β—葡聚糖对江黄颡鱼生长性能、血清生化指标的影响
孙纪伟+齐遵利
摘要：为了解β-1，3-葡聚糖添加到配合饲料中对江黄颡鱼生长性能、血清生化指标、机能、体成分等重要指标产生的影响，选用初始体重为（1.75±0.01）g的江黄颡鱼720尾，随机分为6组，每组4个重复。1组投喂基础饲料，5组投喂分别添加200、400、600、800和1 000 mg/kg β-1，3-葡聚糖的试验饲料，进行42 d的养殖试验。由试验结果显示，各组江黄颡鱼之间的增重率（WGR）、特定生长率（SGR）、饲料系数（FC）、成活率（SR）、肥满度（CF）和肝体比（HSI）差异不显著（P>0.05）。其中，与对照组相比，添加β-葡聚糖的组实验前后体重、增重率和特定生长率都有一定程度的增高，在G600达到最高，饲料系数与对照组相比有所下降。饲料中添加β-1，3-葡聚糖对各组江黄颡鱼血清总蛋白、尿素胆固醇、甘油三酯、谷丙转氨酶活性和谷草转氨酶活性没有显著性影响（P>0.05）。其中，与对照组相比，添加组的血清总蛋白含量有所升高（P>0.05），β-葡聚糖添加组血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性有所降低（P>0.05）。结果表明，饲料中添加一定水平β-1，3-葡聚糖对江黄颡鱼的生长性能和血清生化指标均没有显著影响。造成该结果的原因和机制有待进一步研究。
关键词：江黄颡鱼（Pseudobagrus vachelli）；β-葡聚糖；生长性能；血清生化指标
葡聚糖分α-葡聚糖和β-葡聚糖两种。其中β-葡聚糖是目前使用最广的一种免疫活性多糖。具有促生长、降血脂、降血糖、免疫調节、抗氧化和保肝等多种生物活性和生理功能[1-2]。酵母来源的β-葡聚糖因其免疫促进作用而广泛应用于水产动物饲料中。赵红霞等研究亦表明，在饲料中长期添加250 mg/kg β-1，3-葡聚糖能够提高凡纳滨对虾的生长性能，促进营养物质代谢[3]。刘栋辉等[4]发现啤酒酵母β-葡聚糖可以显著提高斑节对虾（Penaeus monodon）的增重率和存活率。β-葡聚糖也具有一定的免疫增强作用。谭北平等[5]研究亦表明，葡聚糖能够显著提高凡纳滨对虾免疫保护力、吞噬指数以及血细胞总数等非特异性免疫指标。体内和体外试验结果均表明，β-葡聚糖可以增强大西洋鲑（Salmo salar）抗病原感染的能力[6]。上述研究表明，β-葡聚糖作为一种具有免疫刺激作用的生物活性物质，对水产动物的生长和生理功能表现出多方面的作用，是一种研究相对深入、应用广泛的免疫增强剂[7-10]。目前，关于β-葡聚糖对水产动物的促生长作用机理仍未有明确结论，还有待进一步研究。
江黄颡鱼（Pseudobagrus vachelli）别名瓦氏黄颡鱼，隶属于鲶形目、鮠科、黄颡鱼属，分布生活淡水中、底层，杂食性，是一种重要渔业产业结构调整的经济鱼类。当前，针对江黄颡鱼的养殖所存在的问题，当务之急是减少化学药物和抗生素的使用。因此，在疾病防控方面，免疫增强剂的开发和应用成为新的重要方向。本研究以江黄颡鱼为实验对象，主要通过在饲料中添加不同剂量水平的β-1，3-葡聚糖进行试验，研究β-1，3-葡聚糖对江黄颡鱼的生长、血清生化指标产生的影响，以便促进江黄颡鱼规模化健康养殖的发展。
1材料与方法
1.1试验饲料
在试验中主要脂肪源用鱼油，而蛋白来源则主要用鱼粉以及大豆浓缩蛋白，糖源主要通过高筋面粉提供，其基础饲料组成和营养成分见表1。选用的β-葡聚糖的主链为β-1，3结构，纯度>90%。在基础饲料中分别添加β-葡聚糖200、400、600、800、1 000 mg/kg，来进行5组饲料投喂实验。具体操作过程如下：首先把饲料原料粉碎，之后使用40目筛绢网过筛，然后根据配方准确称取，最后使用SLX-80型双螺杆挤压机制备颗粒饲料，其粒径大小为1.5 mm，再在55 ℃高温下将颗粒饲料烘干，之后自然冷却，最后装到密封袋，保存在-20 ℃冰箱备用。
