投喂激素催产光唇鱼试验

    林衍峰+严云志

    

    

    

    摘要：针对目前光唇鱼人工繁殖操作繁琐、亲鱼死亡率高、繁殖率较低的问题，研制了一种激素口服颗粒。将LHRH-A2、HCG和DOM溶解于生理盐水中，吸附于浮性颗粒饵料内，表面涂覆一层添加维生素E的鸭油制成催熟剂和催产剂。用投喂的方式对光唇鱼进行催熟和催产，平均每尾雌鱼产卵677粒、出苗372尾，平均受精率71.19%、孵化率77.25%。光唇鱼口服催熟剂最佳剂量为（LHRH-A2）7.5 μg/kg体重·次，口服催产剂最佳剂量为（LHRH-A2）45 μg+（HCG）1 500 IU+（DOM）18 mg/kg体重。

    关键词：光唇鱼;人工繁殖;催熟剂;催产剂;口服剂

    中图分类号：S961.2 文献标识码：B

    在鱼类人工繁殖中普遍使用注射激素法，此外还有浸泡法[1]、口服法[2]、埋植法[3]等。有研究证明，促性腺激素释放激素（GnRH）及其类似物口服后经鱼类的消化道吸收进入血液循环，从而刺激脑垂体促性腺激素（GtH）细胞的分泌活动[4]，适用于一些难以注射操作、极易产生应激死亡的小型鱼类的人工繁殖。光唇鱼（Acrossocheilus fasciatus）个体小，平均怀卵量3 736粒/尾，体重相对怀卵量85粒/g[5]，种群内个体性成熟不同步[6]，体质娇嫩、应激反应强烈，大规模人工繁殖较为困难。颉志刚采用注射催产、人工授精，催产率达到80%以上[7]。巫一安等用注射催产，自然产卵率超65%，产后亲鱼死亡率50%左右[8]。张玉明等在饵料中添加维生素E促进性腺发育，用微流水刺激诱导亲鱼在6 d中分批产卵，每尾雌鱼平均产卵341粒、出苗203尾[9]。针对目前人工繁殖操作繁琐、亲鱼死亡率高、繁殖率较低的问题，本试验采用投喂激素法进行催产，以期找到一种安全高效的光唇鱼人工繁殖方法。

    1材料与方法

    1.1亲鱼来源与培育

     试验用光唇鱼为2～3冬龄性成熟个体，体重45～55 g，于2015年1月采自休宁县率水河，在黄山市恒坤自然观光农业有限公司流水鱼池中驯养。混凝土制流水鱼池长6.5 m、宽3.9 m、深12 m，池内水深0.4～0.6 m，流速0.01～0.2 m/s。水源从迴岭河引入，水质清澈，水温3～23 ℃，溶氧量8 mg/L以上，pH值6.73～7.12，盐度小于0.01‰，可溶解固体总量小于9.7。2015年3月水温达到10 ℃时开始驯食，投喂蛋白含量40%的浮性颗粒饵料，每天6：00、18：00各投喂1次，根据摄食情况调整投喂量，每次控制在20 min内吃完。

    1.2雌雄比例和养殖密度

     雌性体侧有6条黑色横斑，雄性沿体侧有1条黑色纵条、胸部有玫瑰红色的渲染[9]。试验分为5组，每组2个试验重复，另设2个对照组，共12个鱼池。每池放养100尾亲鱼，密度约4尾/m2，雌雄比例1∶1。

    1.3口服剂型制备

     将激素溶解于生理盐水中，均匀喷洒在蛋白含量40%的浮性颗粒饵料上，晾干后表面涂覆一层添加维生素E的鸭油制成口服催产剂，置于2～4 ℃冷藏箱中避光保存。其中鸭油用量为饵料重量5%，维生素E添加量为鸭油重量0.1%。

    1.4激素组合及用量设计

     激素采用宁波激素二厂生产的促黄体素释放激素A2（LHRH-A2）、绒促激素（HCG）和多潘立酮（DOM）。根据预先用注射法所做敏感性试验得知催熟剂剂量为（LHRH-A2）2.5 μg/kg体重、催产剂剂量为（LHRH-A2）15 μg+（HCG）500 IU+（DOM）6 mg/kg体重，根据注射法激素浓度扩大设置5个倍数浓度梯度和1个空白对照组，各组激素含量见表1。表1各组激素含量表

