灯盏花素软袋大输液质量标准研究
汤秀梅 刘丹 赵娟 张煌 丁江生
摘要：目的 建立灯盏素软袋大输液的质量标准。方法 高效液相色谱法测定该制剂中野黄芩苷的含量进行质量检查;并测定其PH值，渗透压，不溶性微粒。结果 采用以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸（18：82）為流动相，流速1.0 mL/min，检测波长335 nm。野黄芩苷的线性范围为16μg/mL～400μg/mL（ r = 0.9999），平均回收率为100.2%。结论 建立的灯盏花素软袋大输液的质量标准，其含量测定方法简便，可控，可用于灯盏花素大输液的质量控制指标。
关键词：灯盏花素软袋大输液;质量标准;高效液相色谱法
中图分类号：R927.11 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2018）09-0065-03
Study on Quality Standard of Large Volume Parenteral Infusion of Breviscapine Soft Bag
TANG Xiu-mei， LIU Dan， ZHAO Juan， ZHANG Huang， DING Jiang-sheng
（Yunnan Institute of Materia Medica// Key Laboratory of Yunnan Traditional Chinese Medicine and Ethnic
Medicine New Drug Creation Enterprise// Innovation and Research Center of Yunnan Baiyao Group ）
【Abstract】Objective： To establish the quality standard of large volume parenteral infusion of breviscapine soft bag. Methods： High performance liquid chromatography was used to determine the content of wild baicalin in the preparation for quality inspection. The pH value， osmotic pressure and insoluble particles were determined. Results： The octadecylsilane bonded silica gel was used as the column， the mobile phase was acetonitrile -0.1% phosphoric acid （18：82）， the flow rate was 1.0 mL/min， and the detection wavelength was 335 nm. The linear range of wild baicalin was 16 μg/mL to 400 μg/mL （r=0.9999）， and the average recovery was 100.2%. Conclusion： The quality standard of the breviscapine soft bag infusion is established and the method for determining the content is simple and controllable， and can be used for the quality control index of breviscapine large volume parenteral infusion.
【Key words】breviscapine soft bag large infusion， quality standard， high performance liquid chromatography
灯盏花素软袋大输液是以灯盏花素为原料制成的注射剂。灯盏花素具有活血化瘀，通经活络的功能。用于脑络瘀阻，中风偏瘫，心脉痹阻，胸痹心痛;中风后遗症及冠心病心绞痛证候者。注射给药不经胃肠道，故不受消化系统及食物的影响，直接进入循环系统或组织、器官内，具有吸收快，作用迅速的特点。对研制的灯盏花素软袋大输液，研究控制其质量，建立质量标准。
1 材料
1.1 仪器 Agilent 708-DS自动溶出仪;Agilent 1200高效液相色谱仪;BSA224s·cw 电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）;CPA225D电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）;YZ360DB超声仪（上海越众仪器设备有限公司）;
1.2 试药 甲醇（色谱纯，默克公司）;其余为分析纯;野黄芩苷对照品（购于中国食品药品检定研究院，批号110842-201207），灯盏花素软袋大输液（批号：20151019，20151020，20151021，云南省药物研究所提供）。
2 方法与结果
2.1 鉴别 取供试品液，用紫外-分光光仪进行波长扫描，在（284±2）nm和（335±2）nm的波长处有最大吸收。
2.2 pH值 使用酸度计测定，用纯化水冲洗电极，擦干。电极放入待测溶液中，读数。每批样分别测定3次。
2.3 装量差异 取供试品3袋，开启时注意避免损失，将内容物转移至干燥500 mL量筒中倒置15 min，尽量倾净。读出每个容器内容物的装量，并求其平均装量，均应不少于标示装量的97%。
