贯叶连翘提取物中金丝桃素的含量测定

    王建舫　崔德凤　穆祥

    摘要：本试验旨在建立一种高效液相色谱-紫外检测法（HPLC-UV）测定贯叶连翘提取物中金丝桃素含量的方法。采用YMC-Pack ODS-A色谱柱（5 μm，150 mm×4.6 mm），以乙腈-0.02M磷酸二氢钠（85∶15）为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长588 nm，柱温25 ℃。结果表明，金丝桃素在6～36 μg/mL范围内线性关系良好（r=0.999 6），平均加样回收率为98.86%（n=6），峰面积的相对标准偏差（RSD）为3.15%。此方法专属性强、重复性好，可用于贯叶连翘提取物中金丝桃素的含量测定。

    关键词：贯叶连翘；金丝桃素；高效液相色谱；含量测定

    中图分类号：S853.7文献标志码：A文章编号：1007-273X（2014）05-0013-02

    贯叶连翘（Hypericum performatum L.）为藤黄科金丝桃属多年生草本植物，其味苦、辛，性平，可清心明目、调经活血、止血生肌、解毒消炎[1]。其主要活性成分金丝桃素具有光敏活性和光动力作用，有较好的抗病毒、抗肿瘤功效，同时也是贯叶连翘抗抑郁的主要活性成分之一[2]。本试验采用高效液相色谱法对贯叶连翘提取物中金丝桃素进行了含量测定，建立了一种专一性强、重复性好的测定方法，为贯叶连翘提取物的质量控制提供依据。

    1仪器与试药

    1.1仪器

    Waters Alliance e2695高效液相色谱仪；美国Millipore水纯化系统；针筒式微孔滤膜过滤器（上海兴亚净化材料厂产品，孔径0.22 μm）。

    1.2药品与试剂

    金丝桃素（批号MUST-13121505，购自成都曼思特生物科技有限公司）；贯叶连翘提取物，购自北京经日今典科技有限公司；乙腈（色谱纯，天津市光复精细化工研究所）。

    2方法与结果

    2.1色谱条件

    YMC-Pack ODS-A色谱柱（5 μm，150 mm×4.6 mm）；流动相：乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钠（85∶15）；流速1.0 mL/min；检测波长588 nm；柱温25 ℃。

    2.2溶液的制备

    2.2.1对照品溶液的制备精密称取金丝桃素对照品1.2 mg置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至100 mL，制成浓度为0.12 mg/mL的对照品贮存液。精密吸取金丝桃素标准品贮备液0.25、0.5、0.75、1.00、1.25、1.5 mL，分别放置于5 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，分别得到6、12、18、24、30、36 μg/mL的对照品溶液。

    2.2.2供试品溶液的制备精密称取贯叶连翘提取物62.2 mg，置5 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容。用0.20 μm滤膜过滤，取续滤液，即得提取物供试品溶液。

    2.3专属性试验

    精密吸取浓度为24 μg/mL的金丝桃素对照品溶液和供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪中，由色谱图知，在金丝桃素对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰（图1）。

    2.4线性关系考察

    分别精密吸取浓度为6、12、18、24、30、36 μg/mL的对照品溶液20 μL，自动进样注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以金丝桃素含量（μg/mL）为横坐标，峰面积值为纵坐标，计算回归方程为y=74 196x-11 176，r=0.999 6，结果表明，在6～36 μg/mL范围内，峰面积与金丝桃素浓度呈良好的线性关系（图2）。

    2.5精密度试验

    取浓度为24 μg/mL的对照品溶液，连续进样6次，每次进样20 μL，测定峰面积，结果峰面积的相对标

    摘要：本试验旨在建立一种高效液相色谱-紫外检测法（HPLC-UV）测定贯叶连翘提取物中金丝桃素含量的方法。采用YMC-Pack ODS-A色谱柱（5 μm，150 mm×4.6 mm），以乙腈-0.02M磷酸二氢钠（85∶15）为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长588 nm，柱温25 ℃。结果表明，金丝桃素在6～36 μg/mL范围内线性关系良好（r=0.999 6），平均加样回收率为98.86%（n=6），峰面积的相对标准偏差（RSD）为3.15%。此方法专属性强、重复性好，可用于贯叶连翘提取物中金丝桃素的含量测定。

    关键词：贯叶连翘；金丝桃素；高效液相色谱；含量测定

    中图分类号：S853.7文献标志码：A文章编号：1007-273X（2014）05-0013-02

    贯叶连翘（Hypericum performatum L.）为藤黄科金丝桃属多年生草本植物，其味苦、辛，性平，可清心明目、调经活血、止血生肌、解毒消炎[1]。其主要活性成分金丝桃素具有光敏活性和光动力作用，有较好的抗病毒、抗肿瘤功效，同时也是贯叶连翘抗抑郁的主要活性成分之一[2]。本试验采用高效液相色谱法对贯叶连翘提取物中金丝桃素进行了含量测定，建立了一种专一性强、重复性好的测定方法，为贯叶连翘提取物的质量控制提供依据。

    1仪器与试药

    1.1仪器

    Waters Alliance e2695高效液相色谱仪；美国Millipore水纯化系统；针筒式微孔滤膜过滤器（上海兴亚净化材料厂产品，孔径0.22 μm）。

    1.2药品与试剂

    金丝桃素（批号MUST-13121505，购自成都曼思特生物科技有限公司）；贯叶连翘提取物，购自北京经日今典科技有限公司；乙腈（色谱纯，天津市光复精细化工研究所）。