    剂型分组每100g饵料中催产药物含量ⅠⅡⅢⅣⅤ对照组催熟剂催产剂LHRH-A2/μg255075100125/LHRH-A2/μg150300450600750/HCG/IU5 00010 00015 00020 00025 000/DOM/mg60120180240300/1.5投喂激素催熟

     水温稳定达到18 ℃以上1周后，从2015年5月10日开始投喂催熟剂，每隔7 d于18点投喂1次，投喂量为鱼群体重1%。在长0.6 m、宽0.5 m、深0.15 m的塑料框内，内衬40目纱绢制成的网箱，底部铺设一层直径10～15 mm砾石作为光唇鱼的产卵巢，水温达到20 ℃以上时在池中进水口处放置4个产卵巢。

    1.6投喂激素催产

     经4～6周的催熟培育，雌鱼腹部膨大柔软，雄鱼体侧的纵行黑纹异常醒目、黑纹上下现耀眼金黄色过渡带、胸部呈鲜艳红色、口角布满凸起的白色珠星，当雄鱼在产卵巢附近追逐雌鱼，表明亲鱼性腺已发育成熟。先停食1 d，次日6点投喂催产剂，投喂量为鱼群体重1%。

    1.7受精卵收集孵化

     水温20～23 ℃时，投喂催产剂后14～20 h开始产卵，至次日凌晨产卵结束。产卵时需经常收集受精卵，防止雄鱼吞食。用孔径5 mm塑料筛将受精卵和砾石分离，受精卵放在孵化箱中置于孵化池中孵化。孵化箱边长0.5 m、深0.1 m，用60目纱绢制成，固定在木制框架内，每箱装受精卵1万粒。孵化池用混凝土制成，长5 m、宽3 m、深1 m，水深0.3～0.4 m，上方架设遮阳棚避免阳光直射。孵化用水经沉淀后用80目筛绢过滤，防止泥浆和生物敌害进入。孵化池内流速002～0.05 m/s，溶氧保持在6 mg/L以上。水温20～23 ℃条件下，经70～95 h孵化出苗，孵化7～8日后进入平游期、开始摄食饵料。

    2试验结果

     试验结果见表2，5个试验组均成功产卵，对照组仅有零星产卵未做统计。试验组产卵总量33.84万粒，获得受精卵24.09万粒，孵化出苗18.61万尾，平均受精率71.19%，平均孵化率为77.25%，平均每尾雌鱼产卵677粒，平均每尾雌鱼繁殖幼鱼372尾。表2产卵孵化情况表

    组别ⅠⅡⅢⅣⅤ对照组池号123456789101112产卵日期6月26-30日6月24-25日6月23日6月16日6月9日7月12-20日产卵/万粒1.852.012.171.964.013.534.243.696.254.13受精/万粒1.481.411.591.643.323.253.233.422.232.52出苗/万尾1.011.091.351.212.943.032.412.721.291.56受精率/%80.0070.1573.2783.6782.7992.0776.1892.6835.6861.02孵化率/%68.2477.3084.9173.7888.5593.2374.6179.5357.8561.90产卵/粒·尾-13704024343928027068487381250826出苗/尾·尾-1202218270242588606482544258312零星产卵

    未做统计3讨论

    3.1口服催产剂的制备工艺

     与注射法相比，投喂法需要解决激素能被光唇鱼摄食并避免在水体中溶解损失的问题。随着饵料加工和药物制剂工艺的发展，出现了不溶于水的微囊[10]和避免被胃液分解的肠溶微囊[11]，用微囊或肠溶微囊制成的激素制剂损失小、吸收率高，但制备工艺复杂、成本较高，一般养殖场不具备加工条件。光唇鱼没有胃，激素不会被胃液分解失效，只需解决激素在池水中溶解损失和如何被亲鱼主动摄食的问题。本试验用光唇鱼习惯摄食的浮性膨化颗粒饵料作激素载体，表面涂覆油脂防止激素在水中溶解损失，添加VE防止脂肪氧化变质，具有工艺简单、成本低廉、给药方便、繁殖率高的优点，普通养殖场均能使用，可满足光唇鱼规模化人工繁殖的需求。

