正交试验优选麸煨肉豆蔻片的炮制工艺
袁子民 刘欢 王静 贾天柱 陈剑锋
摘要：目的 优选切片后肉豆蔻的最佳炮制工艺。方法 以煨制温度、煨制时间和加麸量为考察因素，以总木脂素、挥发油和脂肪油的含量为评价指标，采用L9（34）正交设计，优选麸煨肉豆蔻片的炮制工艺。结果 肉豆蔻片的最佳炮制工艺为100 g肉豆蔻加40 g麦麸，110～120 ℃煨制20 min。结论 该工艺合理，可靠，可为肉豆蔻炮制新工艺的研究提供依据。
关键词：肉豆蔻片；麸煨；挥发油；脂肪油；总木脂素；正交试验
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.03.020
中图分类号：R283.3 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）03-0074-03
Abstract： Objective To optimize the processing technology of sliced Myristicae Semen. Methods Roasting temperature， roasting time and the amount of bran were set as factors， and the content of total lignans， volatile oil， fatty oil were set as evaluation indicators. The processing technology of sliced Myristicae Semen was optimized by L9（34） orthogonal test. Results The optimal processing technology was as following： 40 g bran plus 100 g sliced Myristicae Semen， roasting for 20 minutes at 110-120 ℃. Conclusion The process is reasonable and reliable， which can provide references for new processing technology of Myristicae Semen.
Key words： sliced Myristicae Semen； bran-roasted； volatile oil； fatty oil； total lignans； orthogonal test
肉豆蔻为肉豆蔻科植物肉豆蔻Myristica fragrans houtt.的干燥成熟种仁，具有温中行气、涩肠止泻功效。主要成分为挥发油、木脂素、脂肪油等[1-2]。肉豆蔻生品需要炮制后作为药用，自古有“去其油用其熟”之说，目前炮制方法很多，药典收录方法为麸煨肉豆蔻[3]，但亦有切片煨或打碎后煨者[4-5]。为改变传统工艺，利于工业化生产，进一步增强减毒增效的作用，本研究采用肉豆蔻切片后再进行麸煨的炮制新工艺，传统麸煨为肉豆蔻未切片整个直接麸煨，切片后麸煨能够增加麸煨的受热面积，利于挥发油中肉豆蔻醚、黄樟醚毒性成分[6]及脂肪油的去除，同时还能提高饮片的稳定性，避免存放过程中黄曲霉素的污染。因此，本研究采用正交试验法对肉豆蔻切片后麸煨的炮制新工艺进行优选，确定最佳炮制工艺，为麸煨肉豆蔻炮制新工艺的研究、生产及炮制机理的深入研究提供依据。
1 仪器与试药
SartoriusCP225D十万分之一分析天平，SG3300型超声波清洗器（上海冠特超声仪器有限公司），U-3010型紫外可见分光光度计（日本日立公司），UW220H型电子分析天平（日本岛津公司），电热恒温水浴锅（北京市永光明医疗仪器厂）。
肉豆蔻（浙江中医药大学饮片厂提供，产地印度尼西亚，批号090414），经辽宁中医药大学贾天柱教授鉴定为肉豆蔻科植物肉豆蔻Myristica fragrans houtt.的干燥成熟种仁。肉豆蔻片，自制（肉豆蔻润后，切成厚片，3～5 mm）。去氢二异丁香酚对照品（中国食品药品检定研究院，批号11838-201102）；甲醇、石油醚为分析纯，水为娃哈哈纯净水。
2 方法与结果
2.1 炮制工艺试验设计
根据预试验结果，选取麸煨温度（A）、麸煨时间（B）、麦麸加入量（C）3个因素分别进行三水平考察（见表1）。分别取肉豆蔻片200 g，与麦麸同置炒制容器内，按L9（34）正交试验设计进行试验后，筛去麸皮，放凉，即得。以肉豆蔻总木脂素、挥发油、脂肪油含量作为评价指标，并计算综合评分。综合评分=40×总木脂素含量÷最大总木脂素含量+20×最小挥发油含量÷挥发油含量+40×最小脂肪油含量÷脂肪油含量。
2.2 总木脂素含量测定
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取去氢二异丁香酚对照品适量，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成300 μg/mL对照品溶液。