    2方法与结果

    2.1色谱条件

    YMC-Pack ODS-A色谱柱（5 μm，150 mm×4.6 mm）；流动相：乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钠（85∶15）；流速1.0 mL/min；检测波长588 nm；柱温25 ℃。

    2.2溶液的制备

    2.2.1对照品溶液的制备精密称取金丝桃素对照品1.2 mg置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至100 mL，制成浓度为0.12 mg/mL的对照品贮存液。精密吸取金丝桃素标准品贮备液0.25、0.5、0.75、1.00、1.25、1.5 mL，分别放置于5 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，分别得到6、12、18、24、30、36 μg/mL的对照品溶液。

    2.2.2供试品溶液的制备精密称取贯叶连翘提取物62.2 mg，置5 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容。用0.20 μm滤膜过滤，取续滤液，即得提取物供试品溶液。

    2.3专属性试验

    精密吸取浓度为24 μg/mL的金丝桃素对照品溶液和供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪中，由色谱图知，在金丝桃素对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰（图1）。

    2.4线性关系考察

    分别精密吸取浓度为6、12、18、24、30、36 μg/mL的对照品溶液20 μL，自动进样注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以金丝桃素含量（μg/mL）为横坐标，峰面积值为纵坐标，计算回归方程为y=74 196x-11 176，r=0.999 6，结果表明，在6～36 μg/mL范围内，峰面积与金丝桃素浓度呈良好的线性关系（图2）。

    2.5精密度试验

    取浓度为24 μg/mL的对照品溶液，连续进样6次，每次进样20 μL，测定峰面积，结果峰面积的相对标

    摘要：本试验旨在建立一种高效液相色谱-紫外检测法（HPLC-UV）测定贯叶连翘提取物中金丝桃素含量的方法。采用YMC-Pack ODS-A色谱柱（5 μm，150 mm×4.6 mm），以乙腈-0.02M磷酸二氢钠（85∶15）为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长588 nm，柱温25 ℃。结果表明，金丝桃素在6～36 μg/mL范围内线性关系良好（r=0.999 6），平均加样回收率为98.86%（n=6），峰面积的相对标准偏差（RSD）为3.15%。此方法专属性强、重复性好，可用于贯叶连翘提取物中金丝桃素的含量测定。

    关键词：贯叶连翘；金丝桃素；高效液相色谱；含量测定

    中图分类号：S853.7文献标志码：A文章编号：1007-273X（2014）05-0013-02

    贯叶连翘（Hypericum performatum L.）为藤黄科金丝桃属多年生草本植物，其味苦、辛，性平，可清心明目、调经活血、止血生肌、解毒消炎[1]。其主要活性成分金丝桃素具有光敏活性和光动力作用，有较好的抗病毒、抗肿瘤功效，同时也是贯叶连翘抗抑郁的主要活性成分之一[2]。本试验采用高效液相色谱法对贯叶连翘提取物中金丝桃素进行了含量测定，建立了一种专一性强、重复性好的测定方法，为贯叶连翘提取物的质量控制提供依据。

    1仪器与试药

    1.1仪器

    Waters Alliance e2695高效液相色谱仪；美国Millipore水纯化系统；针筒式微孔滤膜过滤器（上海兴亚净化材料厂产品，孔径0.22 μm）。

    1.2药品与试剂

    金丝桃素（批号MUST-13121505，购自成都曼思特生物科技有限公司）；贯叶连翘提取物，购自北京经日今典科技有限公司；乙腈（色谱纯，天津市光复精细化工研究所）。

    2方法与结果

    2.1色谱条件

    YMC-Pack ODS-A色谱柱（5 μm，150 mm×4.6 mm）；流动相：乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钠（85∶15）；流速1.0 mL/min；检测波长588 nm；柱温25 ℃。

    2.2溶液的制备

    2.2.1对照品溶液的制备精密称取金丝桃素对照品1.2 mg置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至100 mL，制成浓度为0.12 mg/mL的对照品贮存液。精密吸取金丝桃素标准品贮备液0.25、0.5、0.75、1.00、1.25、1.5 mL，分别放置于5 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，分别得到6、12、18、24、30、36 μg/mL的对照品溶液。

    2.2.2供试品溶液的制备精密称取贯叶连翘提取物62.2 mg，置5 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容。用0.20 μm滤膜过滤，取续滤液，即得提取物供试品溶液。

    2.3专属性试验

    精密吸取浓度为24 μg/mL的金丝桃素对照品溶液和供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪中，由色谱图知，在金丝桃素对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰（图1）。

    2.4线性关系考察

    分别精密吸取浓度为6、12、18、24、30、36 μg/mL的对照品溶液20 μL，自动进样注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以金丝桃素含量（μg/mL）为横坐标，峰面积值为纵坐标，计算回归方程为y=74 196x-11 176，r=0.999 6，结果表明，在6～36 μg/mL范围内，峰面积与金丝桃素浓度呈良好的线性关系（图2）。

    2.5精密度试验

    取浓度为24 μg/mL的对照品溶液，连续进样6次，每次进样20 μL，测定峰面积，结果峰面积的相对标