，再用5mL乙腈-甲苯的洗涤烧杯，在50蛇蛇独到水浴温度下氮吹至干，以便测定工作的有序实施。
实验结果与讨论
样品前处理条件的优化。蔬菜样品基质中含有较多的脂肪、维生素、有机酸等，这些物质会对检测结果的准确性产生影响，只有选择科学的样品前处理方法，才能很好地消除或降低基质效应。利用固相萃取技术进行净化时，应该选择不同的淋洗液进行洗脱，并采用多种固相萃取柱进行净化；使用基质固相分散萃取净化方法时，可以选用不同的净化填料进行筛选，如空心菜具有较深的色素和复杂的基质量，在空心菜空白样品中添加100μg/kg的混标，通过多次重复测定，借助纯标计算获得准确测定结果，更好地保护离子源、色谱柱，及时除去色素等杂质。
质谱条件的选择。稀释4种农药标准储备溶液，使其达到500μg/L，然后实施一级质谱扫描，继而确定各农药的准分子离子峰；然后利用这些准分子离子来选择离子监测，对碎裂电压进行优化，科学确定定性离子与定量离子，或者是利用多反应监测采集模式优化碰撞能量。由于茚虫威具有较低的灵敏度，在茚虫威出峰时要加300V电压，促进其响应值的提高。
色谱条件的选择。①筛选流动相。比较乙腈-0.1%甲酸水流动相体系、甲醇-0.1%甲酸水、乙腈-水、甲醇-水的分离效果，而4种农药都是正离子电离模式，将甲酸加入到流动相中，更易电离4种农药，具备较高的灵敏度，因此可以在水相中加入适量的甲酸。融合使用甲醇和邮寄溶剂时，往往难以分开氟硅唑和多杀霉素，而使用乙腈能够达到理想的分离效果。②柱温。分析柱温对分离效果造成的影响，4种农药的稳定性与灵敏度无明显变化，但泵压力会随柱温的升高而减小，柱中难以凝固样品溶液中的颗粒，因此需要选择40℃的温度，从而使样品溶液顺利通过色谱柱，延长色谱柱的寿命。
蔬菜样品的检测。采用超高效液相色谱质谱联用法随机抽检市售多种蔬菜样品，在生菜、青菜、芹菜、空心菜等蔬菜样品中检测出残留量为0.01～0.25mg/kg的茚虫威，而在芹菜、苋菜、茼蒿这3个样品中检测出残留量为0.01～0.16mg/kg的噻虫嗪，苋菜等样品中检测出残留量为0.03～0.04mg/kg的氟硅唑。而参照欧盟标准可知：氟硅唑在所有蔬菜中的MRL为0.01mg/kg，而本实验中抽检的蔬菜样品中，有2个苋菜样品超标，需要谨慎使用。
综上所述，采用超高效液相色谱质谱联用法测定蔬菜中多杀霉素等4种农药残留，通过优化质谱条件、色谱条件、净化方法等，快速、准确、简单、灵敏测定蔬菜中4种农药残留，从而获得准确的测定结果，为农产品质量控制和蔬菜中多殺霉素等大用量的农药残留监测提供技术支撑。
测定实验
首先，材料与试剂。标准品为德国Dr. Ehrenstorfer公司提供的有证标准物质，如茚虫威、噻虫嗪、氟硅唑、多杀霉素；同时试剂包括无水硫酸镁、Milli-Q高纯水、甲酸、乙腈、甲醇、氯化钠等。其次，样品前处理。取超过1000g样品，如大白菜、黄瓜、芹菜、空心菜、丝瓜等，去除杂物后取可食部分，将样品缩分至500g，通过处理进行密封，冷藏保存在4℃的环境中。①样品提取。称取10g样品，将其加入到100mL的离心管中，适当加入20mL的乙腈，高速匀浆1min；然后在离心管中加入3～5g的氯化钠，剧烈振摇1min，在室温下静置1h。②样品净化。移取上清液5～50mL到小烧杯中，并在50℃水浴温度下氮吹至1mL，上样之前用5mL乙腈-甲苯预淋PC/NH2串联柱；如果液面达到填料的顶部，必须要将样品浓缩液转移到净化柱上，再用5mL乙腈-甲苯的洗涤烧杯，在50蛇蛇独到水浴温度下氮吹至干，以便测定工作的有序实施。
实验结果与讨论
样品前处理条件的优化。蔬菜样品基质中含有较多的脂肪、维生素、有机酸等，这些物质会对检测结果的准确性产生影响，只有选择科学的样品前处理方法，才能很好地消除或降低基质效应。利用固相萃取技术进行净化时，应该选择不同的淋洗液进行洗脱，并采用多种固相萃取柱进行净化；使用基质固相分散萃取净化方法时，可以选用不同的净化填料进行筛选，如空心菜具有较深的色素和复杂的基质量，在空心菜空白样品中添加100μg/kg的混标，通过多次重复测定，借助纯标计算获得准确测定结果，更好地保护离子源、色谱柱，及时除去色素等杂质。
质谱条件的选择。稀释4种农药标准储备溶液，使其达到500μg/L，然后实施一级质谱扫描，继而确定各农药的准分子离子峰；然后利用这些准分子离子来选择离子监测，对碎裂电压进行优化，科学确定定性离子与定量离子，或者是利用多反应监测采集模式优化碰撞能量。由于茚虫威具有较低的灵敏度，在茚虫威出峰时要加300V电压，促进其响应值的提高。
色谱条件的选择。①筛选流动相。比较乙腈-0.1%甲酸水流动相体系、甲醇-0.1%甲酸水、乙腈-水、甲醇-水的分离效果，而4种农药都是正离子电离模式，将甲酸加入到流动相中，更易电离4种农药，具备较高的灵敏度，因此可以在水相中加入适量的甲酸。融合使用甲醇和邮寄溶剂时，往往难以分开氟硅唑和多杀霉素，而使用乙腈能够达到理想的分离效果。②柱温。分析柱温对分离效果造成的影响，4种农药的稳定性与灵敏度无明显变化，但泵压力会随柱温的升高而减小，柱中难以凝固样品溶液中的颗粒，因此需要选择40℃的温度，从而使样品溶液顺利通过色谱柱，延长色谱柱的寿命。
蔬菜样品的检测。采用超高效液相色谱质谱联用法随机抽检市售多种蔬菜样品，在生菜、青菜、芹菜、空心菜等蔬菜样品中检测出残留量为0.01～0.25mg/kg的茚虫威，而在芹菜、苋菜、茼蒿这3个样品中检测出残留量为0.01～0.16mg/kg的噻虫嗪，苋菜等样品中检测出残留量为0.03～0.04mg/kg的氟硅唑。而参照欧盟标准可知：氟硅唑在所有蔬菜中的MRL为0.01mg/kg，而本实验中抽检的蔬菜样品中，有2个苋菜样品超标，需要谨慎使用。
综上所述，采用超高效液相色谱质谱联用法测定蔬菜中多杀霉素等4种农药残留，通过优化质谱条件、色谱条件、净化方法等，快速、准确、简单、灵敏测定蔬菜中4种农药残留，从而获得准确的测定结果，为农产品质量控制和蔬菜中多殺霉素等大用量的农药残留监测提供技术支撑。