2.2.2 线性关系考察 分别精密量取上述对照品溶液0.05、0.10、0.2、0.3、0.4 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成1.5、3.0、6.0、9.0、12.0 μg/mL对照品溶液，以甲醇为空白，于274 nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程Y=0.133 1X-0.011 1（r=0.999 9）。结果去氢二异丁香酚在15.0～120.0 μg范围内线性关系良好。
2.2.3 供试品溶液制备 取各正交试验项下麸煨肉豆蔻片粉末（过20目筛）0.1 g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0 mL置10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液[7]。
2.2.4 精密度试验 取同一供试品溶液，以甲醇为空白，于274 nm处测定吸光度，重复操作6次。结果表明仪器精密度良好，RSD=1.21%。
2.2.5 重复性试验 取同一麸煨肉豆蔻片样品，按“2.2.3”项下方法分别制备6份供试品溶液，以甲醇为空白，于274 nm处测定吸光度，RSD=2.11%，结果表明该方法重复性良好。
2.2.6 稳定性试验 取同一麸煨肉豆蔻片供试品溶液，分别于0、2、4、6、8 h以甲醇为空白，于274 nm处测定吸光度，RSD=1.74%，结果表明供试品溶液在8 h内稳定。
2.2.7 加样回收率试验 取同一批麸煨肉豆蔻片样品（已知含量为1.206 5%）0.05 g，精密称定，各6份，分别精密加入去氢二异丁香酚对照品溶液（浓度为300 μg/mL）2.0 mL，再精密加入甲醇48.0 mL，其余按“2.2.3”项下方法分别制备6份供试品溶液。以甲醇为空白，于274 nm处测定吸光度，计算回收率，结果见表2，表明回收率良好。
2.2.8 含量测定 取各正交试验项下麸煨肉豆蔻片粉末（过20目筛）0.1 g，精密称定，按“2.2.3”项下方法分别制备供试品溶液，以甲醇为空白，分别于274 nm处测定吸光度，根据回归方程计算其总木脂素含量。
2.3 挥发油含量的测定
取正交试验项下麸煨肉豆蔻片粉末（过20目筛）18.0 g，精密称定，按2010年版《中华人民共和国药典》一部附录XD中挥发油测定法测定。
2.4 脂肪油含量的测定
取正交试验项下麸煨肉豆蔻片粉末（过20目筛）1.0 g，精密称定，按2010年版《中华人民共和国药典》一部附录IX N中脂肪油测定法测定。
2.5 正交试验结果与方差分析
正交试验安排与结果见表3，方差分析见表4。直观分析表明，影响麸煨工艺的主要因素依次为A>C>B，A因素对炮制工艺有显著影响，其他因素影响不显著。由方差分析可知，A因素对提取工艺有显著影响，其他因素影响均不显著。经肉豆蔻片最佳炮制工艺为A2B2C1，即100 g肉豆蔻片加40 g麦麸，110～120 ℃煨制20 min。
2.6 工艺验证及与传统工艺比较
为保证该工艺的重复性、稳定性，本试验按确定的最佳炮制工艺，进行3次工艺验证试验，取肉豆蔻片200 g进行炮制，并与肉豆蔻生品及药典法炮制麸煨肉豆蔻进行比较，结果见表5。结果表明，该炮制工艺稳定、可靠，重复性好，并在去除脂肪油方面优于面煨法。
3 讨论
本试验曾对肉豆蔻片的切制工艺进行考察，以不易破碎、不出现翘片为准，确定浸润肉豆蔻时间为10～12 h、切片厚度为厚片。
本试验以肉豆蔻总木脂素、挥发油、脂肪油含量作为评价指标，采用综合评分法对正交试验结果进行评价。木脂素为肉豆蔻有效成分，其含量越高越好，故将最大木脂素含量设为40分。挥发油既是有效成分又是毒性成分，含量不是降得越低越好，故将最小挥发油含量设为20分。脂肪油含量则是越低越好，故将最小脂肪油含量设为40分。
肉豆蔻在存放过程中易受黄曲霉素污染而发霉，肉豆蔻切片后麸煨可增加其饮片的稳定性，以减少黄曲霉素的污染，有利于保证肉豆蔻饮片的质量，便于临床应用。另外，传统麸煨温度为150～160 ℃，而切片后麸煨的温度为110～120 ℃，利于有效成分的稳定。
参考文献：
[1] 张蕾，徐云峰，沈硕，等.肉豆蔻的化学成分研究[J].中国现代中药， 2010，12（6）：16-17.
[2] 李飞，杨秀伟，程燕，等.肉豆蔻木脂素的体外代谢初步研究[J].中国新药杂志，2008，17（7）：560-561.
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010：127.
[4] 崔学义，季宇彬.肉豆蔻制工艺研究[J].中国中药杂志，1992，17（10）：599-600.
[5] 陈之伟.肉豆蔻炮制经验介绍[J].中药通报，1984，9（5）：23-24.
[6] 江苏新医学院.中药大辞典[M].上海：上海科学技术出版社，1986：394.
[7] 袁子民，胡娜，王静，等.肉豆蔻、麸煨肉豆蔻中总木脂素的含量测定[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（12）：112-113.
