不同因素对蓝莓茎段组织培养的影响
李华娟 韦海 陆素君
摘要：以蓝莓茎段为外植体，研究不同的外值体类型、基本培养基、激素组合对蓝莓启动阶段、增殖阶段、生根阶段产生的影响。结果表明：最容易萌发的外植体类型为幼嫩枝，萌芽率可达853%，增殖培养基以WPM+ ZT10 mg/L+6BA05 mg/L+NAA03 mg/L最佳，生根诱导培养基则以1/2WPM+NAA10 mg/L+活性碳10 g/L为最好，生根率可达95%以上。
关键词：蓝莓 茎段增殖生根
中图分类号：S7939文献标识码：A文章编号：1004-3020（2017）03-0021-03
Abstract： Effects of the combination of explant types， basal medium and hormone on the bourgeoning， proliferation and rooting of blueberry were studied with the stems as the explants. Results showed that the best explants were tender branches on budding， with the budding rate reached 85.3%. Medium of “WPM+ZT1.0mg/L+6BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L” was the best on bud proliferation while medium of “1/2WPM+NAA1.0mg/L+ activated carbon 1.0g/L” was the most excellent on rooting， which made the rooting rate above to 95%.
Key words：blueberry stem；segments；proliferation； take root
蓝莓也称笃斯越橘，屬落叶小灌木，蓝莓果实风味独特，营养丰富[1]，其保健包括增强视力、防止眼睛疲劳、防止脑神经老化、抗癌、软化血管、增强人体免疫力等功效，被誉为“世界第三代水果之王”，具有较高的经济价值和广阔的开发前景[2-4]。面对日益扩张的市场需求，以扦插为主的育苗技术显然满足不了市场需求。因此，通过组织培养的方式进行继代增殖，进而短期内获得大量的生根试管苗，满足市场的需求。
1材料与方法
1.1材料
供试材料品种为蓝莓中的“粉蓝”品系，由博白县沙河蓝莓种植基地提供。
1.2方法
1.2.1外植体取材与消毒
选择生长健壮、无病虫害、当年生枝条为试验材料，去除叶片后剪取2～25 cm长带腋芽茎段，用自来水冲洗干净，再用纯净水清洗三遍，随后在超净工作台上灭菌，使用75%的酒精消毒15～20 s左右，再用无菌水清洗三遍，最后用0.1%的升汞溶液浸泡3～10 min[5]，（视材料木质化程度而定）无菌水冲洗4～5遍。接种于MS+6BA0.5 mg/L+NAA0.1 mg/L培养基上。15天后统计无菌材料与萌芽率，试验安排见表1。
1.2.2芽的增殖
以N6、WPM、MS为基本培养基，附加不同浓度的ZT、6BA， NAA，采用正交表（L934）[6]对不同组合处理，3次重复，每处理接种10瓶，每瓶1个茎段，每5天观察一次，20天后记录芽的增殖情况、长势等。试验安排见表2。
1.2.3试管苗生根
以1/2WPM为基本培养基，采用正交表（L934）附加不同浓度的IBA、NAA、AC，三次重复，每处理接种5瓶，每瓶接种10株长约3 cm左右生长健壮的芽条。每10天观察一次，50天后记录苗的生根情况、苗的长势等。
1.3其他培养条件
N6、MS培养基中蔗糖30 g/L，琼脂粉55 g/L，pH60；WPM培养基中蔗糖20 g/L，琼脂粉60g/L，pH55，培养温度均为（25±1）℃， 诱导增殖阶段弱光培养，光强度约800 lx，生根阶段光强度为1 000～1 500 lx （生根初期 1000 lx）。
2结果分析
2.1不同木质化程度的茎段在不同的消毒时间对无菌率及萌芽率的影响
不同的处理结果见表4，由表中结果可知，随着枝条的木质化程度越高，即使消毒时间有所增加，污染率也很高，而萌芽率也是随着苗木木质化程度越高而降低。因此，最佳用来诱导的枝条是幼嫩枝，消毒时间为3 min，萌芽率可达853%。
2.2基本培养基与激素配比对蓝莓芽增殖的影响
