西瓜枯萎病病原菌的室内药剂筛选
王爽+罗丰+肖春雷+刘勇+孔祥义
摘 要：利用生长速率法，对9种西瓜枯萎病防治药剂进行室内筛选，结果表明，化学杀菌剂苯甲·嘧菌酯的抑菌效果最好，EC50值为1.361 05 mg/L，苯醚甲环唑和异菌脲的抑菌效果较好，EC50值分别为3.846 54 mg/L和4.893 36 mg/L；2种生物杀菌剂寡雄腐霉和多粘类芽孢杆菌的室内抑菌效果均表现较好，且寡雄腐霉的抑菌效果更好。
关键词：西瓜枯萎病；化学杀菌剂；生物杀菌剂；室内筛选
中图分类号：S436.5；S651 文献标识码：A 文章编号：1001-3547（2014）18-0070-03
西瓜枯萎病又称萎蔫病或蔓割病，是一种由尖孢镰刀菌西瓜专化型（Fusarium oxysporum f. sp. niveum）侵染所致的土传维管束病害，其在西瓜整个生育期均可发生，以开花到结果期最重，是世界性分布的毁灭性病害之一。重茬地一般发病率在 30%以上，严重地块在 80%以上，甚至造成绝收[1]。
目前，生产上主要通过轮作倒茬和嫁接的手段来防治该病，药剂防治是控制病害的重要方面，国内关于药剂自身对枯萎病病原菌的直接作用的研究较少，已有的研究表明，戊唑醇和乙唑醇对病原菌的抑菌效果好[2]，多粘类芽孢杆菌和甲基托布津的抑菌效果好[3]，咪鲜胺乳油、噁霉灵、多霉威和异菌脲是防治西瓜枯萎病较好的药剂[4]。本研究在已有研究的基础上，进一步选用 9 种药剂进行了室内毒力分析，以期为生产上防治该病提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 供试病原菌
西瓜枯萎病病原菌由新疆省农业科学院提供。
1.2 供试药剂
9 种化学杀菌剂的生产厂家见表1，其中，编号 1～7为化学农药，编号8、9 为生物农药。
1.3 供试培养基
西瓜枯萎病菌株培养采用PDA培养基，配方Dzaktan等[5]的方法。
1.4 试验方法
采用生长速率法，每种药剂设计 5 个浓度梯度（表2），将供试药剂分别与PDA培养基混合，配制成含有一定浓度的带菌平板，分别以不添加药液的PDA平板为空白对照，每一浓度重复3次。将 6 mm菌饼置于含不同浓度供试杀菌剂的PDA平板上，在 28℃恒温培养箱全黑暗培养，6 d后用十字交叉法测量菌落直径，取平均值进行回归分析，并比较各种药剂的毒力大小。
抑菌率（%）=（对照菌落直径-处理菌落直径）/（对照菌落直径-菌饼原始直径）×100%。
计算浓度对数（X）与抑制菌落生长百分率的几率值（Y），利用最小二乘法分别求算各杀菌剂对该病原菌的毒力回归方程Y=AX+B、EC50值和R2。
2 结果与分析
2.1 7种化学杀菌剂的抑菌效果比较
由表2得知，7 种化学杀菌剂中，苯甲·嘧菌酯的抑菌效果最好，EC50值为1.361 05 mg/L；苯醚甲环唑和异菌脲抑菌效果较好，EC50值分别为
3.846 54、4.893 36 mg/L；福美双、噁霉甲、乙蒜素和噁霉灵表现差，EC50值在8.212 29～55.029 7 mg/L。7 种化学杀菌剂的抑菌效果排序为：苯甲·嘧菌酯>苯醚甲环唑>异菌脲>福美双>噁霉甲>乙蒜素>噁霉灵。
2.2 2种生物农药的抑菌效果比较
由表3得知，随着稀释倍数的增加，2种生物农药寡雄腐霉和多粘类芽孢杆菌的抑菌率逐渐减小，但随着稀释倍数的增加，生物药剂寡雄腐霉的抑菌率降低幅度较小，而多粘类芽孢杆菌降低幅度较大，且当2种药剂均稀释至1×107倍时，寡雄腐霉的抑菌率仍可达65.2%，而多粘类芽孢杆菌的抑菌率仅为12.6%。因此，生物农药寡雄腐霉的抑菌效果好于多粘类芽孢杆菌。
3 结论与讨论