（收稿日期：2015-04-23）
（修回日期：2015-05-08；编辑：陈静）
摘要：目的 优选切片后肉豆蔻的最佳炮制工艺。方法 以煨制温度、煨制时间和加麸量为考察因素，以总木脂素、挥发油和脂肪油的含量为评价指标，采用L9（34）正交设计，优选麸煨肉豆蔻片的炮制工艺。结果 肉豆蔻片的最佳炮制工艺为100 g肉豆蔻加40 g麦麸，110～120 ℃煨制20 min。结论 该工艺合理，可靠，可为肉豆蔻炮制新工艺的研究提供依据。
关键词：肉豆蔻片；麸煨；挥发油；脂肪油；总木脂素；正交试验
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.03.020
中图分类号：R283.3 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）03-0074-03
Abstract： Objective To optimize the processing technology of sliced Myristicae Semen. Methods Roasting temperature， roasting time and the amount of bran were set as factors， and the content of total lignans， volatile oil， fatty oil were set as evaluation indicators. The processing technology of sliced Myristicae Semen was optimized by L9（34） orthogonal test. Results The optimal processing technology was as following： 40 g bran plus 100 g sliced Myristicae Semen， roasting for 20 minutes at 110-120 ℃. Conclusion The process is reasonable and reliable， which can provide references for new processing technology of Myristicae Semen.
Key words： sliced Myristicae Semen； bran-roasted； volatile oil； fatty oil； total lignans； orthogonal test
肉豆蔻为肉豆蔻科植物肉豆蔻Myristica fragrans houtt.的干燥成熟种仁，具有温中行气、涩肠止泻功效。主要成分为挥发油、木脂素、脂肪油等[1-2]。肉豆蔻生品需要炮制后作为药用，自古有“去其油用其熟”之说，目前炮制方法很多，药典收录方法为麸煨肉豆蔻[3]，但亦有切片煨或打碎后煨者[4-5]。为改变传统工艺，利于工业化生产，进一步增强减毒增效的作用，本研究采用肉豆蔻切片后再进行麸煨的炮制新工艺，传统麸煨为肉豆蔻未切片整个直接麸煨，切片后麸煨能够增加麸煨的受热面积，利于挥发油中肉豆蔻醚、黄樟醚毒性成分[6]及脂肪油的去除，同时还能提高饮片的稳定性，避免存放过程中黄曲霉素的污染。因此，本研究采用正交试验法对肉豆蔻切片后麸煨的炮制新工艺进行优选，确定最佳炮制工艺，为麸煨肉豆蔻炮制新工艺的研究、生产及炮制机理的深入研究提供依据。
1 仪器与试药
SartoriusCP225D十万分之一分析天平，SG3300型超声波清洗器（上海冠特超声仪器有限公司），U-3010型紫外可见分光光度计（日本日立公司），UW220H型电子分析天平（日本岛津公司），电热恒温水浴锅（北京市永光明医疗仪器厂）。
肉豆蔻（浙江中医药大学饮片厂提供，产地印度尼西亚，批号090414），经辽宁中医药大学贾天柱教授鉴定为肉豆蔻科植物肉豆蔻Myristica fragrans houtt.的干燥成熟种仁。肉豆蔻片，自制（肉豆蔻润后，切成厚片，3～5 mm）。去氢二异丁香酚对照品（中国食品药品检定研究院，批号11838-201102）；甲醇、石油醚为分析纯，水为娃哈哈纯净水。
2 方法与结果
2.1 炮制工艺试验设计
根据预试验结果，选取麸煨温度（A）、麸煨时间（B）、麦麸加入量（C）3个因素分别进行三水平考察（见表1）。分别取肉豆蔻片200 g，与麦麸同置炒制容器内，按L9（34）正交试验设计进行试验后，筛去麸皮，放凉，即得。以肉豆蔻总木脂素、挥发油、脂肪油含量作为评价指标，并计算综合评分。综合评分=40×总木脂素含量÷最大总木脂素含量+20×最小挥发油含量÷挥发油含量+40×最小脂肪油含量÷脂肪油含量。
2.2 总木脂素含量测定
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取去氢二异丁香酚对照品适量，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成300 μg/mL对照品溶液。
