孔雀石绿在不同品种鱼中残留量的研究与分析
郭楠
DOI:10.3969/j.issn.1004-6755.2014.05.009
摘 要：渔药残留超标是水产品质量安全控制的热点和难点问题，渔药残留的评估是进行水产品质量监管的重要依据。孔雀石绿作为水产品养殖中禁用的药物，具有高毒素、高残留和致癌、致突变等副作用，残留在水产品中的孔雀石绿进入人体，可引起各系统部分功能的损害。为了解辽宁省水产品中鱼类的孔雀石绿的残留状况，采用国家标准GB/T 20361-2006对辽宁省8个城市四个品种鱼类的孔雀石绿的残留量进行了检测分析，并对水产品中孔雀石绿残留控制提出了建议。
关键词：渔药；孔雀石绿；残留量；水产品；检测
渔药是指专门用于渔业方面为确保水生动、植物机体健康成长的药物。渔药残留是指在水生动、植物养殖过程中，为防病、治病而使用的药物在生物体内产生积累或代谢不完全而残留的药物[1]。孔雀石绿(C23H25CN2)又名碱性绿，极易溶于水，水溶液呈蓝绿色，由于具有杀菌作用，曾被作为消毒剂普遍用于水产养殖业[2]。我国农业行业标准《无公害食品渔用药物使用准则》(NY 5071-2002)中已将孔雀石绿列为禁用药物。但由于孔雀石绿抗菌效果较好，价格低廉，在水产养殖业中仍有应用，因此对孔雀石绿进行监控就显得格外重要[3]。为全面掌握辽宁省水产品的质量状况，对不同种类水产品中孔雀石绿的残留量进行了将近四年的监测分析，以保障居民身体健康和食品安全，为省政府对渔药的监管和使用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 样品来源
2010年-2013年，辽宁省内主要检测地区包括沈阳、辽阳、铁岭、本溪、锦州、朝阳、营口、阜新8个城市，包括鲫鱼、草鱼、鲤鱼、鲢鱼4个品种，累计检测样品数量707个。
抽检对象包括无公害水产品养殖基地、标准化养殖示范场和小型普通养殖场。抽样方式是在不同的养殖池内随机抽取，每个养殖场抽样数量不得超过2个。样品当场封样、编号、冰镇，并送到检测实验室进行检测。
1.2 仪器和试剂
1100型高效液相色谱仪，美国安捷伦科技公司；T10型均浆机，德国 IKA；TDL-40B型低速离心机，上海飞鸽；LAB-DNACER型旋涡混合器，德国 IKA；N-100IS-WD型旋转蒸发仪，上海艾朗；CP323S型电子天平，德赛多利斯；KQ-5200DE型超声波清洗器，昆山；固相萃取装置：酸性氧化铝固相萃取柱(500 mg，3 mL)和Varian PRS柱(500 mg，3 mL)，使用前均用5 mL 乙腈活化。
标准品孔雀石绿( MG，纯度大于98%，Sigma-Aldrich公司)；乙腈、二氯甲烷为液相色谱纯；二甘醇、硼氢化钾、盐酸羟胺、对-甲苯磺酸、无水乙酸铵、冰乙酸、氨水、酸性氧化铝(粒度0071~0.150 mm)均为分析纯；实验用水均符合GB/T 6682一级水的标准，所有试剂均购于国药集团化学试剂沈阳公司。
1.3 溶液配制
标准贮备液(100 μg/ mL)：准确称取孔雀石绿标准品10.00 mg，用乙腈溶解于100 mL容量瓶中，放置于4 ℃冰箱中保存(临用现配)；中间标准使用液(100 ng/ mL)：准确量取标准贮备液01 mL，用乙腈溶解于100 mL容量瓶中，放置于4 ℃冰箱中保存(临用现配)；标准工作使用液：分别准确量取标准中间使用液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，置于10 mL容量瓶中，用乙腈定容至10 mL(临用现配)。