本研究结果表明，化学农药苯甲·嘧菌酯对西瓜枯萎病病原菌的抑菌效果最好，苯醚甲环唑和异菌脲抑菌效果较好，生物农药寡雄腐霉和多粘类芽孢杆菌对枯萎病病原菌的抑菌效果较好，且寡雄腐霉的抑菌效果好于多粘类芽孢杆菌。
化学药剂防治西瓜枯萎病是控制西瓜枯萎病发生和减少的有效途径之一，王汉荣等[4]通过室内和田间试验研究表明，异菌脲和噁霉灵可作为大田生产上防治枯萎病较好的药剂，与本研究的结果异菌脲的室内抑菌效果较好是一致的，但本研究认为噁霉灵的室内抑菌效果偏差，与王汉荣等的报道存在一定的差异性，分析可能是因为不同地区枯萎病病原菌生理小种及抗药性存在差异所致。采用化学药剂苯甲·嘧菌酯来防治西瓜枯萎病未见相关报道，本研究通过室内试验证明苯甲·嘧菌酯可能是防治西瓜枯萎病较好的药剂。
化学农药用药单一是病原菌产生抗药性的主要原因之一，使得化学药剂的田间防治效果逐年降低，且化学农药的残留对生态环境和人体健康造成为害。因此，生物防治在防治西瓜枯萎病的诸多措施中越来越受到重视[5]。目前，西瓜枯萎病的生物防治主要是采用拮抗微生物降低病原菌的密度，从而达到控制病害的目的，许彦等[3]的研究结果表明，多粘类芽孢杆菌的防治效果较好，与本研究的结果基本一致。多利维生（Polyversum）是目前唯一以寡雄腐霉登记注册的微生物农药产品，其对园艺、蔬菜等作物的真菌类病害具有显著的抑制作用[6～8]，本研究结果表明，寡雄腐霉抑制病原菌的生长效果显著，在防治西瓜枯萎病上具有一定的应用潜力。
生产上应协同采取化学防治和生物防治，并结合农业防治等手段对西瓜枯萎病进行综合性防治，目前，本项目组在三亚市吉阳镇示范基地应用嫁接技术、肥水管理、水旱轮作和生物农药（多粘类芽孢杆菌）等综合防控技术，已连续6 a将西瓜枯萎病发病率控制在1%以下。
参考文献
[1] 李洪连，袁红霞，王守正，等.西瓜枯萎病防治技术进展[J]. 中国蔬菜，2005（7）：33-34.
[2] 周增强，侯珲，冯桂馨，等.6种药剂对西瓜枯萎病病原菌的抑制作用[J].中国西瓜甜瓜，2004（5）：13-14.
[3] 许彦，罗丰，杨礼哲，等.几种杀菌剂对西瓜枯萎病的室内毒力测定[J]. 热带农业科学，2010，30（10）：18-19.
[4] 王汉荣，方丽，任海英，等.西瓜枯萎病防治药剂筛选[J]. 植物保护，2011，37（1）：150-152.
[5] Ozaktan H， Bora T. Biological control of Fusarium oxysporum f. sp. melonis by the formulations of fluorescent pseudomonads[J]. Journal of Turkish Phytopathology， 2000， 29（2-3）： 133-149.
[6] Cizkova D， Svecova M. The effect of biological preparation polyversum and ibefungin against fungi of genus Ophistoma sp. XIV[C]. Slovak and Czech Plant Protection Conference， Nitra： 1997， 343-344.
[7] Picard K， Ponchet M， Blein J P， et al. Oligandrin， a proteinaceous molecule produced by the mycoparasite Pythium oligandrum induces resistance to Phytophthora parasitica infection in tomato plants[J]. Plant Physiology， 2000， 124： 379-395.
