江苏省海安市２０１９年一季度猪瘟抗体检测结果分析

    程素平 董飞 王秋生 林发根 柳丽

    

    

    

    摘要：于2019年4月份采取双随机的抽样方法对海安市10个镇5个规模猪场、50个散养户采集血样共400份进行猪瘟抗体检测，检测结果表明，海安市猪瘟疫苗免疫抗体阳性率平均为91.25%，平均阻断率为74.89%;区镇的抗体阳性率平均为97.00%，平均阻断率为79.81%;而规模猪场的抗体平均阳性率74.00%，平均阻断率65.07%。抗体检测对猪瘟免疫效果评价及免疫程序的制定有重要指导意义，对调整优化免疫程序、保证疫苗免疫效果至关重要。此次检测结果表明，海安市除2个“先打后补”的场免疫效果略差外，其他场和由村防员统一组织防疫的猪场免疫抗体阳性率均较高，良好的防疫质量在重大动物疫病防控中有不可替代的作用。

    关键词：猪瘟;阻断率;免疫程序;海安市

    中图分类号：S858.28? ? ? ? 文献标识码：A? ? ? ? 文章编号：1007-273X（2019）10-0010-03

    猪瘟是由猪瘟病毒引起猪的一种急性、热性、高度接触性传染病。以发病急、高热稽留和毛细血管壁变性引起广泛出血、坏死等变化为特征，是一种传染性强、病死率高的烈性传染病，对养猪业危害极大。虽采取了免疫等防疫措施，降低了猪瘟的感染率和发病率;但因疫苗接种量大、面广，防疫密度越来越高，在免疫剂量加大和免疫次数增加的情况下，并没有使猪瘟得到彻底控制。江苏省海安市目前虽无猪瘟大面积流行，但散发、慢性、非典型猪瘟时有发生，为及时掌握全市部分规模猪场和散养户的重大动物疫病免疫情况，同时对各个乡镇和村防员免疫效果进行考核，于2019年4月采取双随机的抽样方法对全市10个镇5个规模猪场、50个散养户采集血样共400份，用酶联免疫吸附试验分别进行了猪瘟、猪口蹄疫、猪蓝耳病的抗体检测。现将猪瘟检测结果报告如下。

    1? 材料与方法

    1.1? 材料

    1.1.1? 被检血清样品? 从2018年12月20日到2019年2月10日免疫记录中抽取2名监管员，每人抽4户。如果抽样的养殖户该批生猪已出售或缓防的，顺延到下一个农户;在做好生物安全的前提下，每头猪前腔静脉采血3～5 mL，每镇30份样品，全市共采集10个镇50个养猪场（户）和5个“先打后补”的规模猪场，因当前为防控非洲猪瘟的关键时期，为避免因采样等因素导致猪群发病，规模场的采样均由猪场内技术人员自己采样并送至市兽医站化验室。详细记录每份血液样品的来源、免疫程序、疫苗生产厂家、批号、接种剂量等有关信息，其中规模猪场血样100份、散养户血样300份，常规分离血清并编号，-20 ℃冷冻保存。

    1.1.2? 检测试剂和主要仪器? 猪瘟抗体阻断ELISA检测试剂盒（IDEXX，批号：M301）购自上海赛嘉生物科技有限公司，酶标仪RT-6000、Eppendorf移液器等其他仪器和耗材为本实验室自备。

    1.2? 检测方法

    1.2.1? 检测原理及方法? 利用阻断ELISA原理检测猪血清中猪瘟病毒抗体，如果被检样品中存在猪瘟病毒抗体，就会阻断辣根过氧化物酶标记的抗猪瘟病毒的单克隆抗体。单克隆抗体与猪瘟病毒抗原的结合通过辣根过氧化物酶与底物的显色程度进行判定，用酶标仪在单波长450 nm或双波长450 nm 与650 nm测定该反应体系的吸光度。当被检样品中含有猪瘟病毒抗体（阳性结果）时，显色就会变浅，当被检样品中不含有猪瘟病毒抗体（阴性结果）时，显色就会变深。样本的阻断率可以通过450 nm波长样本吸光度与阴性对照吸光度的比值来确定。试验严格按照猪瘟抗体检测试剂盒说明书操作。

    1.2.2? 判定标准? 在阴性对照的OD450>0.5，阳性对照血清的阻断率>50%，试验结果成立的前提下，被检样品的阻断率≥40%时判为阳性，被检样品的阻断率<40%时判为阴性。