    3.2光唇鱼口服激素的剂量

     本试验用投喂激素法进行光唇鱼人工繁殖，获得了比注射激素法更好的繁殖效果，证明催产激素可以经光唇鱼消化道吸收进入血液而保持生物活性。因为催产激素通过鱼类消化道吸收会有部分损失，所以口服法需要较高的剂量才能达到较好的催熟催产效果[4]。

     本试验结果表明，随着剂量增加，光唇鱼性成熟日期提前、产卵量增加、产卵耗时减少，当剂量超过注射法3倍以上时，受精率、孵化率和出苗量开始下降。如图1所示，第Ⅲ组出苗量最高，此时剂量为注射法3倍，即催熟剂量为（LHRH-A2）7.5 μg/kg体重·次，催产剂量为（LHRH-A2）45 μg+（HCG）1 500 IU+（DOM）18 mg/kg体重。

     鱼类注射催产激素时，一般雄鱼剂量减半，但口服法则难以做到。本试验在雌雄亲鱼剂量基本一致的情况下取得较好繁殖效果，其机理有待进一步研究。

    图1各组繁殖情况

     参考文献：

    [1] 胡廷尖，王雨辰，陈丰刚，等.泥鳅激素浸泡催产试验的研究[J].中国农学通报，2012（08）：82-86

    [2] 谢嘉华，刘晓春，龙进，等.投喂LHRH-A粗品对雌性金鲫促性腺激素分泌和卵巢发育的作用[J].中山大学学报（自然科学版），2007（01）：91-94

    [3] 李加儿，区又君.用LHRH-A2埋植法诱导池养鲻鱼卵母细胞发育成熟的试验[J].热带海洋学报，2002（01）：83-86

    [4] 林浩然.激素和人工诱导鱼类繁殖[J].生物学通报，1999（08）：1-3

    [5] 王宇希，洪狄俊，毛剑婷，等.光唇鱼雌性个体生殖力的测定[J].水产养殖，2012（07）：13-15

    [6] 郭丽丽，严云志，席贻龙.黄山浦溪河光唇鱼的性腺发育周年变化[J].淡水渔业，2008（06）：8-12

    [7] 颉志刚.一种光唇鱼的人工催产方法[P].中国专利，CN103098737B

    [8] 巫一安，潘坛仁.光唇鱼的驯养与人工繁殖试验[J].水产养殖，2009（11）：10-11

    [9] 张玉明，姜建湖.光唇鱼人工繁殖研究[J].浙江海洋学院学报（自然科学版），2010（03）：211-214

    [10] 丁立云，曹义虎.水产微囊饲料生产工艺研究进展[J].广东饲料，2011（11）：36-38

    [11] 肖东，陈松林，林浩然.肠溶微囊式重组鲤生长激素促生长剂的研制[J].动物学研究，2002（06）：449-455

    Test on feeding hormones to induce spawning of Acrossocheilus fasciatus

    LIN Yanfeng1，YAN Yunzhi2

    （1.Fishery office of Xiuning county， Xiuning Anhui 245400;

    2. College of Life Sciences， Anhui Normal University， Wuhu Anhui 241000）

    Abstract：An oral tablets contained hormone was designed for inducing the egg release of Acrossocheilus fasciatus to overcome some shortages in the current methods used in the culturing of this species， such as complex operation， high mortality of parent fish and low reproductive rate. After LHRH-A2， HCG and DOM were dissolved in saline and absorbed by floating pellets， a layer of vitamin E made from duck oil was coated beyond them. This oral tablet was used to accelerate the ripening and induce the spawning of Acrossocheilus fasciatus by feeding it on these agents. Per female fish averagely spawned 677 eggs and the hatched ones reached 372 of larvae， with the fertilization rate averagely reaching 71.19% and the hatching rate 77.25%. The optimal oral dose of ripening dose for Acrossocheilus fasciatus is 7.5 μg/kg （LHRH-A2） per time and the optimal oral dose of oxytocic agent is 45 μg/kg （LHRH-A2）+1 500 IU/kg （HCG）+18 mg/kg （DOM）.

    Key words：Acrossocheilus fasciatus; Artificial Propagation; Ripening agent; Oxytocin; Oral agents

    （收稿日期：2015-09-25）