湖北某地区猪繁殖与呼吸综合征血清学调查

    梅小伟　余瑞瑶　王芹　欧阳艳

    摘要：为了解湖北某地区猪场内猪繁殖与呼吸综合征的血清抗体状况，应用ELISA试剂盒对2014年3月至2014年9月来自10个规模场、2个屠宰场、24个散户的猪血清样品进行了检测。共检测血清732份，检出阳性血清501份，合格率68.44%。数据显示规模场的猪繁殖与呼吸综合征抗体合格率明显高于散养户，应采取多种措施以提高散养户的抗体合格率。

    关键词：猪繁殖与呼吸综合征；血清学调查；ELISA

    中图分类号：S858.28 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2014）10-0010-02

    猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是近年发现的一种新的病毒性传染病，由动脉炎病毒科的猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起，临床上以母猪发热、厌食、早产、流产、死胎、弱仔等繁殖障碍及各种年龄猪的呼吸系统疾病和高死亡率为特征[1]。国内许多省市已有该病的发生和流行，且流行的范围越来越广，病情越来越严重，成为规模化养猪场繁殖障碍的主要疫病之一，给我国养猪业的发展造成了巨大损失[2]。通过应用ELISA方法对2014年3月至2014年9月期间来自湖北省某地区猪场送检的猪血清进行了PRRS抗体检测和分析。

    1 材料与方法

    1.1 被检血清

    2014年3月至2014年9月由湖北省某地区送检的732份血样，其中502份来自10个规模猪场，34份来自2个屠宰场，196份来自24个散养户，被检血样按母猪、育肥猪、保育猪、仔猪分类，母猪群不分经产初产，血样经离心后分离血清，进行PRRS抗体检测。

    1.2 检测试剂 猪繁殖与呼吸综合征ELISA检测试剂盒为美国IDEXX公司产品，购自北京爱德士元亨生物科技有限公司。

    1.3 操作方法

    （1）取出抗原包被板，在记录表上记录样本的位置。

    （2）在包被孔内加入100 μL没有稀释的阴性对照，每次检测加两孔。

    （3）在包被孔内加入100 μL没有稀释的阳性对照，每次检测加两孔。

    （4）在相应的孔中加入100 μL已稀释好的样本。

    （5）18～25 ℃孵育：（30）min。

    （6）吸取各孔的液体弃入废液筒。

    （7）用大约300 μL洗涤液洗涤板孔，共洗涤3～5次。每次洗涤后应吸去孔内的液体（注意：应避免包被孔干燥。在最后一次洗涤液吸去后，将每块板中残留的洗涤液扣拍到吸水材料上）。

    （8）每孔加入100 μL辣根过氧化物酶标记的抗猪IgG 抗体。

    （9）18～25 ℃孵育30min。

    （10）重复步骤（6）和（7）。

    （11）每孔加入100 μLTMB底物液。

    （12）18～25 ℃孵育15min。

    （13）每孔加入100 μL 终止液，终止反应。

    （14测量并且记录样本和对照的吸光度OD650nm。

    （15）计算结果。

    1.4 结果判定

    检测结果判定：阳性对照的OD650nm减去阴性对照的OD650nm必须大于或等于0.150；此外，阴性对照的平均值（NCx）必须小于或等于0.150，判定为有效，否则判结果无效。PRRS抗体的检测结果根据样品与阳性对照的比值S/P计算：S/P=（样品PRRS孔OD值-样品NHC孔OD值）/（阳性对照PRRS孔OD值-阳性对照NHC孔OD值），当S/P≥0.4时被检样品判为阳性，当S/P<0.4时被检样品判为阴性。

    2 结果与分析

    2.1 规模化猪场抗体检测结果

    对湖北省某地区送检的规模化猪场血清进行PRRS抗体检测。检测结果（表1）表明，规模猪场送检502份血清，阳性血清可达408份，合格率81.27%，其中有7个规模猪场的合格率达85%以上。