[8] Benhamou N， Belan ger R R， Rey P， et al. Oligandrin， the elicitin-like protein produced by the mycoparasite Pythium oligandrum， induces systemic resistance to Fumrium crown and root rot in tomato plants[J]. Plant Physiology and Biochemistry， 2001， 39： 681-698.
[2] 周增强，侯珲，冯桂馨，等.6种药剂对西瓜枯萎病病原菌的抑制作用[J].中国西瓜甜瓜，2004（5）：13-14.
[3] 许彦，罗丰，杨礼哲，等.几种杀菌剂对西瓜枯萎病的室内毒力测定[J]. 热带农业科学，2010，30（10）：18-19.
[4] 王汉荣，方丽，任海英，等.西瓜枯萎病防治药剂筛选[J]. 植物保护，2011，37（1）：150-152.
[5] Ozaktan H， Bora T. Biological control of Fusarium oxysporum f. sp. melonis by the formulations of fluorescent pseudomonads[J]. Journal of Turkish Phytopathology， 2000， 29（2-3）： 133-149.
[6] Cizkova D， Svecova M. The effect of biological preparation polyversum and ibefungin against fungi of genus Ophistoma sp. XIV[C]. Slovak and Czech Plant Protection Conference， Nitra： 1997， 343-344.
[7] Picard K， Ponchet M， Blein J P， et al. Oligandrin， a proteinaceous molecule produced by the mycoparasite Pythium oligandrum induces resistance to Phytophthora parasitica infection in tomato plants[J]. Plant Physiology， 2000， 124： 379-395.
[8] Benhamou N， Belan ger R R， Rey P， et al. Oligandrin， the elicitin-like protein produced by the mycoparasite Pythium oligandrum， induces systemic resistance to Fumrium crown and root rot in tomato plants[J]. Plant Physiology and Biochemistry， 2001， 39： 681-698.
[2] 周增强，侯珲，冯桂馨，等.6种药剂对西瓜枯萎病病原菌的抑制作用[J].中国西瓜甜瓜，2004（5）：13-14.
[3] 许彦，罗丰，杨礼哲，等.几种杀菌剂对西瓜枯萎病的室内毒力测定[J]. 热带农业科学，2010，30（10）：18-19.
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[5] Ozaktan H， Bora T. Biological control of Fusarium oxysporum f. sp. melonis by the formulations of fluorescent pseudomonads[J]. Journal of Turkish Phytopathology， 2000， 29（2-3）： 133-149.
[6] Cizkova D， Svecova M. The effect of biological preparation polyversum and ibefungin against fungi of genus Ophistoma sp. XIV[C]. Slovak and Czech Plant Protection Conference， Nitra： 1997， 343-344.
[7] Picard K， Ponchet M， Blein J P， et al. Oligandrin， a proteinaceous molecule produced by the mycoparasite Pythium oligandrum induces resistance to Phytophthora parasitica infection in tomato plants[J]. Plant Physiology， 2000， 124： 379-395.
[8] Benhamou N， Belan ger R R， Rey P， et al. Oligandrin， the elicitin-like protein produced by the mycoparasite Pythium oligandrum， induces systemic resistance to Fumrium crown and root rot in tomato plants[J]. Plant Physiology and Biochemistry， 2001， 39： 681-698.
