饲料中n—3长链多不饱和脂肪酸水平对花鲈幼鱼血清生化指标的影响

    徐瀚林

    

    

    摘 要：为研究饲料中n-3 长链多不饱和脂肪酸（n-3 LC-PUFA）水平对花鲈幼鱼血清生化指标的影响，以初始体重（29.2±1.34）g的花鲈幼鱼为研究对象，分别投喂n-3 LC-PUFA含量分别为0.13、0.30、056、1.03、1.45、2.41（%饲料干物质）的饲料，实验周期63 d。结果表明，饲料中n-3 LC-PUFA水平对花鲈幼鱼血清碱性磷酸酶（ALP）、乳酸脱氢酶（LDH）活性、总甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）含量无显著性影响（P>0.05），而血清中肌酐（CREA）水平在饲料中n-3含量为1.45%时显著高于其余各组（P<0.05）。结果表明，以血清CREA含量为标准，花鲈幼鱼饲料中n-3 LC-PUFA含量应低于1.45%。

    关键词：花鲈；n-3长链多不饱和脂肪酸；血清生化指标

    鱼油是海水鱼类饲料中非常重要的组成部分，其主要功能之一就是为鱼类提供生长所需的n-3 长链多不饱和脂肪酸（n-3 LC-PUFA）。对大多数海水鱼类而言，n-3 LC-PUFA是其必需脂肪酸。其对鱼类的作用包括：（1）促进鱼类组织细胞正常发育，维持其正常生理机能[1-2]；（2）促进鱼类神经系统发育[3]；（3）促进鱼类繁育[4]；（4）提高免疫力[5]。但大多数海水鱼类缺乏由亚油酸和亚麻酸合成LC-PUFA的能力[6]。在自然环境中，海水鱼类从藻类或是食物链中等级较低的生物中摄入n-3 LC-PUFA。而对于养殖的海水经济鱼类而言，饲料是其最主要的营养来源，因此，在饲料中必须添加适量n-3 LC-PUFA以满足海水鱼类正常生理需要。当前，鱼油是海水养殖鱼类饲料中n-3 LC-PUFA的主要提供者。但随着近年来水产饲料工业的不断发展，鱼油需求量逐年增加，而近年来捕捞业衰退、海洋资源严重匮乏导致鱼粉和鱼油产量逐年下降，难以满足市场需求，鱼油资源不足是导致养殖成本升高的一个重要因素。同时，为发展低鱼油低鱼粉含量的环境友好水产饲料，贯彻水产行业可持续发展战略，必须提高饲料中鱼油的利用率。因此，科研人员已经从各个方面研究饲料中n-3 LC-PUFA水平对养殖鱼类影响，以期提高鱼类对于n-3 LC-PUFA的利用率，以达到降低饲料中鱼油水平的目的。

    花鲈（Lateolabrax japonicus）是我国重要的海水养殖品种，在我国南北方均有养殖，肉食性，性格凶猛，具有养殖周期短，经济价值高等优势。根据中国渔业统计年鉴（2015），2014年我国花鲈产量为113 803 t，位居海水养殖鱼类前列。花鲈的一个非常重要的特点是其饲料普及率较高。研究n-3 饲料中LC-PUFA水平对花鲈幼鱼血清生化指标的影响能够一定程度上为设计营养合理，高效健康的花鲈幼鱼饲料提供参考。

    1 材料及方法

    1.1 实验饲料

    实验基础饲料以脱脂鱼粉和豆粕为主要蛋白源，粗蛋白含量约为46%，粗脂肪含量约为12%，通过向基础饲料中添加不同量的DHA富含油（DHA含量：总脂肪酸的37.65%；形式：DHA-甘油三酯；江苏天凯生物科技有限公司）以及EPA富含油（EPA含量：总脂肪酸的52%；形式：EPA-甘油三酯；河北海源健康生物科技有限公司），用软脂酸甘油酯调平，保持DHA/EPA为205左右，制作含有不同浓度（0.10%、0.25%、0.60%、1.00%、1.50%、2.50%干物质）n-3 LC-PUFA的6种等氮等能的饲料，同时在饲料中添加2%ARA富含油以满足花鲈幼鱼生长的需求。饲料中n-3 LC-PUFA含量通过高效气相色谱（GS， HP6890， USA）测定，分别占干物质含量的0.13%、0.30%、0.56%、1.03%、1.45%、2.41%。