硼氢化钾溶液：准确称取1.08 g硼氢化钾，加100 mL水溶解，现用现配； 20%盐酸羟胺溶液：溶解25.0 g盐酸羟胺于100 mL水中；对-甲苯磺酸溶液：准确称取1.90 g对-甲苯磺酸，用水稀释至200 mL；乙酸铵缓冲溶液：准确称取9645 g无水乙酸铵溶解于1 000 mL水中，冰乙酸调pH到4.5。洗脱液：乙酸乙酯：甲醇：氨水=10:9:1。
1.4 样品制备、提取和净化
完整鱼去鳞、去皮，取肌肉部分，切成小块用绞肉机匀质混合。准确称取肉糜状样品5.000 g于50 mL离心管中，加入10 mL乙腈，用匀质机1 200 r/min匀浆提取30 s，加入5 g酸性氧化铝，匀浆30 s，刀头分别用三个装10 mL乙腈的离心管清洗刀头，装肉样的离心管用离心机4 000 r/min离心10 min，上清液转移至250 mL分液漏斗中，加入2 mL二甘醇，3 mL硼氢化钾溶液，在分液漏斗萃取仪上萃取振荡4 min。
洗刀头的第一个离心管中的10 mL乙腈加入离心后含肉样的离心管中，盖好离心管盖子，把离心管放在涡旋混匀器上振荡1 min，静置20 min，在离心机里以4 000 r/min离心10 min，上清液合并加入250 mL分液漏斗中。
在含肉样的50 mL离心管中依次加入1.5 mL盐酸羟胺溶液、2.5 mL对-甲苯磺酸溶液、5.0 mL乙酸铵缓冲溶液，每加入一种溶液要与肉样充分混匀。振荡摇匀2 min，再加入第二管洗刀头的10 mL乙腈，继续振荡摇匀2 min，4 000 r/min离心10 min，离心后的上清液合并加入250 mL分液漏斗中，重复操作上述步骤一次。
在分液漏斗中加入25 mL二氯甲烷，盖紧分液漏斗塞轻轻振摇几下，放气，在分液漏斗萃取仪上剧烈振摇4 min，隔夜静置分层，将下层有机相转移至100 mL茄形瓶中，继续在分液漏斗中加入5 mL乙腈、10 mL二氯甲烷，分液漏斗萃取仪上剧烈振摇2 min，把全部溶液转移至50 mL离心管，2 500 r/min离心10 min，下层溶液合并至100 mL茄形瓶，45 ℃旋转蒸发至近干，用乙腈溶解残渣3次，每次2 mL。
将安捷伦的酸性氧化铝固相萃取柱安装在PRS小柱上，PRS小柱下端安装在固相萃取装置上，用5 mL乙腈活化小柱。用乙腈2 mL洗茄形瓶溶解残渣，提取液转移到小柱上，每次2 mL，清洗三次，依次过柱。最后一次吹酸性氧化铝柱近干，弃去。加入2 mL乙腈洗PRS柱子，洗三次，吹PRS小柱近干，在自然状态下加入3 mL乙酸乙酯、甲醇和氨水（10:9:1）的混合溶液，收集洗脱液，用乙腈定容至3 mL，上机用液相色谱测定。
1.5 色谱条件及参数
色谱条件及参数设置同《GB/T20361-2006水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定高效液相色谱荧光检测法》[4-6]，采用安捷伦高效液相色谱仪1100的荧光检测器对上述抽检鱼类样品进行检测。
1.6 统计分析
采用Excel 2003软件进行数据统计分析，作图和误差分析。
2 检测结果分析
图1所示为2010-2013年在辽宁省8个城市抽取的鲤鱼、鲫鱼、草鱼和鲢鱼的抽样总数量的比例示意图。其中抽取鲤鱼样品总共210个，鲫鱼138个，草鱼221个，鲢鱼138个。
图1 2010年-2013年抽检鱼类所占比例
如图2所示为2010-2013年在每个城市抽取的鲤鱼、鲫鱼、草鱼和鲢鱼的各自所占的数量比。其中本溪鲢鱼抽样数量为0，是由于地区养殖品种所限制的原因。
图2 2010年-2013年不同城市抽检不同种类鱼的比例
如图3所示2010-2013年抽取的鲤鱼、鲫鱼、草鱼和鲢鱼所占的比例。
图3 2010年-2013年不同品种鱼的抽样数量