    2.2 屠宰场抗体检测结果

    对送检的屠宰场血清进行PRRS抗体检测。检测结果表明，屠宰场送检34份血清，阳性血清只有8份，合格率仅为23.53%。

    2.3 散养户猪场抗体检测结果

    对来自24个散养户196份血清进行PRRS抗体检测，阳性血清有85份，合格率为43.37%。

    2.4 不同日龄猪PRRS抗体检测结果

    将732份血清按不同年龄分群，不同年龄段的猪血清中PRRS抗体合格率差异较大，母猪、育肥猪、保育猪、仔猪的血清抗体合格率分别为96.55%、61.78%、89.58%、85.42%（表2）。

    2.5 某种畜场猪PRRS抗体跟踪检测结果

    从2014年5月到9月，对来自某种畜场140份血清进行检测，其中来自母猪的血清有44份，保育猪的有48份，仔猪的有48份，合格率分别为100%，79.17%，85.42%（表3）。

    3 小结与讨论

    本试验采用的进口ELISA试剂盒，具有灵敏性高、特异性强、稳定性良好等特点，使检测结果更加可靠准确，真实地反映出PRRS抗体水平的高低。

    通过对来自10个规模场，2个屠宰场，24个散户的732份血清进行了检测，PRRS抗体合格率为68.44%，稍低于国家规定的70%以上的要求。但规模养殖户的合格率远高于散养户，达81.27%，大部分规模户抗体合格率达85%以上，而散养户抗体合格率仅为43.37%，这可能与规模户的重视程度高，免疫规范，合理养殖有关。屠宰场34份血清抗体合格率只有23.53%，这可能首免120 d后，抗体水平处于下降期有关，与田召芳等[3]报道的结果相一致。

    对不同年龄段的732份血清进行PRRS抗体检测，母猪的抗体合格率最高，其次是仔猪和保育猪，而育肥猪的抗体水平最低。通过对某猪场的跟踪检测也得出同样结果，且该猪场抗体水平高，抗体滴度均匀度小。特别是母猪，5个月的检测，其抗体合格率始终保持在高水平，与周平等[4]报道的结果相符。

    血清抗体的监测是目前对免疫质量进行评价或对疫情进行预警预报和风险评估的常用方法，定期对猪场猪繁殖与呼吸综合征进行抗体监测，对于了解猪场PRRS抗体水平变化和进行免疫效果评估，制定科学合理的免疫程序，指导生猪养殖，特别是对指导散养户养殖，都是十分有利的。

    参考文献：

    [1] 方六荣.猪繁殖与呼吸综合征“自杀性”DNA疫苗与活病毒载体疫苗研究[D].武汉：华中农业大学，2003.

    [2] 范京惠，刘 媛，左玉柱.河北省猪繁殖与呼吸综合征血清学调查[J].畜牧与兽医，2011，43（3）： 69-70.

    [3] 田召芳，柳 林，李春蕾，等.烟台地区高致病性猪蓝耳病抗体水平及疫苗免疫效果调查[J].中国畜牧杂志，2010，46（6）： 68-70.

    [4] 周 平，张华全，罗才庆，等. 2011 年龙岩地区部分猪场猪病血清学调查情况[J].养猪，2012 （3）： 116-118.

    摘要：为了解湖北某地区猪场内猪繁殖与呼吸综合征的血清抗体状况，应用ELISA试剂盒对2014年3月至2014年9月来自10个规模场、2个屠宰场、24个散户的猪血清样品进行了检测。共检测血清732份，检出阳性血清501份，合格率68.44%。数据显示规模场的猪繁殖与呼吸综合征抗体合格率明显高于散养户，应采取多种措施以提高散养户的抗体合格率。

    关键词：猪繁殖与呼吸综合征；血清学调查；ELISA

    中图分类号：S858.28 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2014）10-0010-02

    猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是近年发现的一种新的病毒性传染病，由动脉炎病毒科的猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起，临床上以母猪发热、厌食、早产、流产、死胎、弱仔等繁殖障碍及各种年龄猪的呼吸系统疾病和高死亡率为特征[1]。国内许多省市已有该病的发生和流行，且流行的范围越来越广，病情越来越严重，成为规模化养猪场繁殖障碍的主要疫病之一，给我国养猪业的发展造成了巨大损失[2]。通过应用ELISA方法对2014年3月至2014年9月期间来自湖北省某地区猪场送检的猪血清进行了PRRS抗体检测和分析。

