直接进样—效液相色谱—联质谱法测定地表水中9种微囊藻毒素
赵起越等
关键词 直接进样； 高效液相色谱串联质谱； 微囊藻毒素； 地表水
1 引 言
水体的富营养化导致藻类异常生长，发生水华。其中，蓝藻释放的微囊藻毒素（Microcystins，MCs）具有肝脏毒性和神经毒性[1]，不仅危害水生动植物健康，还对饮用水安全构成威胁[2，3]。水中微囊藻毒素含量低，干扰多，分析难度大。其分析方法主要包括生物法、化学仪器法及生化法等[4]。化学仪器法中液相色谱紫外检测器联用（HPLCUV）方法为世界卫生组织（World health organization， WHO）推荐的官方分析方法，同时也是我国的标准分析方法[5，6]，该方法需要固相萃取，富集浓缩，分析时间长，灵敏度低，有时还会产生假阳性结果。液相色谱质谱联用技术灵敏度高、选择性好，不仅对水中MCs的定性检测更加精确，还可以简化样品的前处理步骤，使用水样直接进样，从而提高定量分析的准确性。目前，我国水样直接进样的研究非常活跃，分析的微囊藻毒素种类最多可达7种[7～9]。本研究在此基础上，对水样直接进样技术进行了更加深入的研究，建立了直接进样液相色谱串联质谱（HPLCMS/MS）同时分析水中9种MCs的方法。考察了不同种类滤膜的过滤效率，并选择不同基体，对方法的准确度、精密度及灵敏度进行了实验验证，还应用地表水样品对方法的实用性进行了检验，结果令人满意。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
Waters Alliance 2695高效液相色谱仪，Quattro Premier XE 三重四极杆质谱仪， GHP过滤膜（Waters公司）。其它滤膜由天津市津腾实验设备有限公司提供。
甲醇和乙腈（色谱纯，美国J T Baker公司），甲酸（Waters公司），实验用水为某名牌纯净水（市售）。
微囊藻毒素标准品MCRR， MCLR， MCHtyR， MCYR， MC WR， MCLA， MCLF， MCLY和MCLW均购自奥富森公司。
2.2 标准溶液配制和样品试剂处理
2.2.1 标准溶液的配制 取9种MCs固体，配成浓度为10 μg/L的甲醇储备液，再以纯净水逐级稀释成0.1， 0.2， 0.4， 1.0， 2.0， 10， 20和50 μg/L的混合标准溶液。
2.2.2 样品前处理 地表水样品经过滤膜过滤后直接进行仪器分析。
4 结 论
建立了水中9种MCs的直接进样液相色谱串联质谱分析方法。本方法减化了前处理步骤，9种MCs的加标回收率大于90%，RSD小于7%，检出限能够满足WHO及我国控制标准要求，适于水中痕量MCs的常规检测。采用本方法分析了北京6处地表水样品，均有MCs检出，但浓度没有超标。
References
1 Gadhi S P， Gong Z Y， Bramanvan R B. Environ. Toxicol. Chem.， 2013， 32（7）： 1574-1581
2 KyoungHee O， DongHwan J， YoungCheol C. J. Microbiol.， 2013， 51（1）： 18-24
3 Nonga H E， Sandvik M， Miles C O， Lie E， Mdegela R H， Mwamengele G L， Semuguruka W D， Skaare J U. Hydrobiologia， 2011， 678： 167-178
4 Srivastava A， Singh S， Ahn C Y， Oh H M， Asthana R K. Environ. Sci. Technol.， 2013， 47： 8999-9013
5 GB/T 204662006， Determination of Microcystins in Water， The National Standard of the People′s Republic of China
水中微囊藻毒素的测定.中华人民共和国国家标准.GB/T 204662006
6 WHO， Cyanobacterialtoxins： MicrocystinLR. WHO Guidelines for Drinking Water Quality. Geneva： World Health Organization， 1998
7 WANG Chao， PENG Tao， L YiBing， TENG EnJiang. Chinese J. Anal. Chem.， 2013， 41（12）： 1844-1851
王 超， 彭 涛， 吕怡兵， 滕恩江. 分析化学， 2013， 41（12）： 1844-1851