2.4 可见异物 取供试品20袋，除去容器标签，擦净容器外壁，必要时将药液转移至洁净透明的适宜容器内，置供试品于遮光板边缘处，手持供试品颈部轻轻旋转和翻转使药液中可能存在的可见异物悬浮（但应避免产生气泡），轻轻翻摇后即用目检视，重复3次，均不得检出明显可见异物。
2.5 不溶性微粒 取供试品，用水将容器外壁洗净，小心翻转20次，使溶液混合均匀，小心开启容器，先取出部分供试品溶液冲洗取样杯，再将供试品溶液取出置取样杯中，开启搅拌，使溶液均匀，每个供试品依法测定至少3次，每次取样应不少于5 mL，记录数据，弃第1次测定数据，取后续测定数据的平均值作为测定结果。
2.6 渗透压摩尔浓度 取适量新沸放冷的水调节仪器零点，然后由表中选择两种标准溶液（供试品溶液的渗透压摩尔浓度应介于两者之间）校正仪器，再测定供试品溶液的渗透压摩尔浓度。
2.7 含量测定
2.7.1 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.1%磷酸（18：82）为流动相;柱温为35℃;流速为每分钟1 mL。理论板数按野黄芩苷峰计算不低于4000。
a.空白
b.对照
c.样品
图1 灯盏花素软袋大输液中野黄芩苷色谱图
2.7.2 对照溶液的制备 取野黄芩苷对照品，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每1mL中含80μg的溶液，作为对照品溶液。
2.7.3 供试品溶液 取约2 mL样品，用0.45 μm滤头过滤，得供试品溶液。
2.7.4 空白溶液 取约2 mL空白样品，用0.45 μm滤头过滤，得空白溶液。
2.7.5 线性关系考察试验 精密称取野黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得对照品母液（0.808 mg/mL），精密吸取对照品母液5 mL、1 mL、1 mL、1 mL、1 mL分别置10 mL、5 mL、10 mL、25 mL、50 mL的容量瓶中，用甲醇并定容至刻度，摇匀。精密吸取5 μL，分别进样，以浓度（X）对峰面积（Y）进行线性回归，得回归方程y=16328.5146x-76.6416，r=0.9999，表明灯盏花素在16～400 μg/mL围内呈良好的线性关系。
2.7.6 重复性试验 取同一批供试品，分别取出6份，滤过，分别测定野黃芩苷含量，测定结果显示重复性好，相对标准偏差为0.79%。
2.7.7 稳定性试验 取供试品溶液适量，滤过，室温放置，分别于0 h、1 h、3 h、6 h、9 h、12 h、18 h、24 h进样测定，24 h无显著性变化，供试品较为稳定，相对标准偏差为0.94%。
2.7.8 准确度试验 精密称取野黄芩苷对照品10 mg至50 mL量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度，作为对照储备液;分别精密量取5 mL样品置10 mL量瓶中9份，每3份分别加入对照储备液1 mL、 2 mL、 3 mL，用甲醇稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得供试品溶液;另取上述对照储备液用甲醇稀释并制成每1 mL含0.08 mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液。取上述对照品溶液和供试品溶液，分别进样，按外标法计算，即得，实验结果回收率98%～101%之间，平均值100.2%。
2.7.9 中间精密度 3位不同人员对同一批供试品分别测定野黄芩苷，测定结果分别为，0.0794 mg/mL，0.0791 mg/mL，0.0795 mg/mL，相对标准偏差1.76%。
2.7.10 耐用性实验 分别改变色谱条件中的流速为0.8 mL/min，1.0 mL/min，1.2 mL/min;柱温：25℃，30℃，40℃;流动相：乙腈-0.1%磷酸（20：80），乙腈-0.1%磷酸（18：82），乙腈-0.1%磷酸（16：84）柱子：Ecosil-C18，Kromasi 100-5 C18，Agilent Zorbax SB-C18，分别进样供试品液、对照品溶液，试验结果显示，测定条件有小的变动时，所用溶剂和辅料对溶出检测结果无影响，野黄芩苷峰分离度均1.5以上。
2.7.11 3批样品的检测结果 见表1。
表1 3批样品检测结果
3 讨论
3.1 pH值 可见异物、不溶性微粒，摩尔渗透压等为控制中药注射剂质量的重要指标，对灯盏花素软袋输液的这些指标均进行研究，并列入质量标准中。
3.2 色谱条件研究 参照《中国药典》2010年版一部的灯盏花素含量测定色谱条件，流动相甲醇-0.1%磷酸（40：60），流速1.0 mL/min，检测波长335 nm。进供试品得到的野黄芩苷色谱峰有前沿峰，对称性不好，影响积分基线，会导致峰面积不准确，而检测结果也不准确。调整流动相，乙腈-0.1%磷酸（18：82），野黄芩苷色谱峰峰形对称性好，分离度1.5以上，确定色谱条件流动相为乙腈-0.1%磷酸（18：82），流速1.0 mL/min，柱温30℃，检测波长335 nm。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2015.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准[S].
[3]邵 鑫，周 洁，姚 武 灯盏花素片中灯盏乙素含量的HPLC法测定[D].黄山学院学报，2012，（14）：53-54.
