牛病毒性呼吸道疾病诊断技术

    孔祥明

    摘要：对牛的病毒性呼吸道疾病的病原学诊断方法进行了介绍。

    关键词：牛病毒性呼吸道疾病；病原学诊断；防治

    中图分类号：S858.23 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2014）11-0048-01

    牛呼吸道疾病（BRD）对全球养牛业造成严重危害。导致该病的病因相对较为复杂，病毒成为其中主要病原之一。已分离到的病毒主要有牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）、牛副流感病毒（BPIV-3）、牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）等。另外也与环境因素有关，例如，温度、湿度、饲料、粉尘、营养缺失等原因都能引起BRD疾病。

    1 病原学诊断方法

    1.1 病毒分离鉴定

    针对上述已经检测到的病毒，都可以依附牛肾细胞进行培养和生长。现场检查时，样本可以采集病牛的鼻腔分泌液即可。剖检则采集气管黏膜或发生病变的的肺部组织，也可将血液或者脾脏器官用做样本采集使用。BVDV具有两种病变类型：致细胞病变型（CP）和非致细胞病变型（nCP）。其中CP-BVDV让感染细胞变圆，使胞浆发生空泡现象，形成细胞单层拉网，最后引起细胞死亡。实际上，临床中主要以nCP-BVDV为主要分离类型，所以，应该结合免疫荧光或者RT-PCR对分离毒株培养物鉴定。IBRV能够使细胞圆缩，然后形成葡萄样群落，并在单层细胞上出现空洞，偶尔会发现合胞体。若要鉴定IBRV是否为致细胞病变的病毒，须将细胞培养的上清液放置特定的抗血清或单克隆抗体进行中和试验。一旦细胞确是被IBRV所感染，那么一定会出现核内包涵体。

    BPIV-3会造成牛肾细胞出现拉网状，并且最终会使细胞发生脱落。对于那些不易产生病变的毒株细胞，可以通过应用红细胞吸附试验验证病毒是否存在，其中一些毒株必须经过较长时间的体外停留才能显现出具体现象。BRSV是一种可以充分生存在呼吸系统的细胞培养物上面，特别是牛鼻甲细胞最适合对病毒进行分离和培养，具体病变情况是可见细胞融合现象，处于晚期的细胞多呈现出圆缩、肿胀和聚集的情况，并且容易出现多个合胞体，最后细胞死亡并脱落。对于发生病变的细胞可以使用HE染色，通过镜检能够看到核内包涵体。但是，受到病毒滴度不够稳定的影响，很容易在运输过程中无法有效生存，使其敏感度降低，因此，运输过程必须严格且迅速，才能保证细胞尽早接种，从而取得较好的结果。

    1.2 病毒核酸检测

    病毒核酸检测方法具有较高的敏感性和特异性，并且能够对受到感染的或是不完整的病毒的基因组进行有效检测。有些专家依据BVDV5′UTR基因序列，合成了特异性引物，形成了能够对BVDV进行检测的RT-PCR方法。这种方法能够从BVDV Oregon C24V中扩增出特异性片段，而从猪瘟病毒（CSFV）、IBRV、BRSV、BPIV-3中的扩增结果为阴性。

    2 呼吸道疾病综合防治

    （1）对牛群引进做好管理措施。坚决不从疫区引进牛，也不能从正在发病的牛群区域引进牛。对于引进牛应进行检疫检测，并与本区牛群之间进行一段时间的隔离观察，确保无病再与健康牛群混群。

    （2）加强饲养管理。对不同年龄和不同来源的牛进行分类喂养饲料。适当对牛加强营养补充，如富含维生素、矿物质元素等的饲料，保证全价营养。

    （3）注重疾病防控。对牛舍做好通风、清洁以及消毒，对于病牛早发现、早隔离、早治疗。同时应注意避免牛舍环境过度拥挤。

    3 小结

    本文结合了病原学诊断方法，分别从病毒分离鉴定和病毒核酸检测两个方面进行论述，并在最后提出简略的综合防治措施，希望能够为诊断和防治牛的病毒性呼吸道疾病提供参考。