贯叶连翘提取物中金丝桃苷的含量测定

    王建舫++穆祥

    摘要：为建立一种高效液相色谱-紫外检测法（HPLC-UV）测定贯叶连翘提取物中金丝桃苷含量的方法。采用博纳艾杰尔Venusil MP C18色谱柱 （150 mm×4.6 mm， 5 μm），以甲醇-1%磷酸（42：58）为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长350 nm，柱温25 ℃，结果表明金丝桃苷在0.025～0.25。mg/mL范围内线性关系良好（r=0.999 5），平均加样回收率为97.66%（n=6），峰面积的相对标准偏差（RSD）为2.68%。该方法专属性强、重复性好，可用于贯叶连翘提取物中金丝桃苷的含量测定。

    关键词：贯叶连翘；金丝桃苷；高效液相色谱；含量测定

    中图分类号：853.7 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2014）12-0008-02

    贯叶连翘（Hypericum performatum L.）为藤黄科金丝桃属多年生草本植物，其味苦、辛，性平，可清心明目、调经活血、止血生肌、解毒消炎[1]。金丝桃苷（Hyperin）是贯叶连翘主要的有效成分之一，为黄酮醇苷化合物。本试验采用高效液相色谱法对贯叶连翘提取物中金丝桃苷的含量进行了测定，建立了一种专一性强、重复性好的测定方法，以期为贯叶连翘提取物的质量控制提供依据。

    1 仪器与试药

    1.1 仪器

    Waters Alliance e2695型高效液相色谱仪；美国Millipore水纯化系统；针筒式微孔滤膜过滤器（上海兴亚净化材料厂产品，孔径0.22 μm）。

    1.2 药品与试剂

    金丝桃苷（批号E-0193，购自上海同田生物技术股份有限公司）；贯叶连翘提取物，本实验室自制；甲醇（色谱纯，天津市光复精细化工研究所）。

    2 方法与结果

    2.1 色谱条件

    博纳艾杰尔Venusil MP C18色谱柱（5 μm， 150 mm×4.6 mm）；流动相：甲醇-1%磷酸（42：58）；流速1.0 mL/min；检测波长350 nm；柱温25 ℃。

    2.2 溶液的制备

    2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取金丝桃苷对照品10 mg置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解定容，制成浓度为1.0 mg/mL的对照品贮存液。精密吸取金丝桃苷对准品贮备液0.125、0.250、0.500、0.750、1.000、1.250 mL，分别放置于5 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，分别得到0.025、0.050、0.100、0.150、0.200、0.250 mg/mL的对照品工作溶液。

    2.2.2 样品溶液的制备 精密称取贯叶连翘提取物80.0 mg，置5 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容。用0.20 μm滤膜过滤，取续滤液，即得提取物样品溶液。

    2.3 专属性试验

    精密吸取浓度为0.100 mg/mL的金丝桃苷对照品溶液和样品溶液各20 μL，注入液相色谱仪中，由色谱图（图1）知，在金丝桃苷对照品色谱相应的位置上，样品溶液具有相同保留时间的色谱峰。

    2.4 线性关系考察

    分别精密吸取浓度为0.025、0.050、0.100、0.150、0.200、0.250 mg/mL的对照品溶液10 μL，自动进样注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以金丝桃苷浓度（mg/mL）为横坐标，峰面积值为纵坐标，计算回归方程y=22 613 825x+16 861，r=0.999 5，结果表明，在0.025～0.25。mg/mL范围内，峰面积与金丝桃苷浓度呈良好的线性关系（图2）。

    2.5 精密度试验

    取浓度为0.100 mg/mL的金丝桃苷对照品溶液，连续进样6次，每次进样10 μL，测定峰面积，结果峰面积的相对标准偏差（RSD）为1.25%，表明仪器精密度良好。

    2.6 重复性试验

    按照“2.2.2”项下方法，重复配制6份贯叶连翘提取物样品溶液，各取20 μL注入色谱仪，结果6份供试品峰面积RSD为2.33%，说明方法重复性良好。

    2.7 溶液稳定性试验

    按照“2.2.2”项下方法，配制样品溶液，分别于配制后0、2、4、6、8和10 h进样20 μL，测定峰面积，结果表明，金丝桃苷10 h内峰面积RSD为2.12%，表明样品溶液在10 h内稳定。

    2.8 加样回收率试验

    称取已知金丝桃苷含量的贯叶连翘提取物约200 mg，平行制备6份，置10 mL棕色容量瓶中，分别加入对照品贮存液1.0 mL，按“2.2.2”方法制备6份样品溶液，进样10 μL注入色谱仪，计算加样回收率。结果6份样品平均回收率为97.66 %，RSD为2.68%，说明回收率良好。

    2.9 样品的测定

    按“2.2.2”项下方法制备3份样品溶液，分别注入高效液相色谱仪，进样10 μL，同时取浓度为0.050 mg/mL的金丝桃苷对照品进样10 μL，按照“2.1”项下条件测定，以外标一点法计算贯叶连翘提取物中金丝桃苷的平均含量为0.26%。

    3 小结

    本试验采用高效液相色谱-紫外检测法测定了贯叶连翘提取物中金丝桃苷的含量，方法学考察证明该试验中使用的方法良好，可以作为贯叶连翘提取物中金丝桃苷含量测定的方法。

    参考文献：

    [1] 王晓利，张俊松，罗 谦，等. HPLC法测定贯叶连翘药材及提取物中金丝桃素的含量[J].中药材，2006，29（10）：1047-1049.