    2? 结果与分析

    2.1? 海安市各区镇和“先打后补”规模场的猪瘟免疫抗体水平

    检测结果（表1）表明，2019年第一季度海安市猪瘟抗体阳性率91.25%，平均阻断率74.89%。5个“先打后补”的规模猪场猪瘟抗体平均阳性率为74.00%、平均阻断率为65.07%，10个镇50个养殖场（户）的猪瘟抗体阳性率平均为97.00%、平均阻断率为79.81%，均高于国家规定的70%的标准，表明海安市猪瘟防疫情况较好，免疫效果达到较高水平。

    2.2? 五个“先打后补”规模猪场的猪瘟免疫抗体水平

    规模猪场的猪瘟免疫抗体水平有较大差异，有两个场平均阳性率低于国家规定的70%标准（表2）。

    2.3? 海安市10个镇的猪瘟免疫抗体水平

    海安市10个镇的猪瘟免疫抗体水平均较好（表3），仅一个区镇的抗体阳性率低于90%，其余均高于90%，且平均阻断率也达到79.81%，说明海安市的猪瘟免疫水平在全体监管员和防疫员的共同努力下取得了较好的效果，为重大动物疫病的防控打下了坚实的基础。

    3? 讨论

    猪瘟是我国中长期动物疫病防治规划（2012-2020年）优先净化的12种动物疫病之一，海安市通过政府购买服务，防疫员包村包户，每年进行二次重大动物疫病普免、夏季集中补免和消毒灭源三大行动，同时监督规模猪场按本场疫苗免疫程序进行免疫并逐步完善综合防控措施，使猪瘟得到一定程度的控制，因此多年來未曾见疫病大流行。

    抗体检测是评估猪瘟疫苗的免疫效果，制定科学免疫程序的重要手段，本次检测采用美国IDEXX公司生产的猪瘟病毒抗体检测试剂盒，该试剂盒被广泛应用于检测猪瘟抗体，评估猪场的免疫状况，该试剂盒把阻断率≥40%作为猪瘟疫苗抗体阳性的判断标准，但据南文金等[1]报道，该试剂盒检测猪瘟疫苗抗体的阻断率达到50%时，猪瘟疫苗抗体水平相当于中和抗体滴度1∶32，此水平的中和抗体水平对猪群具有保护力，实际生产中要以阻断率≥50%且抗体合格率在90%以上才能达到比较理想的状态。阻断率大于40%小于50%只代表抗体阳性，不代表中和抗体能抵抗猪瘟野毒侵袭。

    检测结果表明，2019年第一季度海安市猪瘟疫苗免疫抗体阳性率平均为91.25%，平均阻断率为74.89%。区镇的抗体阳性率平均为97.00%，平均阻断率为79.81%;而规模猪场的抗体平均阳性率74.00%，平均阻断率65.07%，海安市重大动物疫病的防疫工作是在监管员的监督下，防疫员领取政府统一招标采购的疫苗（全程冷链运输）上门给养猪户进行防疫并详细记录免疫时间、疫苗批号、生产厂家等信息，市重大动物疫病指挥部定期或不定期进行检查，经过近几年的经验总结，全市防疫密度和防疫质量有了大幅提高，也多次得到省、市表扬。此次检测结果也表明海安市猪瘟免疫效果较好，仅一个乡镇低于90%，并且阻断率也在70%以上，与段正赢等[2]报道散养户的饲养管理水平较低，免疫空白、免疫接种不当，导致接种失败或对疫苗接种工作不重视不一致。

    本次采样的5个“先打后补”的规模猪场的样品均采自商品代群，虽然平均抗体阳性率达到74.00%，稍高于国家规定的70%的标准，但有二个场低于70%，一个场正好是70%。因当前为防控非洲猪瘟的关键时期，为避免因采样等因素导致猪群发病，规模场的采样均由猪场内技术人员自己采样并送至市兽医站化验室。经分析免疫程序等因素，A场保定人员感觉30 kg的猪比较好保定，采样人员也没有详细询问免疫时间，二免与采样时间仅间隔20 d，与南文金[1]等报道二次免疫接种后23 d采集的样品猪瘟疫苗抗体再次降低是一致的;而B场猪群采样时，猪体重在90 kg左右，距离二免的免疫时间超过3个月，抗体合格率正好为70.00%，平均阻断率只有60.73%，说明猪瘟抗体在免疫三个月后开始下降;C场猪瘟抗体阳性率和阻断率均最低，二免时间距采样间隔时间正好为一个月，按照常规应当是阳性率最高的时间，该场不高反低，可能与母源抗体的高低、免疫程序、首免时间过早、疫苗质量和操作程序有关，建议该猪场仔细分析原因，采购质量较好的疫苗，结合抗体监测的结果，调整免疫程序科学免疫，以减少疫病的发生，提高猪场的经济效益。规模化猪场需根据初生仔猪母源抗体水平及消长规律确定首免日龄。不同来源的仔猪根据母源抗体的高低来制定适合本场猪群猪瘟的免疫程序，不能一刀切[3]。