8 JIANG Lei， ZHANG Dong. Journal of Water Supply and Drainage， 2013， 39（6）： 37-41
姜 雷， 张 东. 给水排水， 2013， 39（6）： 37-41
9 XIONG Jie， QIAN Shu， XIE YongHong， YANG LiZhong. Environmental Monitoring in China， 2014， 3： 119-124
熊 杰， 钱 蜀， 谢永红， 谢永洪， 杨黎忠. 中国环境监测， 2014， 3： 119-124
10 JIA YunLu， CHEN Wei， ZHAO Shuang， ZHOU Qi Chao， SONG LiRong. Acta Hydrobiologica Sinica， 2014， 38（1）： 87-91
贾云璐， 陈 伟， 赵 爽， 周起超， 宋立荣. 水生生物学报， 2014， 38（1）： 87-91
11 Sandra P， Diana S A. TrAC Trends Anal. Chem.， 2005， 24（7）： 658-670
12 LI Bing， LIU Wei， FAN Sai， ZHAO Rong， WU GuoHua. Chinese Journal of Chromatography， 2012， 30（6）： 584-589
李 兵， 刘 伟， 范 赛， 赵 榕， 吴国华. 色谱， 2012， 30（6）： 584-589
13 ZHOU WeiJie， LI Xue， LIU Ping， SUN XiuLan. Chinese Medical Journal， 2013， 23（9）： 2028-2031
周伟杰， 李 雪， 刘 萍， 孙秀兰. 中国卫生检验杂志， 2013， 23（9）： 2028-2031
14 Kaloudis T， Zervou S K， Tsimeli K， Triantis T M， Fotiou T， Hiskia A. J. Hazardous Mater.， 2013， 263： 105-115
15 Pietsch J， Fichtner S， Imhof L， Schmidt W， Brauch H J. Chromatographia， 2001， 54（56）： 339-344
关键词 直接进样； 高效液相色谱串联质谱； 微囊藻毒素； 地表水
1 引 言
水体的富营养化导致藻类异常生长，发生水华。其中，蓝藻释放的微囊藻毒素（Microcystins，MCs）具有肝脏毒性和神经毒性[1]，不仅危害水生动植物健康，还对饮用水安全构成威胁[2，3]。水中微囊藻毒素含量低，干扰多，分析难度大。其分析方法主要包括生物法、化学仪器法及生化法等[4]。化学仪器法中液相色谱紫外检测器联用（HPLCUV）方法为世界卫生组织（World health organization， WHO）推荐的官方分析方法，同时也是我国的标准分析方法[5，6]，该方法需要固相萃取，富集浓缩，分析时间长，灵敏度低，有时还会产生假阳性结果。液相色谱质谱联用技术灵敏度高、选择性好，不仅对水中MCs的定性检测更加精确，还可以简化样品的前处理步骤，使用水样直接进样，从而提高定量分析的准确性。目前，我国水样直接进样的研究非常活跃，分析的微囊藻毒素种类最多可达7种[7～9]。本研究在此基础上，对水样直接进样技术进行了更加深入的研究，建立了直接进样液相色谱串联质谱（HPLCMS/MS）同时分析水中9种MCs的方法。考察了不同种类滤膜的过滤效率，并选择不同基体，对方法的准确度、精密度及灵敏度进行了实验验证，还应用地表水样品对方法的实用性进行了检验，结果令人满意。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
Waters Alliance 2695高效液相色谱仪，Quattro Premier XE 三重四极杆质谱仪， GHP过滤膜（Waters公司）。其它滤膜由天津市津腾实验设备有限公司提供。
甲醇和乙腈（色谱纯，美国J T Baker公司），甲酸（Waters公司），实验用水为某名牌纯净水（市售）。
微囊藻毒素标准品MCRR， MCLR， MCHtyR， MCYR， MC WR， MCLA， MCLF， MCLY和MCLW均购自奥富森公司。
2.2 标准溶液配制和样品试剂处理
2.2.1 标准溶液的配制 取9种MCs固体，配成浓度为10 μg/L的甲醇储备液，再以纯净水逐级稀释成0.1， 0.2， 0.4， 1.0， 2.0， 10， 20和50 μg/L的混合标准溶液。
