虾夷扇贝组织结构分析

    庞宝成+王宪岱+梁久征

    

    

    

    摘要：把虾夷扇贝作为实验材料，掌握虾夷扇贝血涂片的制作方法，并运用HE染色组织切片的方法对虾夷扇贝的组织结构进行观察以及分析。用5 mL注射器吸取2 mL肝素钠，抽取1 mL左右虾夷扇贝心脏血液，从载玻片一端滴一滴血液，左手水平拿着玻片，右手用另一个载玻片水平轻推血液，使其展平，在阴凉处风干，同样方法制取五个血涂片。留一个做空白对照，取两个血涂片用瑞氏染液染色，其他两个吉姆萨染液染色，放于阴凉处晾干留作观察。取新鲜扇贝组织切成1.0 cm×1.0 cm×0.3 cm的组织块，经过固定、脱水与透明、浸蜡、包埋等过程后把组织块切成4～6μm的石蜡切片。再经过苏木素染色盐酸酒精褪色，后用伊红染液复染等过程后用中性树胶完成封片，待干后进行显微镜的观察以及拍照。最后通过观察与人体以及鱼类相关的组织结构进行分析对比。

    关键词：虾夷扇贝;血涂片;苏木素-伊红染色法;组织结构分析

    虾夷扇贝于1982年引进我国[1]。其原产于日本、俄罗斯千岛群岛等地，主要分布于盐度较高，底质硬，淤沙少且水深不超过40 m的沿岸海区[2]。后引进我国，主要养殖区域集中在辽东半岛、山东长岛等海区，生长速度较慢。虾夷扇贝是近些年来贝类水产品的主要生产品种，其内含有大量蛋白质、EPA、DHA等对人体有益的成分[3]。具有相当高的营养经济价值。并且因为虾夷扇贝漂亮的外形，在我国南方将其称为“圆贝”，其圆满的造型象征着团聚、美满，雌雄半壳贝作为“鸳鸯喜贝”经常被搭配摆上婚宴餐桌，代表着对新人的祝福;同时虾夷半壳贝圆满的造型还是中秋佳节一家人团聚时候必不可少的美味佳肴，代表着团圆美好。

     虾夷扇贝由我国引入后，进行了较为成功的人工育苗和养殖试验。现如今虾夷扇贝在我国的大规模人工养殖和增殖也主要集中于辽宁、山东等北方沿海地区，并且养殖面积已经达到了10万平方公里[4]。在2011年，我国虾夷扇贝产量达到1.3×106 t。辽宁大连的獐子岛，因为其地理位置以及气候环境等因素达到虾夷扇贝成长所必须的要求，近年已经发展成为国内最大的虾夷扇贝底播养殖基地，现已发展成为2 000多平方公里的海洋牧场。大连海洋岛虾夷扇贝生产基地也是因其含有虾夷扇贝生长必须的营养盐，并且海水的理化因子稳定，周年稳定的水温，以及良好的水源环境和合适的盐度发展成为了最为适宜虾夷扇贝生长的理想之地。当地成熟虾夷扇贝个体大、贝柱肥、肉质细、颗粒饱满从而使海洋岛虾夷扇贝享誉国内外[5]。但是近年来随着虾夷扇贝养殖规模的不断变大、扇贝品种、环境、病害的问题，并且伴因为连续多代的人工繁殖，虾夷扇贝的群体内出现了近亲杂交现象，因此虾夷扇贝的养殖环境以及生长条件发生了剧变，导致近年的虾夷扇贝各种问题，所以对虾夷扇贝的观察与组织结构分析就显得尤为重要[6]。

     本次实验利用血涂片的制作以及常规的组织切片、苏木素-伊红染色（HE染色）的方法，更加细致直观的对虾夷扇贝的组织器官细胞进行观察以及分析，并且通过和鱼类、哺乳动物同类别的组织细胞进行对比，了解其组织器官的特性，加深对虾夷扇贝的了解。掌握这种方法也可以运用此种方法对其他动物组织进行试验，更加精确的反应一个生物的组织结构。

    1实验材料及方法

    1.1实验材料

    1.1.1实验器材5 mL注射器、1 mL注射器、1 000 mL试剂瓶、500 mL试剂瓶、纱布、镊子、剪刀、电炉、洗衣粉、250 mL试剂瓶、染色缸、染色架、切片机、恒温水浴锅、载玻片、盖玻片、烘箱。

    1.1.2实验药品瑞氏染色试剂盒、苦味酸、碘酸钠、明矾、95%乙醇、石蜡、氨水、柠檬酸、甘油、冰醋酸、盐酸羟胺、苏木素、伊红、钾明矾、中性树胶、二甲苯、100%乙醇、盐酸。

    1.1.3实验对象虾夷扇贝（市场购得）。

    1.2实验方法

    1.2.1药品配制

     波恩氏液：苦味酸饱和水溶液75 mL、冰醋酸5 mL以及甲醛溶液25 mL，三者充分互溶，此液体必须现用现配，用作组织固定液。

     苏木素液[7]：用1 000 mL蒸馏水将0.2 g碘酸钠加温到100 ℃溶解后加入1g苏木素，使其呈现深樱桃红色，再加50 g明矾，使溶液变为蓝紫色，再继续加热煮沸，大约5 min过后加入50 g水合氯醛，并且搅拌，使液体变为紫红色，溶解完成后加入1g的柠檬酸，冷却过滤后备用。该液体可以长时间的保存，若陈液水分蒸发，可以加入适量的2%钾矾液稀释即可。

     伊红：为了使实验效果更好本次配制的伊红染液为醇溶性伊红，取伊红2.5 g加入蒸馏水（少许）慢慢搅动，再加入95%的酒精500 mL，在加入酒精的过程中要不停的搅拌，直到彻底溶解。此时的试剂有些浑浊，可取少量的冰醋酸加入到试剂中，试剂会逐渐变得澄澈，并且试剂颜色变为鲜红色。

    1.2.2外部形态观察从实验所用的虾夷扇贝中选取个体较大，结构较为清晰，没有明显伤痕的扇贝，进行初步的外形观察：虾夷扇贝的外形呈标准的扇形，像一把打开的扇子，外形十分漂亮。观察可见其壳顶位于中央、等侧，并且壳顶两侧的壳耳大小相等，十分对称。并且右壳的前耳有足丝孔。对贝壳的表面进行观察可见贝壳的表面有15～20条放射肋，右壳的肋比较宽大短小，肋之间较为狭窄;左壳肋较细，肋间较宽有的有网目雕刻。右壳较左壳相对大些，并且呈现出黄白色，比较突出。而左壳相对平整，一般呈现紫褐色。壳内面为浅白色，位于壳顶下方的内韧带呈倒三角，虾夷扇贝为单柱类，其闭壳肌大，在壳的中后部[8]。

    1.2.3血涂片制作选用5 mL的注射器抽取肝素钠2 mL，再从虾夷扇贝的心脏中抽取1 mL左右血液，从载玻片的一端滴一滴扇贝血液，左手拿玻片保持玻片水平，右手用另一个载玻片水平的轻轻将血液展平，置于阴凉处晾干，用相同方法制作五个血涂片。取其中两个用瑞氏染液染色，再取两个用吉姆萨染液染色，放于阴凉处晾干，清洗，留做后续观察。