    实验室免疫抗体检测仅仅是一种手段，一次检测结果只能说明某段时间内猪群的免疫状况，通过此次免疫监测，尤其是C规模猪场的首免时间可能不合适，造成仔猪或保育猪群免疫效果不佳，进而出现免疫空档期，一般而言，母源抗体的被动免疫对新生仔猪十分重要，但与此同时也可能给疫苗接种带来一定的影响，特别是干扰疫苗的首次免疫效果，母源抗体效价较高时，体内未消失的母源抗体会中和一部分接种的弱毒疫苗并阻碍疫苗毒的复制，影响仔猪主动免疫的产生，猪场应根据母源抗体的消长规律或根据连续监测的结果，确定和调整最佳首免时间，通过免疫监测发现猪群不同生长阶段是否出现免疫空档期，及时加强免疫，并发现某些疫病的亚临床症状，早期控制疫病，降低传染病發生的几率与风险。

    猪瘟免疫是常规免疫，导致免疫失败的原因有：①免疫程序不合理。有些猪场也包括部分规模猪场照搬其他猪场免疫程序，不符合本场实际情况，导致免疫失败;仔猪首免日龄每个场都不一样，应根据本场母源抗体水平确定首免日龄;②猪场免疫抑制病的干扰，如高致病性猪蓝耳病、伪狂犬、圆环病毒2型等均会对猪体造成免疫抑制，机体免疫应答力下降，影响猪瘟免疫效果;③霉菌毒素也对猪体的免疫力有影响;④疫苗质量问题。养殖场在选择疫苗时不能只关注价格，也要关注疫苗的质量，如抗原含量，免疫维持的时间等;⑤规模猪场在选择防疫人员时要注重人员素质，防止规模场因防疫数量较多，如若待遇达不到一定的要求可导致防疫员有厌战情绪而导致防疫质量下降，或在规定的加免时间内不能及时加免导致免疫失败。

    养猪场应同时注意以下几个方面的工作：一是加强饲养管理和猪场环境控制;二是保证动物营养均衡;三是选择合适、质量过关的疫苗与药物，制订合理的免疫和用药方案，充分发挥疫苗及药物的作用，做好新老疫病的控制和预防工作;四是实行严格的生物安全措施，特别是当前处在防控非洲猪瘟的关键时刻，加强猪场卫生消毒，严格把关猪场引种和病死猪无害化处理;五是猪场特别是规模化猪场要做好疫病的定期诊断与监测，有针对性采取防控措施。

    抗体检测对猪瘟免疫效果评价及免疫程序的制定有重要指导意义，对调整优化免疫程序、保证疫苗免疫效果至关重要。此次检测结果表明，海安市除2个“先打后补”的场免疫效果略差外，其他场和由村防员统一组织防疫的猪场免疫抗体阳性率均较高，良好的防疫质量在重大动物疫病防控中有不可替代的作用。海安市每年组织4次集中监测，既是对村防员进行考核，也对规模场的防疫有促进作用，及时掌握猪瘟群体免疫力，对猪瘟的预防、控制和净化具有积极的推动作用，同时对抗体不合格的猪场分析原因，适时补免，结合非洲猪瘟防控，对养殖场户宣传生物安全的重要性，督促养殖户加强饲养管理，搞好综合防控工作，提高猪群的抵抗力，保障养猪业的健康发展。

    参考文献：

    [1] 南文金，黄健强，胡鸿惠，等.某规模化猪场猪瘟抗体水平的监测[J].动物医学进展，2016，37（3）：120-123.

    [2] 段正赢，周志忠，周丹娜，等.猪瘟疫苗免疫抗体检测与分析[J].养猪，2018（4）：105-106.

    [3] 程素平，丁永龙，张小彬，等.不同来源的仔猪猪瘟母源抗体检测结果比较[J].畜牧与兽医，2015，47（4）：141-142.