经过四年对辽宁省8个地区鲤鱼、鲫鱼、草鱼和鲢鱼的孔雀石绿残留量的检测分析，检测结果均未超过方法检出限0.5 μg/kg，检测结果均未检出，全部合格。
3 结语
农业部及辽宁省政府高度重视水产品质量安全，连续多年开展水产品质量安全专项整治和抽查工作，不断强化监管工作，虽然我省水产品质量逐年有新的提高，但仍存在一定的安全隐患，违禁药物违法使用问题屡禁不止，应引起各级渔业行政主管部门的高度重视。辽宁省水产品质量安全检验检测局连续四年通过农业部能力验证考试，应用高效液相色谱仪检测孔雀石绿的检测技术水平成熟稳定，质控样品回收率均可达到85%～100%之间。检测技术水平稳定，检测结果可靠。
辽宁省内的养殖用户和水产品经销商逐渐认识到孔雀石绿的危害性，并且能够严格按照国家相关的规定进行规范化养殖，及时填写养殖日志，能够做出科学性选择和规范性用药。
孔雀石绿被广泛用于水产品运输过程中，主要作用是防止水产品在运输过程中感染疾病，以免造成严重的经济损失。然而，水产品中孔雀石绿的残留通常是由于养殖用水中使用孔雀石绿，从而导致其进入机体内。水产品体表是孔雀石绿的主要残留部位，因此被检测样品的取材部位是鱼背部的肌肉组织。
水产养殖环境不断恶化的趋势不是养殖业者能够掌控的，所以面对水产养殖动物疾病的发生，养殖业者采用药物治疗的措施而减少经济损失也是无可厚非的，但是选择使用科学、合理、安全的药物是优质水产品的重要保障。
我国对渔药药学基础理论的研究还很薄弱，大部分渔药都是直接从兽药、农药和化工产品转接过来的，几乎没有专业水产养殖疾病防治的药物，正是由于这些限制因素使养殖业者难以做到规范用药。因此，加强这方面的研究是渔药安全使用的基础，应该请有关部门的专家学者了解相关环境因素和致病菌等，尽快研制出水产养殖行业的专用药。
参考文献：
[1] 李兆新, 冷凯良, 李健, 等. 我国渔药质量状况及水产品中渔药残留监控[J]. 海洋水产研究, 2001, 22(2): 76-77
[2] 张晓辉, 孔蕾, 滕鸿云, 等. 养殖水体中孔雀石绿的快速检测技术[J]. 水利渔业, 2006, 26(6): 101-102
[3] 张莉, 文红, 王红. 高效液相色谱法测定鱼类产品中孔雀石绿及无色孔雀石绿的残留[J]. 中国卫生检验杂志, 2005, 15(12): 1483-1485
[4] GB/T 19857-2005. 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定[S].北京：中国标准出版社，2005
[5] GB/T 20361-2006. 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定高效液相色谱荧光检测法[S].北京：中国标准出版社，2006
[6] 郭德华, 叶长淋, 李波, 等. 高效液相色谱-质谱法测定水产品中孔雀石绿及其代谢物[J]. 分析测试学报, 2004, 23(S1): 206-208
（收稿日期：2014-03-31；修回日期：2014-04-08）
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图2 2010年-2013年不同城市抽检不同种类鱼的比例
如图3所示2010-2013年抽取的鲤鱼、鲫鱼、草鱼和鲢鱼所占的比例。
图3 2010年-2013年不同品种鱼的抽样数量
经过四年对辽宁省8个地区鲤鱼、鲫鱼、草鱼和鲢鱼的孔雀石绿残留量的检测分析，检测结果均未超过方法检出限0.5 μg/kg，检测结果均未检出，全部合格。
3 结语