    1 材料与方法

    1.1 被检血清

    2014年3月至2014年9月由湖北省某地区送检的732份血样，其中502份来自10个规模猪场，34份来自2个屠宰场，196份来自24个散养户，被检血样按母猪、育肥猪、保育猪、仔猪分类，母猪群不分经产初产，血样经离心后分离血清，进行PRRS抗体检测。

    1.2 检测试剂 猪繁殖与呼吸综合征ELISA检测试剂盒为美国IDEXX公司产品，购自北京爱德士元亨生物科技有限公司。

    1.3 操作方法

    （1）取出抗原包被板，在记录表上记录样本的位置。

    （2）在包被孔内加入100 μL没有稀释的阴性对照，每次检测加两孔。

    （3）在包被孔内加入100 μL没有稀释的阳性对照，每次检测加两孔。

    （4）在相应的孔中加入100 μL已稀释好的样本。

    （5）18～25 ℃孵育：（30）min。

    （6）吸取各孔的液体弃入废液筒。

    （7）用大约300 μL洗涤液洗涤板孔，共洗涤3～5次。每次洗涤后应吸去孔内的液体（注意：应避免包被孔干燥。在最后一次洗涤液吸去后，将每块板中残留的洗涤液扣拍到吸水材料上）。

    （8）每孔加入100 μL辣根过氧化物酶标记的抗猪IgG 抗体。

    （9）18～25 ℃孵育30min。

    （10）重复步骤（6）和（7）。

    （11）每孔加入100 μLTMB底物液。

    （12）18～25 ℃孵育15min。

    （13）每孔加入100 μL 终止液，终止反应。

    （14测量并且记录样本和对照的吸光度OD650nm。

    （15）计算结果。

    1.4 结果判定

    检测结果判定：阳性对照的OD650nm减去阴性对照的OD650nm必须大于或等于0.150；此外，阴性对照的平均值（NCx）必须小于或等于0.150，判定为有效，否则判结果无效。PRRS抗体的检测结果根据样品与阳性对照的比值S/P计算：S/P=（样品PRRS孔OD值-样品NHC孔OD值）/（阳性对照PRRS孔OD值-阳性对照NHC孔OD值），当S/P≥0.4时被检样品判为阳性，当S/P<0.4时被检样品判为阴性。

    2 结果与分析

    2.1 规模化猪场抗体检测结果

    对湖北省某地区送检的规模化猪场血清进行PRRS抗体检测。检测结果（表1）表明，规模猪场送检502份血清，阳性血清可达408份，合格率81.27%，其中有7个规模猪场的合格率达85%以上。

    2.2 屠宰场抗体检测结果

    对送检的屠宰场血清进行PRRS抗体检测。检测结果表明，屠宰场送检34份血清，阳性血清只有8份，合格率仅为23.53%。

    2.3 散养户猪场抗体检测结果

    对来自24个散养户196份血清进行PRRS抗体检测，阳性血清有85份，合格率为43.37%。

    2.4 不同日龄猪PRRS抗体检测结果

    将732份血清按不同年龄分群，不同年龄段的猪血清中PRRS抗体合格率差异较大，母猪、育肥猪、保育猪、仔猪的血清抗体合格率分别为96.55%、61.78%、89.58%、85.42%（表2）。

    2.5 某种畜场猪PRRS抗体跟踪检测结果

    从2014年5月到9月，对来自某种畜场140份血清进行检测，其中来自母猪的血清有44份，保育猪的有48份，仔猪的有48份，合格率分别为100%，79.17%，85.42%（表3）。

    3 小结与讨论

    本试验采用的进口ELISA试剂盒，具有灵敏性高、特异性强、稳定性良好等特点，使检测结果更加可靠准确，真实地反映出PRRS抗体水平的高低。

    通过对来自10个规模场，2个屠宰场，24个散户的732份血清进行了检测，PRRS抗体合格率为68.44%，稍低于国家规定的70%以上的要求。但规模养殖户的合格率远高于散养户，达81.27%，大部分规模户抗体合格率达85%以上，而散养户抗体合格率仅为43.37%，这可能与规模户的重视程度高，免疫规范，合理养殖有关。屠宰场34份血清抗体合格率只有23.53%，这可能首免120 d后，抗体水平处于下降期有关，与田召芳等[3]报道的结果相一致。