    饲料原料磨碎后过320 μm筛，按比例由少到多混匀后，加入不同比例的n-3 LC-PUFA富含油，充分混合后加水制粒（FII型双螺杆挤条机，华南理工大学，广州）。颗粒大小约为2.5 mm× 5.0 mm，制好的饲料颗粒45 ℃烘干12 h，存放于-20 ℃待用。

    1.2 养殖实验

    实验用鱼由宁波市象山县外高泥村象山港湾育苗场购得，为当年同批孵化所得苗种。正式养殖实验进行前，先将实验所用到的花鲈幼鱼暂养，养殖环境为海水浮式网箱（3.0 m× 3.0 m× 3.0 m），同时投喂商业饲料2周，以促使实验鱼转饵，以适应实验用颗粒饲料以及所处养殖水环境。

    实验开始前24 h，停止商业饲料的投喂，使实验鱼处于饥饿状态，用丁香酚（1：10 000）麻醉后对实验鱼体重进行称量。选取规格相近的实验鱼（29.2±1.34）g，将其随机分配到18个海水浮式网箱中（1.5 m×1.5 m×2.0 m），每个网箱放入30尾。每组饲料设三个重复网箱。每日早晚（早晨5：00及下午5：00）各饱食投喂一次。养殖实验共持续9周，期间水温为22.5 ℃到29.5 ℃，盐度为28‰ 到33‰，海水溶氧约为6 mg/L。

    1.3 血清生化指标的测定

    待养殖试验结束，将实验鱼饥饿24 h，准备进行取样。取样前用丁香酚对实验鱼进行麻醉，用酒精擦拭鱼体，用27号针和1 mL注射器通过抽取尾静脉血的方式由花鲈尾部取血，将取出的血液放入无菌的新1.5 mL离心管中，室温静置2 h，然后放入4 ℃冰箱静置4 h。将分层后的全血在4 ℃下500 g离心10 min，吸取上层血清入新无菌的1.5 mL离心管中，-20 ℃保存待用。将每个网箱获得的血清混合。血清碱性磷酸酶（ALP）活性、肌酐（CREA）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）及乳酸脱氢酶（LDH）含量根据相应试剂盒说明书使用迈瑞BS-100自动生化分析仪（迈瑞，中国）进行测定。

    1.4 计算与数据分析

    数据统计使用SPSS 20.0，首先进行单因素方差分析（one-way ANOVA），当数据达到显著水平后（P<0.05），采用Turkey方差齐性分析，数据表示为“平均值±标准误”。

    2 结果

    在本实验研究水平内，饲料中n-3 LC-PUFA含量未对花鲈幼鱼血清ALP、TG、TC及LDH造成显著性影响（P>0.05）（图1）。而血清中肌酐水平在n-3含量为1.45%时显著高于其余各组（P<0.05）。

    3 讨论

    血液是动物十分重要的组织，其生理生化指标能够很好地反映机体状态。本实验研究发现，随着饲料中n-3 LC-PUFA水平上升，花鲈血清中ALP含量呈现先上升后下降的趋势，但这种趋势并不显著。ALP在调控水产动物代谢中起到十分重要的作用，在体内能够直接调控磷酸基团的转移与代谢[7]，除此之外，研究表明ALP在鱼类体内还参与了对免疫反应的调控[8]。本实验结果说明，饲料中n-3 LC-PUFA能够在一定程度上增强鱼体健康水平，但这种作用效果并不明显。