摘 要：利用生长速率法，对9种西瓜枯萎病防治药剂进行室内筛选，结果表明，化学杀菌剂苯甲·嘧菌酯的抑菌效果最好，EC50值为1.361 05 mg/L，苯醚甲环唑和异菌脲的抑菌效果较好，EC50值分别为3.846 54 mg/L和4.893 36 mg/L；2种生物杀菌剂寡雄腐霉和多粘类芽孢杆菌的室内抑菌效果均表现较好，且寡雄腐霉的抑菌效果更好。
关键词：西瓜枯萎病；化学杀菌剂；生物杀菌剂；室内筛选
中图分类号：S436.5；S651 文献标识码：A 文章编号：1001-3547（2014）18-0070-03
西瓜枯萎病又称萎蔫病或蔓割病，是一种由尖孢镰刀菌西瓜专化型（Fusarium oxysporum f. sp. niveum）侵染所致的土传维管束病害，其在西瓜整个生育期均可发生，以开花到结果期最重，是世界性分布的毁灭性病害之一。重茬地一般发病率在 30%以上，严重地块在 80%以上，甚至造成绝收[1]。
目前，生产上主要通过轮作倒茬和嫁接的手段来防治该病，药剂防治是控制病害的重要方面，国内关于药剂自身对枯萎病病原菌的直接作用的研究较少，已有的研究表明，戊唑醇和乙唑醇对病原菌的抑菌效果好[2]，多粘类芽孢杆菌和甲基托布津的抑菌效果好[3]，咪鲜胺乳油、噁霉灵、多霉威和异菌脲是防治西瓜枯萎病较好的药剂[4]。本研究在已有研究的基础上，进一步选用 9 种药剂进行了室内毒力分析，以期为生产上防治该病提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 供试病原菌
西瓜枯萎病病原菌由新疆省农业科学院提供。
1.2 供试药剂
9 种化学杀菌剂的生产厂家见表1，其中，编号 1～7为化学农药，编号8、9 为生物农药。
1.3 供试培养基
西瓜枯萎病菌株培养采用PDA培养基，配方Dzaktan等[5]的方法。
1.4 试验方法
采用生长速率法，每种药剂设计 5 个浓度梯度（表2），将供试药剂分别与PDA培养基混合，配制成含有一定浓度的带菌平板，分别以不添加药液的PDA平板为空白对照，每一浓度重复3次。将 6 mm菌饼置于含不同浓度供试杀菌剂的PDA平板上，在 28℃恒温培养箱全黑暗培养，6 d后用十字交叉法测量菌落直径，取平均值进行回归分析，并比较各种药剂的毒力大小。
抑菌率（%）=（对照菌落直径-处理菌落直径）/（对照菌落直径-菌饼原始直径）×100%。
计算浓度对数（X）与抑制菌落生长百分率的几率值（Y），利用最小二乘法分别求算各杀菌剂对该病原菌的毒力回归方程Y=AX+B、EC50值和R2。
2 结果与分析
2.1 7种化学杀菌剂的抑菌效果比较
由表2得知，7 种化学杀菌剂中，苯甲·嘧菌酯的抑菌效果最好，EC50值为1.361 05 mg/L；苯醚甲环唑和异菌脲抑菌效果较好，EC50值分别为
3.846 54、4.893 36 mg/L；福美双、噁霉甲、乙蒜素和噁霉灵表现差，EC50值在8.212 29～55.029 7 mg/L。7 种化学杀菌剂的抑菌效果排序为：苯甲·嘧菌酯>苯醚甲环唑>异菌脲>福美双>噁霉甲>乙蒜素>噁霉灵。
2.2 2种生物农药的抑菌效果比较
由表3得知，随着稀释倍数的增加，2种生物农药寡雄腐霉和多粘类芽孢杆菌的抑菌率逐渐减小，但随着稀释倍数的增加，生物药剂寡雄腐霉的抑菌率降低幅度较小，而多粘类芽孢杆菌降低幅度较大，且当2种药剂均稀释至1×107倍时，寡雄腐霉的抑菌率仍可达65.2%，而多粘类芽孢杆菌的抑菌率仅为12.6%。因此，生物农药寡雄腐霉的抑菌效果好于多粘类芽孢杆菌。
3 结论与讨论
本研究结果表明，化学农药苯甲·嘧菌酯对西瓜枯萎病病原菌的抑菌效果最好，苯醚甲环唑和异菌脲抑菌效果较好，生物农药寡雄腐霉和多粘类芽孢杆菌对枯萎病病原菌的抑菌效果较好，且寡雄腐霉的抑菌效果好于多粘类芽孢杆菌。
化学药剂防治西瓜枯萎病是控制西瓜枯萎病发生和减少的有效途径之一，王汉荣等[4]通过室内和田间试验研究表明，异菌脲和噁霉灵可作为大田生产上防治枯萎病较好的药剂，与本研究的结果异菌脲的室内抑菌效果较好是一致的，但本研究认为噁霉灵的室内抑菌效果偏差，与王汉荣等的报道存在一定的差异性，分析可能是因为不同地区枯萎病病原菌生理小种及抗药性存在差异所致。采用化学药剂苯甲·嘧菌酯来防治西瓜枯萎病未见相关报道，本研究通过室内试验证明苯甲·嘧菌酯可能是防治西瓜枯萎病较好的药剂。