1.2试验用鱼的饲养管理
试验用鱼首先需要暂养在室外的水泥池，在暂养期间，对试验用鱼投喂商品饲料，其中不含葡聚糖，日投喂2次。试验在室内进行，养殖系统包括容积为350 L的玻璃缸，水体体积约为300 L。养殖用水为曝气的自来水，经珊瑚石、活性炭过滤。实验开始时，称量江黄颡鱼的体重（1.75±001）g作为初始体重，最终选取720尾，任意分6组，每个组设置4个重复，设置30尾鱼为一个重复组。在开始试验之前，用基础饲料对其驯养大概1周，待情况稳定之后，实验开始投喂5种试验饲料和基础饲料，投喂的基础饲料组记作G0（对照组），不间断投喂量依次为200、400、600、800、1 000 mg/kg的β-葡聚糖饲料组分别记为G200、G400、G600、G800和G1 000。试验期间定量投喂，日投喂量（以饲料干物质计算）为体重的4%～6%，每天8：30和18：30各投喂一次。试验过程要求自然光照，同时每天测定溶氧、水温、pH等并做好管理日志记录，包括记录死亡鱼尾数以及重量。试验期间水温在28～31 ℃之间，盐度1‰，pH在7.5～8.0之间，氨氮<0.1 mg/L，溶氧>6.0 mg/L。一周换水2次，每次换水量为总体积的1/3。试验期42天。
1.3样品的采集及分析
待试验结束后经过停食24 h，统计每组鱼的存活数量，并称量鱼体总重，然后从每组中随机取15尾鱼，采用注射器（1 mL），在鱼的尾静脉抽血，采集到血液之后静置4 h以上，然后通过4 000 r/min离心机将采集到的血液离心10 min，收集齐上清液并进行分装来制备血清，在-80 ℃保存备用；采血后解剖，摘取肝脏样品保存于-80 ℃冰箱中保存待测。
1.4指标分析
特定生长率（SGR），增重率（WGR），饲料系数（FC），肥满度（CF），成活率（SR），肝体比（HSI）按照以下公式计算：
1.5统计与分析
平均数±标准差（Mean±SD）来表示试验结果，通过SPSS 17.0 软件来方差分析，利用Duncans多重比较来进行组间的显著差异性分析，差异显著性的水平为P<0.05。
2结果分析
2.1添加β-葡聚糖对江黄颡鱼生长的影响
添加β-1，3-葡聚糖组，江黄颡鱼的终末体重、增重率和特定生长率以G600为最高，但组间差异不显著（P>0.05）（如表2）。随着饲料中β-1，3-葡聚糖添加量的增加，江黄颡鱼饲料系数呈上升的趋势，添加组饲料系数与对照组相比没有显著差异（P>0.05），对照组和各添加组之间肥满度、肝体比无显著性差异（P>0.05）。
各添加组之间的终末体重、增重率、特定生长率和饲料系数无显著性差异（P>0.05）。
2.2添加β-葡聚糖对江黄颡鱼的血清生化指标的影响
饲料中添加β-葡聚糖对江黄颡鱼血清生化指标没有显著影响（表3），但添加β-1，3-葡聚糖有升高血清总蛋白含量的趋势，以及降低尿素、胆固醇的趋势。血清甘油三酯含量除了G400 和G1 000 组外，其余各添加组也均低于对照组，但组间差异均不显著（P>0.05）。相比对照组，β-葡聚糖添加组血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性均较低，但组间差异均不显著（P>0.05）。
3讨论
3.1饲料中添加β-葡聚糖对江黄颡鱼生长的影响
有学者研究发现，通过在动物饲料中添加一定量的β-1，3-葡聚糖后可促进其生长性能、同时也可提高其成活率、增重率，并且能够降低其饲料系数[11-13]。在对虾饲料中添加0.4%的β-葡聚糖时，可以显著提高南美白对虾的饲料利用率，降低其饲料成本，同时能够起到增强食欲、促进生长的作用[14]。谭北平等将β-1，3/1，6-葡聚糖添加到凡纳滨对虾的基础饲料中，由结果发现可以促进其生长，同时提高其抗病力[5]。吴春玉等[15]在花鲈（Lateolabrax japonicus）的饲料中添加β-1，3-葡聚糖可以显著提高花鲈的增重率、特定生长率。