由表5可知，不同处理之间的蓝莓芽增殖系数、芽高、及生长状况等相差较大，在不添加有任何激素的培养基里而衡量芽增殖效果最直接的指标就是增殖系数，因此对增殖系数进行方差与极差分析，结果表明，不同培养基类型、ZT对蓝莓的增殖影响达到极显著水平，而6BA、NAA对增殖影响不显著，说明影响蓝莓芽增殖主导因子是基本培养基与ZT。从k值大小来看，培养基以WPM、ZT10 mg/L、6BA05 mg/L、NAA03 mg/L为理想的理论组合，从实际试验结果来看，处理9即WPM+ ZT10 mg/L+6BA05 mg/L也适合作增殖培养基。
2.3不同因素对蓝莓生根诱导的影响
由表7可知，不同处理间生根率、根长、侧根情况相差较大，对不同因子间的生根率进行方差分析，结果表明，活性碳的添加对蓝莓生根产生极显著影响，是决定着试管苗生根与否的关键，NAA、IBA对生根影响不显著。从k值以及根长以及侧根情况来看，活性碳10g/L，NAA05 mg/L与10 mg/L效果一样，因此最佳的蓝莓生根诱导处理为1/2WPM+NAA05mg/L+活性碳10 g/L或者1/2WPM+NAA10 mg/L+活性碳10 g/L，而在处理3上恰好反映了这一点，并且综合生根率、根长、侧根情况来看，该组合均是最好的。
3结论与讨论
（1）试验结果表明，适合蓝莓诱导的茎段为顶芽幼嫩部位，易消毒易萌发。
（2）在蓝莓继代增殖中， WPM+ZT10 mg/L+6BA05 mg/L+NAA03 mg/L及WPM+ ZT05 mg/L+NAA03 mg/L均适合作为增殖培养基。而需要注意的是高浓度的6BA易产生大量的愈伤组织，无法分化成有效芽。
（3）生根培养中，活性炭的添加是诱导生根成败的关键，在没有活性炭的培养基里，无论是何种激素都无法诱导出有效根系，仅在切口基部形成极短如根毛状，杂乱无序的无效根，无法移栽成活。因此，最适合生根的培养基配方为1/2WPM+NAA05 mg/L+活性碳10 g/L或者1/2WPM+NAA10 mg/L+活性碳10 g/L，生根率可达到95%以上。
参考文献
[1]王小菁，陈刚，李明军，等.植物生长调节剂在植物组织培养中的应用[M].北京：化学工业出版社，2010.102153.
[2]王嘉祥.蓝桨果优良品种及栽培技术 [J].中国南方果树，2005，34（4）：58.
[3]李亚东，吴林，刘洪单，等.越橘果实中营养成分分析[J].北方园艺，2004（3）：2223.
[4]王连润，吴忠荣，李坤明，等.蓝莓试管苗移栽及苗期管理技术[J].云南农业科技，2009（5）：48.
[5]邱运亮，段鹏慧，赵华.植物组培快繁技术.北京[M]：化学工业出版社，2010.37.
[6]北京林业大学.数理统计.北京[M].北京：中国林业出版社.1980：296299.
（责任编辑：夏剑萍）
摘要：以蓝莓茎段为外植体，研究不同的外值体类型、基本培养基、激素组合对蓝莓启动阶段、增殖阶段、生根阶段产生的影响。结果表明：最容易萌发的外植体类型为幼嫩枝，萌芽率可达853%，增殖培养基以WPM+ ZT10 mg/L+6BA05 mg/L+NAA03 mg/L最佳，生根诱导培养基则以1/2WPM+NAA10 mg/L+活性碳10 g/L为最好，生根率可达95%以上。
关键词：蓝莓 茎段增殖生根
中图分类号：S7939文献标识码：A文章编号：1004-3020（2017）03-0021-03
Abstract： Effects of the combination of explant types， basal medium and hormone on the bourgeoning， proliferation and rooting of blueberry were studied with the stems as the explants. Results showed that the best explants were tender branches on budding， with the budding rate reached 85.3%. Medium of “WPM+ZT1.0mg/L+6BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L” was the best on bud proliferation while medium of “1/2WPM+NAA1.0mg/L+ activated carbon 1.0g/L” was the most excellent on rooting， which made the rooting rate above to 95%.