（收稿日期：2018-03-19）
摘要：目的 建立灯盏素软袋大输液的质量标准。方法 高效液相色谱法测定该制剂中野黄芩苷的含量进行质量检查;并测定其PH值，渗透压，不溶性微粒。结果 采用以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸（18：82）為流动相，流速1.0 mL/min，检测波长335 nm。野黄芩苷的线性范围为16μg/mL～400μg/mL（ r = 0.9999），平均回收率为100.2%。结论 建立的灯盏花素软袋大输液的质量标准，其含量测定方法简便，可控，可用于灯盏花素大输液的质量控制指标。
关键词：灯盏花素软袋大输液;质量标准;高效液相色谱法
中图分类号：R927.11 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2018）09-0065-03
Study on Quality Standard of Large Volume Parenteral Infusion of Breviscapine Soft Bag
TANG Xiu-mei， LIU Dan， ZHAO Juan， ZHANG Huang， DING Jiang-sheng
（Yunnan Institute of Materia Medica// Key Laboratory of Yunnan Traditional Chinese Medicine and Ethnic
Medicine New Drug Creation Enterprise// Innovation and Research Center of Yunnan Baiyao Group ）
【Abstract】Objective： To establish the quality standard of large volume parenteral infusion of breviscapine soft bag. Methods： High performance liquid chromatography was used to determine the content of wild baicalin in the preparation for quality inspection. The pH value， osmotic pressure and insoluble particles were determined. Results： The octadecylsilane bonded silica gel was used as the column， the mobile phase was acetonitrile -0.1% phosphoric acid （18：82）， the flow rate was 1.0 mL/min， and the detection wavelength was 335 nm. The linear range of wild baicalin was 16 μg/mL to 400 μg/mL （r=0.9999）， and the average recovery was 100.2%. Conclusion： The quality standard of the breviscapine soft bag infusion is established and the method for determining the content is simple and controllable， and can be used for the quality control index of breviscapine large volume parenteral infusion.
【Key words】breviscapine soft bag large infusion， quality standard， high performance liquid chromatography
灯盏花素软袋大输液是以灯盏花素为原料制成的注射剂。灯盏花素具有活血化瘀，通经活络的功能。用于脑络瘀阻，中风偏瘫，心脉痹阻，胸痹心痛;中风后遗症及冠心病心绞痛证候者。注射给药不经胃肠道，故不受消化系统及食物的影响，直接进入循环系统或组织、器官内，具有吸收快，作用迅速的特点。对研制的灯盏花素软袋大输液，研究控制其质量，建立质量标准。
1 材料
1.1 仪器 Agilent 708-DS自动溶出仪;Agilent 1200高效液相色谱仪;BSA224s·cw 电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）;CPA225D电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）;YZ360DB超声仪（上海越众仪器设备有限公司）;
1.2 试药 甲醇（色谱纯，默克公司）;其余为分析纯;野黄芩苷对照品（购于中国食品药品检定研究院，批号110842-201207），灯盏花素软袋大输液（批号：20151019，20151020，20151021，云南省药物研究所提供）。
2 方法与结果
2.1 鉴别 取供试品液，用紫外-分光光仪进行波长扫描，在（284±2）nm和（335±2）nm的波长处有最大吸收。
2.2 pH值 使用酸度计测定，用纯化水冲洗电极，擦干。电极放入待测溶液中，读数。每批样分别测定3次。
2.3 装量差异 取供试品3袋，开启时注意避免损失，将内容物转移至干燥500 mL量筒中倒置15 min，尽量倾净。读出每个容器内容物的装量，并求其平均装量，均应不少于标示装量的97%。
