猪圆环病毒病的临床症状、实验室诊断方法及其防控

    孙学恺

    摘要：猪圆环病毒病是全世界普遍存在的危害养猪业的一种主要疫病，在我国也是影响养猪三大疫病中的一种，近几年该病在我国的发病率呈不断升高的趋势。猪感染圆环病毒后，会严重损害机体免疫系统功能，引起免疫抑制，容易出现免疫失败，发生严重的消化系统、呼吸系统疾病，从而使猪发生繁殖障碍，饲料利用率下降，且病死率升高等，给养猪业带来巨大的经济损失。现概述猪圆环病毒病的防控措施。

    关键词：猪;圆环病毒病;临床症状;剖检变化;实验室诊断;药物治疗;免疫预防

    中图分类号：S858.28?? 文献标识码：B文章编号：2095-9737（2019）11-0114-02

    1 临床症状

    1.1 仔猪断奶后多系统衰竭综合症

    病猪主要是生长发育不良，机体日渐消瘦，贫血、黄疸，呼吸困难，腹股沟淋巴结发生肿大，腹泻。部分病猪出现咳嗽，甚至发生中枢神经异常死亡。还能够继发感染猪瘟、巴氏杆菌病、链球菌病、附红细胞体病等。

    1.2 猪皮炎和肾病综合症

    通常是保育猪和生长育肥猪发生，病猪主要症状是皮肤出现圆形或者形状不规则的隆起，呈红色至紫色深浅不同，但中央呈黑色，一般先是后腿、腹部皮肤出现病变，之后扩散至胸肋和耳部，并逐渐融合形成大的斑块或者条带。病猪症状轻时能够自行康复，但严重时会呈现跛行，体温升高，食欲废绝。

    1.3 繁殖障碍

    妊娠母猪感染后通常会发生流产或者容易产出木乃伊胎、死胎，断奶前病死率升高。

    1.4 呼吸道综合症

    生长育肥猪感染圆环病毒2型（PCV2）后，往往会导致呼吸道感染病原微生物以及混合感染，从而出现呼吸道综合症。

    1.5 肠炎

    猪感染PCV2后，会导致肉芽肿性肠炎，主要症状是腹泻，机体消瘦。

    1.6 中枢神经系统疫病

    猪群感染PCV2后，新生仔猪会出现先天性震颤。

    2 剖检变化

    2.1 淋巴结

    病死猪全身淋巴结都发生程度不同的增生、肿大，且质地变硬，外表有充血、出血或者化脓性病变，切面呈黄白色、白色或者灰白色，其中肺门、颌下、纵隔、腹股沟以及肠系膜淋巴结发生明显病变。

    2.2 主要脏器

    病死猪肝脏颜色发暗，发生肿大、硬化，质地变脆，小叶间出现结缔组织增生;脾脏呈肉样变化，明显肿大;肺脏发生肿胀、气肿、水肿，表现散布有不同数量、不同大小的土褐色实变，间质变宽，质地变硬如橡皮，尖叶、心叶、中间叶、后叶前下部会出现融合性支气管肺炎的病变，呈灰红色或者淡灰色，病变处有明显界限，如同“肉样”，严重时呈“胰样变”;肾脏呈灰白色，发生水肿，有时被膜下存在白色的坏死灶。

    2.3 消化道

    病死猪的胃黏膜发生水肿，并存在非出血性溃疡，肠壁尤其是結肠、回肠变薄，肠道内存在大量清亮的液体，结肠和盲肠黏膜发生充血和出血。

    3 实验室诊断

    3.1 病毒分离及电镜观察

    取病变组织制成10%的悬液，按每毫升添加100 IU青霉素、100 μg链霉素，混合均匀后放入4℃离心机中，以3000 r/min的速度进行20 min离心，取上清液在Dulac细胞中接种。经过6 h用D-葡萄糖胺（300 mmol/L ）在37℃条件下处理30 min，继续培养72～96 h，对增殖病毒的细胞反复进行3次冻融，收集细胞病毒液再次接种细胞进行6次传代。取第6代细胞病毒液反复进行3次冻融，添加5 mg/mL Tritionl14，在37℃下处理30 min，以3000 r/min进行30 min离心，取上清液放入离心管（有30%蔗糖垫）中，以4500 r/min进行3 h离心，倾去上清液，加入0.01 mmol/L pH值为8.0的ET缓冲液进行吹打，收集病毒，使用乙酸双氧铀负染色后置于电镜下观察。

    3.2 间接免疫荧光试验检测

    取第6代细胞病毒液在细胞玻片接种，置于37℃条件下进行24～72 h培养，取出后使用丙酮进行10 min固定;接着在细胞玻片上滴加PCV2抗体，置于37℃下进行温育，经过60 min使用0.15 mol/L PBS溶液进行3次冲洗，自然晾干;然后加入抗猪免疫球蛋白荧光抗体，再置于37℃下进行温育，经过60 min再使用0.15 mol/L PBS溶液进行3次冲洗，自然晾干后放在荧光显微镜下观察。同时，要设置猪PCV2抗体阴性血清对照组以及细胞对照组。

    3.3 间接免疫过氧化物酶技术

    在96孔微量培养板上接种PK-15细胞，长成单层后添加经过10倍稀释的待检猪血清，经过一段时间吸干并进行洗涤，在每孔中添加50 μL HRP标记的兔抗猪IgG（1000倍稀释），置于30℃下进行孵育，经过15 min再次吸干洗涤，然后添加50 μL底物溶液，最后终止反应，使用显微镜观察，如果看到棕色感染细胞即判定为阳性。

    4 防控措施

    4.1 药物治疗

    猪感染后抵抗力下降，肠道系统等功能减弱，可取10 mL黄芪多糖注射液和1瓶3万IU猪白细胞干扰素充分混合后肌肉注射， 3～10日龄每头用量为1 mL，断乳仔猪每头用量为2 mL，育肥猪每头用量为4 mL，每天用药1次，连续注射3天，以提高机体抵抗力。如果病猪伴发高热、腹泻、咳嗽，还要在药液中添加头孢唑林钠、林可霉素以及维生素B12，实际用量按照说明书确定，混合均匀后再进行肌肉注射，每天用药1次，连续注射3天。

    另外，病猪可配合使用中药治疗，取150 g黄芪，茵陈、板蓝根各20 g，连翘、党参、金银花各50 g，25 g甘草，每次添加1000 mL水煎煮1 h，共进行3次煎煮，按体重给病猪服用1 mL/kg药液，每天用药1次，连续服用3～5天。

    4.2 免疫预防

    我国使用的PCV2疫苗都是病毒灭活苗，主要是给健康仔猪、后备母猪以及经产母猪接种。新生仔猪通常选择3～4周龄进行首免，经过3周再加强免疫1次，每头注射1 mL;后备母猪在配种前进行2次基础免疫，注意具有3周的间隔，且产前1个月还要进行1次加强免疫，每头注射2 mL;经产母猪采取跟胎免疫，即产前1个月进行1次接种，每头注射2 mL;其他成年猪采取普免，进行2次基础免疫，具有3周的间隔，之后每6个月进行1次免疫，每头注射2 mL。