本试验结果显示，饲料中添加β-1，3-葡聚糖使得江黄颡鱼的增重率、特定生长率有所提高，其促生长作用与以上学者的研究结果一致。目前，β-葡聚糖作为一种免疫刺激剂，在促进水产动物的生长机能方面的研究相对较多，不过这种促进作用的作用机制目前还不是十分明确。不过多数研究学者一致认为，β-葡聚糖对水产动物并没有直接的营养促进作用，而是通过免疫调节在促生长方面起到积极作用，其原理是机体的免疫屏障主要通过β-葡聚糖来增强，这样机体就减少为支持免疫应答而消耗营养物质，水产动物的生长的促进就是通过降低免疫应答中的产物对生长的抑制作用来实现的[16-17]。王银东等[18]指出β-葡聚糖能够被消化吸收从而提供能量，主要一直被作为营养物质。不过也有学者研究发现，长期在饲料中添加β-葡聚糖，对水产动物生长作用没有显著影响[19-23]。张健等研究发现，凡纳滨对虾饲料中添加β-葡聚糖对其生长的促进作用[24]，可能是主要通过疾病抵抗能力的增强来实现生长的。不过另有研究表明，相比酵母来源的β-葡聚糖组，取自硅藻来源的β-葡聚糖组中养殖实验大西洋鳕仔鱼存活率明显比较高，因此可以这样认为β-葡聚糖的来源也可以影响其营养作用的发挥[25]，其原因可能是不同来源的β-葡聚糖在化學结构上的不同对其功效也产生差异影响[6]。虽然β-葡聚糖对水产动物的生长性能的作用研究已经有很多，但是其作用结果却由于添加剂量[26]、生长阶段[27]或饲料配方[28]等不同而表现出差异性。所以，有关β-葡聚糖对江黄颡鱼生长性能产生影响的作用和机制的深入研究还有待继续进行，主要综合考虑其不同生长阶段、差异的饲料营养水平、不一样的投喂频率、投喂方式以及β-1，3-葡聚糖的不同来源等各个方面的因素，从而进一步明确江黄颡鱼健康养殖中β-葡聚糖的应用。
3.2饲料中添加不同水平 β-葡聚糖对江黄颡鱼血清生化指标的作用
血清生化指标的作用主要反映机体物质代谢以及某些组织器官的不断变化，一般作为评价鱼体健康和营养状况的重要指标。在血清中的蛋白质主要作用是维持渗透压，其含量的变化主要与机体的生理机能有密切关系，可以准确反应动物的健康状况，具有一定免疫功能。
相对于对照组，各添加组江黄颡鱼胆固醇含量较低，其中血清甘油三酯含量除了G400 和G1000 组外，其他各添加组也低于对照组，这样的结果与孙立威等[29]在壳聚糖对吉富罗非鱼（Oreochromis niloticus）的作用影响中得到印证，血清中甘油三酯和胆固醇的变化情况可反映机体脂质代谢功能。由此说明，β-葡聚糖具有降血脂的功效。
实验结果显示，在饲料中添加一定量的β-1，3-葡聚糖对降低江黄颡鱼血清中的谷丙转氨酶活性有一定作用，但是各实验组之间并无显著性差异，对于β-1，3-葡聚糖在血清谷丙转氨酶活性方面的作用机制还需要进一步加强研究。机体中转氨酶含量升高是肝细胞损伤的标志，因此转氨酶是反映肝功能的重要指标。本研究中我们可以看出，在实验鱼饲料中添加一定量β-葡聚糖可以达到促使血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性降低的作用，但是并没有呈现显著效果，因此可以表明β-葡聚糖对肝脏的保护有一定作用，这样的实验结果，与葡聚糖对鲈鱼[23]、酵母细胞壁免疫多糖在草鱼等的研究结果是一致的[30]。不过Mahmoud等对海鲷（Pagellus erythrinus）的研究结果也表明[31]，β-葡聚糖对血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酶及尿素等机体指标并无显著影响。有学者的研究结果显示，寡糖-中草药复合物对鱼体的谷丙转氨酶活性的降低有一定作用[32]。贺国龙等把酵母细胞壁免疫多糖添加到饲料中可以降低草鱼（Ctenopharyngodon idellus）血清中谷丙转氨酶活性[33]。出现上述不同结果的原因以及β-葡聚糖对江黄颡鱼血清生化指标的影响尚需更加深入的研究。