Key words：blueberry stem；segments；proliferation； take root
蓝莓也称笃斯越橘，屬落叶小灌木，蓝莓果实风味独特，营养丰富[1]，其保健包括增强视力、防止眼睛疲劳、防止脑神经老化、抗癌、软化血管、增强人体免疫力等功效，被誉为“世界第三代水果之王”，具有较高的经济价值和广阔的开发前景[2-4]。面对日益扩张的市场需求，以扦插为主的育苗技术显然满足不了市场需求。因此，通过组织培养的方式进行继代增殖，进而短期内获得大量的生根试管苗，满足市场的需求。
1材料与方法
1.1材料
供试材料品种为蓝莓中的“粉蓝”品系，由博白县沙河蓝莓种植基地提供。
1.2方法
1.2.1外植体取材与消毒
选择生长健壮、无病虫害、当年生枝条为试验材料，去除叶片后剪取2～25 cm长带腋芽茎段，用自来水冲洗干净，再用纯净水清洗三遍，随后在超净工作台上灭菌，使用75%的酒精消毒15～20 s左右，再用无菌水清洗三遍，最后用0.1%的升汞溶液浸泡3～10 min[5]，（视材料木质化程度而定）无菌水冲洗4～5遍。接种于MS+6BA0.5 mg/L+NAA0.1 mg/L培养基上。15天后统计无菌材料与萌芽率，试验安排见表1。
1.2.2芽的增殖
以N6、WPM、MS为基本培养基，附加不同浓度的ZT、6BA， NAA，采用正交表（L934）[6]对不同组合处理，3次重复，每处理接种10瓶，每瓶1个茎段，每5天观察一次，20天后记录芽的增殖情况、长势等。试验安排见表2。
1.2.3试管苗生根
以1/2WPM为基本培养基，采用正交表（L934）附加不同浓度的IBA、NAA、AC，三次重复，每处理接种5瓶，每瓶接种10株长约3 cm左右生长健壮的芽条。每10天观察一次，50天后记录苗的生根情况、苗的长势等。
1.3其他培养条件
N6、MS培养基中蔗糖30 g/L，琼脂粉55 g/L，pH60；WPM培养基中蔗糖20 g/L，琼脂粉60g/L，pH55，培养温度均为（25±1）℃， 诱导增殖阶段弱光培养，光强度约800 lx，生根阶段光强度为1 000～1 500 lx （生根初期 1000 lx）。
2结果分析
2.1不同木质化程度的茎段在不同的消毒时间对无菌率及萌芽率的影响
不同的处理结果见表4，由表中结果可知，随着枝条的木质化程度越高，即使消毒时间有所增加，污染率也很高，而萌芽率也是随着苗木木质化程度越高而降低。因此，最佳用来诱导的枝条是幼嫩枝，消毒时间为3 min，萌芽率可达853%。
2.2基本培养基与激素配比对蓝莓芽增殖的影响
由表5可知，不同处理之间的蓝莓芽增殖系数、芽高、及生长状况等相差较大，在不添加有任何激素的培养基里而衡量芽增殖效果最直接的指标就是增殖系数，因此对增殖系数进行方差与极差分析，结果表明，不同培养基类型、ZT对蓝莓的增殖影响达到极显著水平，而6BA、NAA对增殖影响不显著，说明影响蓝莓芽增殖主导因子是基本培养基与ZT。从k值大小来看，培养基以WPM、ZT10 mg/L、6BA05 mg/L、NAA03 mg/L为理想的理论组合，从实际试验结果来看，处理9即WPM+ ZT10 mg/L+6BA05 mg/L也适合作增殖培养基。
2.3不同因素对蓝莓生根诱导的影响
由表7可知，不同处理间生根率、根长、侧根情况相差较大，对不同因子间的生根率进行方差分析，结果表明，活性碳的添加对蓝莓生根产生极显著影响，是决定着试管苗生根与否的关键，NAA、IBA对生根影响不显著。从k值以及根长以及侧根情况来看，活性碳10g/L，NAA05 mg/L与10 mg/L效果一样，因此最佳的蓝莓生根诱导处理为1/2WPM+NAA05mg/L+活性碳10 g/L或者1/2WPM+NAA10 mg/L+活性碳10 g/L，而在处理3上恰好反映了这一点，并且综合生根率、根长、侧根情况来看，该组合均是最好的。
3结论与讨论
（1）试验结果表明，适合蓝莓诱导的茎段为顶芽幼嫩部位，易消毒易萌发。
（2）在蓝莓继代增殖中， WPM+ZT10 mg/L+6BA05 mg/L+NAA03 mg/L及WPM+ ZT05 mg/L+NAA03 mg/L均适合作为增殖培养基。而需要注意的是高浓度的6BA易产生大量的愈伤组织，无法分化成有效芽。
（3）生根培养中，活性炭的添加是诱导生根成败的关键，在没有活性炭的培养基里，无论是何种激素都无法诱导出有效根系，仅在切口基部形成极短如根毛状，杂乱无序的无效根，无法移栽成活。因此，最适合生根的培养基配方为1/2WPM+NAA05 mg/L+活性碳10 g/L或者1/2WPM+NAA10 mg/L+活性碳10 g/L，生根率可达到95%以上。
参考文献
[1]王小菁，陈刚，李明军，等.植物生长调节剂在植物组织培养中的应用[M].北京：化学工业出版社，2010.102153.
[2]王嘉祥.蓝桨果优良品种及栽培技术 [J].中国南方果树，2005，34（4）：58.
[3]李亚东，吴林，刘洪单，等.越橘果实中营养成分分析[J].北方园艺，2004（3）：2223.
[4]王连润，吴忠荣，李坤明，等.蓝莓试管苗移栽及苗期管理技术[J].云南农业科技，2009（5）：48.
[5]邱运亮，段鹏慧，赵华.植物组培快繁技术.北京[M]：化学工业出版社，2010.37.
[6]北京林业大学.数理统计.北京[M].北京：中国林业出版社.1980：296299.
（责任编辑：夏剑萍）