    对不同年龄段的732份血清进行PRRS抗体检测，母猪的抗体合格率最高，其次是仔猪和保育猪，而育肥猪的抗体水平最低。通过对某猪场的跟踪检测也得出同样结果，且该猪场抗体水平高，抗体滴度均匀度小。特别是母猪，5个月的检测，其抗体合格率始终保持在高水平，与周平等[4]报道的结果相符。

    血清抗体的监测是目前对免疫质量进行评价或对疫情进行预警预报和风险评估的常用方法，定期对猪场猪繁殖与呼吸综合征进行抗体监测，对于了解猪场PRRS抗体水平变化和进行免疫效果评估，制定科学合理的免疫程序，指导生猪养殖，特别是对指导散养户养殖，都是十分有利的。

    参考文献：

    [1] 方六荣.猪繁殖与呼吸综合征“自杀性”DNA疫苗与活病毒载体疫苗研究[D].武汉：华中农业大学，2003.

    [2] 范京惠，刘 媛，左玉柱.河北省猪繁殖与呼吸综合征血清学调查[J].畜牧与兽医，2011，43（3）： 69-70.

    [3] 田召芳，柳 林，李春蕾，等.烟台地区高致病性猪蓝耳病抗体水平及疫苗免疫效果调查[J].中国畜牧杂志，2010，46（6）： 68-70.

    [4] 周 平，张华全，罗才庆，等. 2011 年龙岩地区部分猪场猪病血清学调查情况[J].养猪，2012 （3）： 116-118.

    摘要：为了解湖北某地区猪场内猪繁殖与呼吸综合征的血清抗体状况，应用ELISA试剂盒对2014年3月至2014年9月来自10个规模场、2个屠宰场、24个散户的猪血清样品进行了检测。共检测血清732份，检出阳性血清501份，合格率68.44%。数据显示规模场的猪繁殖与呼吸综合征抗体合格率明显高于散养户，应采取多种措施以提高散养户的抗体合格率。

    关键词：猪繁殖与呼吸综合征；血清学调查；ELISA

    中图分类号：S858.28 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2014）10-0010-02

    猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是近年发现的一种新的病毒性传染病，由动脉炎病毒科的猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起，临床上以母猪发热、厌食、早产、流产、死胎、弱仔等繁殖障碍及各种年龄猪的呼吸系统疾病和高死亡率为特征[1]。国内许多省市已有该病的发生和流行，且流行的范围越来越广，病情越来越严重，成为规模化养猪场繁殖障碍的主要疫病之一，给我国养猪业的发展造成了巨大损失[2]。通过应用ELISA方法对2014年3月至2014年9月期间来自湖北省某地区猪场送检的猪血清进行了PRRS抗体检测和分析。

    1 材料与方法

    1.1 被检血清

    2014年3月至2014年9月由湖北省某地区送检的732份血样，其中502份来自10个规模猪场，34份来自2个屠宰场，196份来自24个散养户，被检血样按母猪、育肥猪、保育猪、仔猪分类，母猪群不分经产初产，血样经离心后分离血清，进行PRRS抗体检测。

    1.2 检测试剂 猪繁殖与呼吸综合征ELISA检测试剂盒为美国IDEXX公司产品，购自北京爱德士元亨生物科技有限公司。

    1.3 操作方法

    （1）取出抗原包被板，在记录表上记录样本的位置。

    （2）在包被孔内加入100 μL没有稀释的阴性对照，每次检测加两孔。

    （3）在包被孔内加入100 μL没有稀释的阳性对照，每次检测加两孔。

    （4）在相应的孔中加入100 μL已稀释好的样本。

    （5）18～25 ℃孵育：（30）min。

    （6）吸取各孔的液体弃入废液筒。

    （7）用大约300 μL洗涤液洗涤板孔，共洗涤3～5次。每次洗涤后应吸去孔内的液体（注意：应避免包被孔干燥。在最后一次洗涤液吸去后，将每块板中残留的洗涤液扣拍到吸水材料上）。