参考文献：
[1]
李万坤，闻洪斌，才学鹏，等.β-葡聚糖的免疫增强作用机理的研究进展[J].中国畜牧兽医，2007， 34（5）：151-155
[2] 曹敏，陈军，王元春，等.葡聚糖的研究进展[J].广西轻工业，2011（4）：17-20
[3] 赵红霞，曹俊明，王安利，等.饲料中长期添加β-1，3-葡聚糖对凡纳滨对虾生长性能、体成分和生化指标的影响[J].动物营养学报.2010（05）：1464-1470
[4] 刘栋辉，阳会军，刘永坚.β-葡聚糖和维生素C对斑节对虾生长和抗病力的效果[J].中山大学学报（自然科学版）.2002（04）：59-62（下转第15页）
[5] 谭北平，周歧存，郑石轩，等.β-1，3/1，6-葡聚糖制剂对凡纳对虾生长及免疫力的影响[J].高技术通讯，2004，14（5）：73-77
[6] 蔡成岗，蒋新龙，蒋昌海.β-葡聚糖结构、功能与开发研究进展[J].农产品加工：学刊，2011（9）：114-117
[7] 艾庆辉，麦康森.鱼类营养免疫研究进展[J].水生生物学报，2007，31（3）：425-430
[8] 安尚泽，汪岩，王雷，等.β-葡聚糖对仔猪生长性能和肠道黏膜形态的影响[J].延边大学农学学报，2012，1：125-131
[9] 蔡成岗，蒋新龙，蒋昌海.β-葡聚糖结构、功能与开发研究进展[J].农产品加工：学刊，2011（9）：114-117
[10] 陈复生，左锦静，姚永志.大孔树脂吸附和分离陈皮中黄酮类化合物的研究[J].食品科技，2006（7）：121-124
[11] Guttvik A，Paulsen B，Dalmo R A，Espelid S，Lund V，Bgwald J.Oral administration of Lipopolysaccharide to Atlantic salmon （Salmo salar L.） fry.Uptake，distribution，Influence on growth and immune stimulation[J].Aquaculture，2002，214（1-4）：35-53
[12] López N，Cuzon G，Gaxiola G，Taboada G，Valenzuela M，Pascual C，Sánchez A，Rosas C.Physiological，nutritional and immunological role of dietary β-1，3-glucan and ascorbic acid 2-monophosphate in Litopenaeus vannamei juveniles[J].Aquaculture，2003，224（1-4）：223-243
[13] 王计刚，曹俊明，赵红霞，等.β-1，3-葡聚糖对凡纳滨对虾生长性能的影响[J].现代渔业信息，2008，23（6）：3-5，25
[14] 陈云波，周洪琪，华雪铭，等.饲料中添加β-葡聚糖对南美白对虾的生长、存活及饲料系数的影响[J].淡水渔业，2002，32（5）：55-56
[15] 吴春玉.β-葡聚糖对花鲈生长、免疫和抗氧化功能的影響[D].华中农业大学，2014
[16] 张华，方热军.β-葡聚糖对动物的免疫增强和促生长作用及其机理[J].湖南饲料，2009（4）：29-31
[17] 谭崇桂，冷向军，李小勤，等.多糖、寡糖、蛋白酶对凡纳滨对虾生长、消化酶活性及血清非特异性免疫的影响[J].上海海洋大学学报，2013，22（1）：93-99
[18] 王银东，张欣欣，吴世林.β-葡聚糖在水产动物中的应用[J].饲料博览（技术版）.2008（05）：33-35
[19] 许国焕，吴月嫦，陶家发.两种多聚糖对彭泽鲫生长影响及免疫促进作用的初步研究[J].水利渔业，2002，22（4）：49-51
