赭曲霉毒素A模拟抗原表位及噬菌体展示酶联免疫吸附分析法的建立
王吕 熊斯诚 邹旭强 陈超超 邵辉锋 陈雪岚
摘 要 以驴抗鼠二抗包被微孔板，以捕获方式包被抗赭曲霉毒素A（OTA）单克隆抗体，利用噬菌体随机七肽库筛选OTA模拟抗原表位，并以其替代检测抗原，建立了基于噬菌体展示技术的酶联免疫吸附分析（Phage ELISA）检测OTA的方法。结果表明，筛选获得的模拟OTA 抗原表位七肽氨基酸序列为GMSWMMA。基于模拟表位噬菌体建立的Phage ELISA方法半数抑制浓度（IC50值）为（0.15 ± 0.02） ng/mL，检测OTA的线性范围为0.03～0.50 ng/mL，OTA的检出限为0.03 ng/mL，且Phage ELISA与其它4种常见真菌毒素（黄曲霉毒素B1、伏马毒素B1、脱氧雪腐镰刀菌烯醇及玉米赤霉烯酮）无交叉反应。大米样品OTA加标实验表明，批內加标回收率为97.0%～115.2%，批间加标回收率为107.2%～123.1%，与ELISA试剂盒检测结果比较，无显著性差异。
关键词 赭曲霉毒素A；噬菌体展示肽库；模拟表位；酶联免疫吸附法
摘 要 以驴抗鼠二抗包被微孔板，以捕获方式包被抗赭曲霉毒素A（OTA）单克隆抗体，利用噬菌体随机七肽库筛选OTA模拟抗原表位，并以其替代检测抗原，建立了基于噬菌体展示技术的酶联免疫吸附分析（Phage ELISA）检测OTA的方法。结果表明，筛选获得的模拟OTA 抗原表位七肽氨基酸序列为GMSWMMA。基于模拟表位噬菌体建立的Phage ELISA方法半数抑制浓度（IC50值）为（0.15 ± 0.02） ng/mL，检测OTA的线性范围为0.03～0.50 ng/mL，OTA的检出限为0.03 ng/mL，且Phage ELISA与其它4种常见真菌毒素（黄曲霉毒素B1、伏马毒素B1、脱氧雪腐镰刀菌烯醇及玉米赤霉烯酮）无交叉反应。大米样品OTA加标实验表明，批內加标回收率为97.0%～115.2%，批间加标回收率为107.2%～123.1%，与ELISA试剂盒检测结果比较，无显著性差异。
关键词 赭曲霉毒素A；噬菌体展示肽库；模拟表位；酶联免疫吸附法