    （8）每孔加入100 μL辣根过氧化物酶标记的抗猪IgG 抗体。

    （9）18～25 ℃孵育30min。

    （10）重复步骤（6）和（7）。

    （11）每孔加入100 μLTMB底物液。

    （12）18～25 ℃孵育15min。

    （13）每孔加入100 μL 终止液，终止反应。

    （14测量并且记录样本和对照的吸光度OD650nm。

    （15）计算结果。

    1.4 结果判定

    检测结果判定：阳性对照的OD650nm减去阴性对照的OD650nm必须大于或等于0.150；此外，阴性对照的平均值（NCx）必须小于或等于0.150，判定为有效，否则判结果无效。PRRS抗体的检测结果根据样品与阳性对照的比值S/P计算：S/P=（样品PRRS孔OD值-样品NHC孔OD值）/（阳性对照PRRS孔OD值-阳性对照NHC孔OD值），当S/P≥0.4时被检样品判为阳性，当S/P<0.4时被检样品判为阴性。

    2 结果与分析

    2.1 规模化猪场抗体检测结果

    对湖北省某地区送检的规模化猪场血清进行PRRS抗体检测。检测结果（表1）表明，规模猪场送检502份血清，阳性血清可达408份，合格率81.27%，其中有7个规模猪场的合格率达85%以上。

    2.2 屠宰场抗体检测结果

    对送检的屠宰场血清进行PRRS抗体检测。检测结果表明，屠宰场送检34份血清，阳性血清只有8份，合格率仅为23.53%。

    2.3 散养户猪场抗体检测结果

    对来自24个散养户196份血清进行PRRS抗体检测，阳性血清有85份，合格率为43.37%。

    2.4 不同日龄猪PRRS抗体检测结果

    将732份血清按不同年龄分群，不同年龄段的猪血清中PRRS抗体合格率差异较大，母猪、育肥猪、保育猪、仔猪的血清抗体合格率分别为96.55%、61.78%、89.58%、85.42%（表2）。

    2.5 某种畜场猪PRRS抗体跟踪检测结果

    从2014年5月到9月，对来自某种畜场140份血清进行检测，其中来自母猪的血清有44份，保育猪的有48份，仔猪的有48份，合格率分别为100%，79.17%，85.42%（表3）。

    3 小结与讨论

    本试验采用的进口ELISA试剂盒，具有灵敏性高、特异性强、稳定性良好等特点，使检测结果更加可靠准确，真实地反映出PRRS抗体水平的高低。

    通过对来自10个规模场，2个屠宰场，24个散户的732份血清进行了检测，PRRS抗体合格率为68.44%，稍低于国家规定的70%以上的要求。但规模养殖户的合格率远高于散养户，达81.27%，大部分规模户抗体合格率达85%以上，而散养户抗体合格率仅为43.37%，这可能与规模户的重视程度高，免疫规范，合理养殖有关。屠宰场34份血清抗体合格率只有23.53%，这可能首免120 d后，抗体水平处于下降期有关，与田召芳等[3]报道的结果相一致。

    对不同年龄段的732份血清进行PRRS抗体检测，母猪的抗体合格率最高，其次是仔猪和保育猪，而育肥猪的抗体水平最低。通过对某猪场的跟踪检测也得出同样结果，且该猪场抗体水平高，抗体滴度均匀度小。特别是母猪，5个月的检测，其抗体合格率始终保持在高水平，与周平等[4]报道的结果相符。

    血清抗体的监测是目前对免疫质量进行评价或对疫情进行预警预报和风险评估的常用方法，定期对猪场猪繁殖与呼吸综合征进行抗体监测，对于了解猪场PRRS抗体水平变化和进行免疫效果评估，制定科学合理的免疫程序，指导生猪养殖，特别是对指导散养户养殖，都是十分有利的。

    参考文献：

    [1] 方六荣.猪繁殖与呼吸综合征“自杀性”DNA疫苗与活病毒载体疫苗研究[D].武汉：华中农业大学，2003.

    [2] 范京惠，刘 媛，左玉柱.河北省猪繁殖与呼吸综合征血清学调查[J].畜牧与兽医，2011，43（3）： 69-70.

    [3] 田召芳，柳 林，李春蕾，等.烟台地区高致病性猪蓝耳病抗体水平及疫苗免疫效果调查[J].中国畜牧杂志，2010，46（6）： 68-70.

    [4] 周 平，张华全，罗才庆，等. 2011 年龙岩地区部分猪场猪病血清学调查情况[J].养猪，2012 （3）： 116-118.