2.4 可见异物 取供试品20袋，除去容器标签，擦净容器外壁，必要时将药液转移至洁净透明的适宜容器内，置供试品于遮光板边缘处，手持供试品颈部轻轻旋转和翻转使药液中可能存在的可见异物悬浮（但应避免产生气泡），轻轻翻摇后即用目检视，重复3次，均不得检出明显可见异物。
2.5 不溶性微粒 取供试品，用水将容器外壁洗净，小心翻转20次，使溶液混合均匀，小心开启容器，先取出部分供试品溶液冲洗取样杯，再将供试品溶液取出置取样杯中，开启搅拌，使溶液均匀，每个供试品依法测定至少3次，每次取样应不少于5 mL，记录数据，弃第1次测定数据，取后续测定数据的平均值作为测定结果。
2.6 渗透压摩尔浓度 取适量新沸放冷的水调节仪器零点，然后由表中选择两种标准溶液（供试品溶液的渗透压摩尔浓度应介于两者之间）校正仪器，再测定供试品溶液的渗透压摩尔浓度。
2.7 含量测定
2.7.1 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.1%磷酸（18：82）为流动相;柱温为35℃;流速为每分钟1 mL。理论板数按野黄芩苷峰计算不低于4000。
a.空白
b.对照
c.样品
图1 灯盏花素软袋大输液中野黄芩苷色谱图
2.7.2 对照溶液的制备 取野黄芩苷对照品，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每1mL中含80μg的溶液，作为对照品溶液。
2.7.3 供试品溶液 取约2 mL样品，用0.45 μm滤头过滤，得供试品溶液。
2.7.4 空白溶液 取约2 mL空白样品，用0.45 μm滤头过滤，得空白溶液。
2.7.5 线性关系考察试验 精密称取野黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得对照品母液（0.808 mg/mL），精密吸取对照品母液5 mL、1 mL、1 mL、1 mL、1 mL分别置10 mL、5 mL、10 mL、25 mL、50 mL的容量瓶中，用甲醇并定容至刻度，摇匀。精密吸取5 μL，分别进样，以浓度（X）对峰面积（Y）进行线性回归，得回归方程y=16328.5146x-76.6416，r=0.9999，表明灯盏花素在16～400 μg/mL围内呈良好的线性关系。
2.7.6 重复性试验 取同一批供试品，分别取出6份，滤过，分别测定野黃芩苷含量，测定结果显示重复性好，相对标准偏差为0.79%。
2.7.7 稳定性试验 取供试品溶液适量，滤过，室温放置，分别于0 h、1 h、3 h、6 h、9 h、12 h、18 h、24 h进样测定，24 h无显著性变化，供试品较为稳定，相对标准偏差为0.94%。
2.7.8 准确度试验 精密称取野黄芩苷对照品10 mg至50 mL量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度，作为对照储备液;分别精密量取5 mL样品置10 mL量瓶中9份，每3份分别加入对照储备液1 mL、 2 mL、 3 mL，用甲醇稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得供试品溶液;另取上述对照储备液用甲醇稀释并制成每1 mL含0.08 mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液。取上述对照品溶液和供试品溶液，分别进样，按外标法计算，即得，实验结果回收率98%～101%之间，平均值100.2%。
2.7.9 中间精密度 3位不同人员对同一批供试品分别测定野黄芩苷，测定结果分别为，0.0794 mg/mL，0.0791 mg/mL，0.0795 mg/mL，相对标准偏差1.76%。
2.7.10 耐用性实验 分别改变色谱条件中的流速为0.8 mL/min，1.0 mL/min，1.2 mL/min;柱温：25℃，30℃，40℃;流动相：乙腈-0.1%磷酸（20：80），乙腈-0.1%磷酸（18：82），乙腈-0.1%磷酸（16：84）柱子：Ecosil-C18，Kromasi 100-5 C18，Agilent Zorbax SB-C18，分别进样供试品液、对照品溶液，试验结果显示，测定条件有小的变动时，所用溶剂和辅料对溶出检测结果无影响，野黄芩苷峰分离度均1.5以上。
2.7.11 3批样品的检测结果 见表1。
表1 3批样品检测结果
3 讨论
3.1 pH值 可见异物、不溶性微粒，摩尔渗透压等为控制中药注射剂质量的重要指标，对灯盏花素软袋输液的这些指标均进行研究，并列入质量标准中。
3.2 色谱条件研究 参照《中国药典》2010年版一部的灯盏花素含量测定色谱条件，流动相甲醇-0.1%磷酸（40：60），流速1.0 mL/min，检测波长335 nm。进供试品得到的野黄芩苷色谱峰有前沿峰，对称性不好，影响积分基线，会导致峰面积不准确，而检测结果也不准确。调整流动相，乙腈-0.1%磷酸（18：82），野黄芩苷色谱峰峰形对称性好，分离度1.5以上，确定色谱条件流动相为乙腈-0.1%磷酸（18：82），流速1.0 mL/min，柱温30℃，检测波长335 nm。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2015.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准[S].
[3]邵 鑫，周 洁，姚 武 灯盏花素片中灯盏乙素含量的HPLC法测定[D].黄山学院学报，2012，（14）：53-54.
（收稿日期：2018-03-19）