[20] 余水法，蔡春芳，宋学宏，叶元土，崔益军，强晓亮.β-葡聚糖对河蟹免疫功能的影响[J].中国饲料，2006，5：20-22
[21] 季高华，刘至治，冷向军.饲料中添加 β-葡聚糖和低聚果糖对中华鳖幼鳖生长和血清SOD、溶菌酶活力的影响[J].上海水产大学学报，2004，13（1）：36-40
[22] 李富东，叶继丹，王琨，孙云章，凌泽春，王子甲.长时间连续投喂β-葡聚糖对鲤生长性能及非特异性免疫功能的影响[J].动物营养学报，2009，21（4）：499-505
[23] Ye J D，Wang K，Li F D，et al.Effects of Long-Term Dietary Administration of β -glucan on Tissue Enzyme Activity and Disease Resistance in Common Carp，Cyprinus carpio[J].The Israeli Journal of Aquaculture，2011：1-6
[24] 张健.免疫增强剂对凡纳滨对虾幼虾生长、免疫及抗应激的影响[D].广州：中山大学，2012：2-7
[25] Skjermo J，Storsseth T R，Hansen K，Hand A，ie G.Evaluation of β-（1→3，l→6）-glucans and high-M alginate used as immunostimu latory dietary supplement during first feeding and weaning of Atlantic cod （Gadus morhua L.） [J].Aquaculture，2006，261（3）：1088-1101
[26] Sang H M，Fotedar R.Effects of dietary β-1，3-glucan on the growth，survival，physiological and immune response of marron，Cherax tenuimanus （smith，1912）[J].Fish & Shellfish Immunology，2010，28（5-6）：957-960
[27] 李富东，叶继丹，王琨，等.长时间连续投喂β-葡聚糖对鲤生长性能及非特异性免疫功能的影响[J].动物营养学报.2009（04）：499-505
[28] 刘立鹤，郑石轩，谭斌，等.不同饲料配方下β-葡聚糖对凡纳滨对虾生长性能、非特异性免疫力的影响及成本分析[J].饲料工业.2005（08）：26-30
[29] 孙立威，文华，蒋明，等.壳寡糖对吉富罗非鱼幼鱼生长性能、非特异性免疫及血液学指标的影响[J].广东海洋大学学报，2011，31（3）：43-49
[30] 贺国龙，刘立鹤，乐义详，等.酵母细胞壁免疫多糖对草鱼免疫功能的影响[J].粮食与饲料工业.2010（07）：43-45
[31] Mahmoud A.O.D，S K，Manabu I ，et al.Interaction effects of dietary supplementation of heat-killed Lactobacillus plantarum and β-glucan on growth performance，digestibility and immune response of juvenilered sea bream，Pagrus major[J].Fish & Shellfish Immunology，2015：1-10
[32] 周傳朋，刘波，王广宇，等.寡糖-中草药复合物和黄霉素对异育银鲫生长、免疫及抗病力的影响[J].淡水渔业.2009（03）：46-51
[33] 贺国龙，刘立鹤，乐义详，等.酵母细胞壁免疫多糖对草鱼免疫功能的影响[J].粮食与饲料工业.2010（07）：43-45
（收稿日期：2016-11-04）