    而在饲料中n-3 LC-PUFA水平为145%（干物质）组，实验鱼血清CREA的含量显著高于其它各组。CREA是肌酸和磷酸肌酸的代谢最终产物，主要通过肾小球进行代谢。临床上，血清CREA常用于反映肾脏受损情况。而在鱼类的研究中，其与肌肉活动量相关[9]。本实验在海水浮式网箱中进行，实验随机分组，因此实验鱼可认为有较相似的活动量。因此，1.45% n-3 LC-PUFA组肌酐的显著性升高可能与实验鱼肾脏受损有关。

    血清TC和TG含量是衡量鱼体脂肪沉积与否的重要因素。本实验中，血清TC和TG含量并未显著受到饲料中n-3 LC-PUFA水平的影响，这与在Wistar大鼠中的研究结果类似：在饲料中添加n-3 LC-PUFA后，其血清TG与TC含量与对照组无显著性差异。同时，本实验中，血清TC含量呈现先升高后下降的趋势，但趋势并不显著，这可能是由于当饲料中的n-3 LC-PUFA处在合适水平时，鱼体健康水平上升，TC含量恢复正常所致。

    LDH存在于机体各组织器官中，参与机体糖酵解过程。临床上，乳酸脱氢酶也用于反映组织细胞受损程度的指标。在本实验中LDH的水平并未随着n-3 LC-PUFA水平的变化发生显著变化。这从一定程度上说明，本研究所涉及的n-3 LC-PUFA水平并不会对花鲈幼鱼组织如心脏、肝脏等造成显著性伤害。

    综上所述，饲料中适宜n-3 LC-PUFA水平（约1.03%干物质）能够一定程度提高花鲈幼鱼鱼体健康水平，而从血清CREA的角度表明，花鲈幼鱼饲料中n-3 LC-PUFA含量应低于1.45%。

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    [3] Estévez A， Kanazawa A. Fatty Acid Composition of Neural Tissues of Normally Pigmented and Unpigmented Juveniles of Japanese Flounder Using Rotifer and Artemia Enriched in n-3 HUFA[J]. Fisheries science， 1996， 62（1）： 88-93

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    [6] Ghioni C， Tocher D R， Bell M V， et al. Low C 18 to C 20 fatty acid elongase activity and limited conversion of stearidonic acid， 18： 4 （n–3）， to eicosapentaenoic acid， 20： 5 （n–3）， in a cell line from the turbot， Scophthalmus maximus[J]. Biochimica et Biophysica Acta （BBA）-Molecular and Cell Biology of Lipids， 1999， 1437（2）： 170-181

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    [10] 柳红芳， 陆菊明， 母义明， 等. n-3 多不饱和脂肪酸对高脂诱导胰岛素抵抗大鼠肝脏和骨骼肌胰岛素受体及葡萄糖转运蛋白 4 的作用[J]. 中华糖尿病杂志 （1006-6187）， 2005， 13（3）： 192-195

    Abstract：The study was conducted to evaluate the effect of dietary n-3 LC-PUFA content on serum biochemical indexes of juvenile Japanese seabass （Lateolabrax japonicus）. Triplicate groups of 30 Japanese seabass were fed with six diets with grade levels of n-3 LC-PUFA （0.13%， 0.30%， 0.56%， 1.03%， 1.45% and 2.41% of dry weight） to apparent satiation twice daily for 9 weeks. According to the results， the activity of serum alkaline phosphatase （ALP） and lactate dehydrogenase （LDH） and the content of serum total cholesterol （TC） and triglyceride were not significantly affected by the dietary n-3 LC-PUFA level （P<0.05）. In the 1.45% n-3 LC-PUFA group， the creatinine （CREA） content was significantly higher than other groups. Based on the index of CREA， the optimum dietary n-3 LC-PUFA level may not be higher than 1.45%.

    Key words：Japanese seabass； n-3 LC-PUFA； serum biochemical indexes

    （收稿日期：2016-05-31）