化学农药用药单一是病原菌产生抗药性的主要原因之一，使得化学药剂的田间防治效果逐年降低，且化学农药的残留对生态环境和人体健康造成为害。因此，生物防治在防治西瓜枯萎病的诸多措施中越来越受到重视[5]。目前，西瓜枯萎病的生物防治主要是采用拮抗微生物降低病原菌的密度，从而达到控制病害的目的，许彦等[3]的研究结果表明，多粘类芽孢杆菌的防治效果较好，与本研究的结果基本一致。多利维生（Polyversum）是目前唯一以寡雄腐霉登记注册的微生物农药产品，其对园艺、蔬菜等作物的真菌类病害具有显著的抑制作用[6～8]，本研究结果表明，寡雄腐霉抑制病原菌的生长效果显著，在防治西瓜枯萎病上具有一定的应用潜力。
生产上应协同采取化学防治和生物防治，并结合农业防治等手段对西瓜枯萎病进行综合性防治，目前，本项目组在三亚市吉阳镇示范基地应用嫁接技术、肥水管理、水旱轮作和生物农药（多粘类芽孢杆菌）等综合防控技术，已连续6 a将西瓜枯萎病发病率控制在1%以下。
参考文献
[1] 李洪连，袁红霞，王守正，等.西瓜枯萎病防治技术进展[J]. 中国蔬菜，2005（7）：33-34.
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[2] 周增强，侯珲，冯桂馨，等.6种药剂对西瓜枯萎病病原菌的抑制作用[J].中国西瓜甜瓜，2004（5）：13-14.
[3] 许彦，罗丰，杨礼哲，等.几种杀菌剂对西瓜枯萎病的室内毒力测定[J]. 热带农业科学，2010，30（10）：18-19.
[4] 王汉荣，方丽，任海英，等.西瓜枯萎病防治药剂筛选[J]. 植物保护，2011，37（1）：150-152.
[5] Ozaktan H， Bora T. Biological control of Fusarium oxysporum f. sp. melonis by the formulations of fluorescent pseudomonads[J]. Journal of Turkish Phytopathology， 2000， 29（2-3）： 133-149.
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[8] Benhamou N， Belan ger R R， Rey P， et al. Oligandrin， the elicitin-like protein produced by the mycoparasite Pythium oligandrum， induces systemic resistance to Fumrium crown and root rot in tomato plants[J]. Plant Physiology and Biochemistry， 2001， 39： 681-698.
[2] 周增强，侯珲，冯桂馨，等.6种药剂对西瓜枯萎病病原菌的抑制作用[J].中国西瓜甜瓜，2004（5）：13-14.
[3] 许彦，罗丰，杨礼哲，等.几种杀菌剂对西瓜枯萎病的室内毒力测定[J]. 热带农业科学，2010，30（10）：18-19.
[4] 王汉荣，方丽，任海英，等.西瓜枯萎病防治药剂筛选[J]. 植物保护，2011，37（1）：150-152.
[5] Ozaktan H， Bora T. Biological control of Fusarium oxysporum f. sp. melonis by the formulations of fluorescent pseudomonads[J]. Journal of Turkish Phytopathology， 2000， 29（2-3）： 133-149.
[6] Cizkova D， Svecova M. The effect of biological preparation polyversum and ibefungin against fungi of genus Ophistoma sp. XIV[C]. Slovak and Czech Plant Protection Conference， Nitra： 1997， 343-344.
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[8] Benhamou N， Belan ger R R， Rey P， et al. Oligandrin， the elicitin-like protein produced by the mycoparasite Pythium oligandrum， induces systemic resistance to Fumrium crown and root rot in tomato plants[J]. Plant Physiology and Biochemistry， 2001， 39： 681-698.