2.2.2 线性关系考察 分别精密量取上述对照品溶液0.05、0.10、0.2、0.3、0.4 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成1.5、3.0、6.0、9.0、12.0 μg/mL对照品溶液，以甲醇为空白，于274 nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程Y=0.133 1X-0.011 1（r=0.999 9）。结果去氢二异丁香酚在15.0～120.0 μg范围内线性关系良好。
2.2.3 供试品溶液制备 取各正交试验项下麸煨肉豆蔻片粉末（过20目筛）0.1 g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0 mL置10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液[7]。
2.2.4 精密度试验 取同一供试品溶液，以甲醇为空白，于274 nm处测定吸光度，重复操作6次。结果表明仪器精密度良好，RSD=1.21%。
2.2.5 重复性试验 取同一麸煨肉豆蔻片样品，按“2.2.3”项下方法分别制备6份供试品溶液，以甲醇为空白，于274 nm处测定吸光度，RSD=2.11%，结果表明该方法重复性良好。
2.2.6 稳定性试验 取同一麸煨肉豆蔻片供试品溶液，分别于0、2、4、6、8 h以甲醇为空白，于274 nm处测定吸光度，RSD=1.74%，结果表明供试品溶液在8 h内稳定。
2.2.7 加样回收率试验 取同一批麸煨肉豆蔻片样品（已知含量为1.206 5%）0.05 g，精密称定，各6份，分别精密加入去氢二异丁香酚对照品溶液（浓度为300 μg/mL）2.0 mL，再精密加入甲醇48.0 mL，其余按“2.2.3”项下方法分别制备6份供试品溶液。以甲醇为空白，于274 nm处测定吸光度，计算回收率，结果见表2，表明回收率良好。
2.2.8 含量测定 取各正交试验项下麸煨肉豆蔻片粉末（过20目筛）0.1 g，精密称定，按“2.2.3”项下方法分别制备供试品溶液，以甲醇为空白，分别于274 nm处测定吸光度，根据回归方程计算其总木脂素含量。
2.3 挥发油含量的测定
取正交试验项下麸煨肉豆蔻片粉末（过20目筛）18.0 g，精密称定，按2010年版《中华人民共和国药典》一部附录XD中挥发油测定法测定。
2.4 脂肪油含量的测定
取正交试验项下麸煨肉豆蔻片粉末（过20目筛）1.0 g，精密称定，按2010年版《中华人民共和国药典》一部附录IX N中脂肪油测定法测定。
2.5 正交试验结果与方差分析
正交试验安排与结果见表3，方差分析见表4。直观分析表明，影响麸煨工艺的主要因素依次为A>C>B，A因素对炮制工艺有显著影响，其他因素影响不显著。由方差分析可知，A因素对提取工艺有显著影响，其他因素影响均不显著。经肉豆蔻片最佳炮制工艺为A2B2C1，即100 g肉豆蔻片加40 g麦麸，110～120 ℃煨制20 min。
2.6 工艺验证及与传统工艺比较
为保证该工艺的重复性、稳定性，本试验按确定的最佳炮制工艺，进行3次工艺验证试验，取肉豆蔻片200 g进行炮制，并与肉豆蔻生品及药典法炮制麸煨肉豆蔻进行比较，结果见表5。结果表明，该炮制工艺稳定、可靠，重复性好，并在去除脂肪油方面优于面煨法。
3 讨论
本试验曾对肉豆蔻片的切制工艺进行考察，以不易破碎、不出现翘片为准，确定浸润肉豆蔻时间为10～12 h、切片厚度为厚片。
本试验以肉豆蔻总木脂素、挥发油、脂肪油含量作为评价指标，采用综合评分法对正交试验结果进行评价。木脂素为肉豆蔻有效成分，其含量越高越好，故将最大木脂素含量设为40分。挥发油既是有效成分又是毒性成分，含量不是降得越低越好，故将最小挥发油含量设为20分。脂肪油含量则是越低越好，故将最小脂肪油含量设为40分。
肉豆蔻在存放过程中易受黄曲霉素污染而发霉，肉豆蔻切片后麸煨可增加其饮片的稳定性，以减少黄曲霉素的污染，有利于保证肉豆蔻饮片的质量，便于临床应用。另外，传统麸煨温度为150～160 ℃，而切片后麸煨的温度为110～120 ℃，利于有效成分的稳定。
参考文献：
[1] 张蕾，徐云峰，沈硕，等.肉豆蔻的化学成分研究[J].中国现代中药， 2010，12（6）：16-17.
[2] 李飞，杨秀伟，程燕，等.肉豆蔻木脂素的体外代谢初步研究[J].中国新药杂志，2008，17（7）：560-561.
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010：127.
[4] 崔学义，季宇彬.肉豆蔻制工艺研究[J].中国中药杂志，1992，17（10）：599-600.
[5] 陈之伟.肉豆蔻炮制经验介绍[J].中药通报，1984，9（5）：23-24.
[6] 江苏新医学院.中药大辞典[M].上海：上海科学技术出版社，1986：394.
[7] 袁子民，胡娜，王静，等.肉豆蔻、麸煨肉豆蔻中总木脂素的含量测定[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（12）：112-113.
（收稿日期：2015-04-23）
（修回日期：2015-05-08；编辑：陈静）