2.2.2 样品前处理 地表水样品经过滤膜过滤后直接进行仪器分析。
4 结 论
建立了水中9种MCs的直接进样液相色谱串联质谱分析方法。本方法减化了前处理步骤，9种MCs的加标回收率大于90%，RSD小于7%，检出限能够满足WHO及我国控制标准要求，适于水中痕量MCs的常规检测。采用本方法分析了北京6处地表水样品，均有MCs检出，但浓度没有超标。
References
1 Gadhi S P， Gong Z Y， Bramanvan R B. Environ. Toxicol. Chem.， 2013， 32（7）： 1574-1581
2 KyoungHee O， DongHwan J， YoungCheol C. J. Microbiol.， 2013， 51（1）： 18-24
3 Nonga H E， Sandvik M， Miles C O， Lie E， Mdegela R H， Mwamengele G L， Semuguruka W D， Skaare J U. Hydrobiologia， 2011， 678： 167-178
4 Srivastava A， Singh S， Ahn C Y， Oh H M， Asthana R K. Environ. Sci. Technol.， 2013， 47： 8999-9013
5 GB/T 204662006， Determination of Microcystins in Water， The National Standard of the People′s Republic of China
水中微囊藻毒素的测定.中华人民共和国国家标准.GB/T 204662006
6 WHO， Cyanobacterialtoxins： MicrocystinLR. WHO Guidelines for Drinking Water Quality. Geneva： World Health Organization， 1998
7 WANG Chao， PENG Tao， L YiBing， TENG EnJiang. Chinese J. Anal. Chem.， 2013， 41（12）： 1844-1851
王 超， 彭 涛， 吕怡兵， 滕恩江. 分析化学， 2013， 41（12）： 1844-1851
8 JIANG Lei， ZHANG Dong. Journal of Water Supply and Drainage， 2013， 39（6）： 37-41
姜 雷， 张 东. 给水排水， 2013， 39（6）： 37-41
9 XIONG Jie， QIAN Shu， XIE YongHong， YANG LiZhong. Environmental Monitoring in China， 2014， 3： 119-124
熊 杰， 钱 蜀， 谢永红， 谢永洪， 杨黎忠. 中国环境监测， 2014， 3： 119-124
10 JIA YunLu， CHEN Wei， ZHAO Shuang， ZHOU Qi Chao， SONG LiRong. Acta Hydrobiologica Sinica， 2014， 38（1）： 87-91
贾云璐， 陈 伟， 赵 爽， 周起超， 宋立荣. 水生生物学报， 2014， 38（1）： 87-91
11 Sandra P， Diana S A. TrAC Trends Anal. Chem.， 2005， 24（7）： 658-670
12 LI Bing， LIU Wei， FAN Sai， ZHAO Rong， WU GuoHua. Chinese Journal of Chromatography， 2012， 30（6）： 584-589
李 兵， 刘 伟， 范 赛， 赵 榕， 吴国华. 色谱， 2012， 30（6）： 584-589
13 ZHOU WeiJie， LI Xue， LIU Ping， SUN XiuLan. Chinese Medical Journal， 2013， 23（9）： 2028-2031
周伟杰， 李 雪， 刘 萍， 孙秀兰. 中国卫生检验杂志， 2013， 23（9）： 2028-2031
14 Kaloudis T， Zervou S K， Tsimeli K， Triantis T M， Fotiou T， Hiskia A. J. Hazardous Mater.， 2013， 263： 105-115
15 Pietsch J， Fichtner S， Imhof L， Schmidt W， Brauch H J. Chromatographia， 2001， 54（56）： 339-344