农业部及辽宁省政府高度重视水产品质量安全，连续多年开展水产品质量安全专项整治和抽查工作，不断强化监管工作，虽然我省水产品质量逐年有新的提高，但仍存在一定的安全隐患，违禁药物违法使用问题屡禁不止，应引起各级渔业行政主管部门的高度重视。辽宁省水产品质量安全检验检测局连续四年通过农业部能力验证考试，应用高效液相色谱仪检测孔雀石绿的检测技术水平成熟稳定，质控样品回收率均可达到85%～100%之间。检测技术水平稳定，检测结果可靠。
辽宁省内的养殖用户和水产品经销商逐渐认识到孔雀石绿的危害性，并且能够严格按照国家相关的规定进行规范化养殖，及时填写养殖日志，能够做出科学性选择和规范性用药。
孔雀石绿被广泛用于水产品运输过程中，主要作用是防止水产品在运输过程中感染疾病，以免造成严重的经济损失。然而，水产品中孔雀石绿的残留通常是由于养殖用水中使用孔雀石绿，从而导致其进入机体内。水产品体表是孔雀石绿的主要残留部位，因此被检测样品的取材部位是鱼背部的肌肉组织。
水产养殖环境不断恶化的趋势不是养殖业者能够掌控的，所以面对水产养殖动物疾病的发生，养殖业者采用药物治疗的措施而减少经济损失也是无可厚非的，但是选择使用科学、合理、安全的药物是优质水产品的重要保障。
我国对渔药药学基础理论的研究还很薄弱，大部分渔药都是直接从兽药、农药和化工产品转接过来的，几乎没有专业水产养殖疾病防治的药物，正是由于这些限制因素使养殖业者难以做到规范用药。因此，加强这方面的研究是渔药安全使用的基础，应该请有关部门的专家学者了解相关环境因素和致病菌等，尽快研制出水产养殖行业的专用药。
参考文献：
[1] 李兆新, 冷凯良, 李健, 等. 我国渔药质量状况及水产品中渔药残留监控[J]. 海洋水产研究, 2001, 22(2): 76-77
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[5] GB/T 20361-2006. 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定高效液相色谱荧光检测法[S].北京：中国标准出版社，2006
[6] 郭德华, 叶长淋, 李波, 等. 高效液相色谱-质谱法测定水产品中孔雀石绿及其代谢物[J]. 分析测试学报, 2004, 23(S1): 206-208
（收稿日期：2014-03-31；修回日期：2014-04-08）
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图2 2010年-2013年不同城市抽检不同种类鱼的比例
如图3所示2010-2013年抽取的鲤鱼、鲫鱼、草鱼和鲢鱼所占的比例。
图3 2010年-2013年不同品种鱼的抽样数量
经过四年对辽宁省8个地区鲤鱼、鲫鱼、草鱼和鲢鱼的孔雀石绿残留量的检测分析，检测结果均未超过方法检出限0.5 μg/kg，检测结果均未检出，全部合格。
3 结语
农业部及辽宁省政府高度重视水产品质量安全，连续多年开展水产品质量安全专项整治和抽查工作，不断强化监管工作，虽然我省水产品质量逐年有新的提高，但仍存在一定的安全隐患，违禁药物违法使用问题屡禁不止，应引起各级渔业行政主管部门的高度重视。辽宁省水产品质量安全检验检测局连续四年通过农业部能力验证考试，应用高效液相色谱仪检测孔雀石绿的检测技术水平成熟稳定，质控样品回收率均可达到85%～100%之间。检测技术水平稳定，检测结果可靠。
辽宁省内的养殖用户和水产品经销商逐渐认识到孔雀石绿的危害性，并且能够严格按照国家相关的规定进行规范化养殖，及时填写养殖日志，能够做出科学性选择和规范性用药。
孔雀石绿被广泛用于水产品运输过程中，主要作用是防止水产品在运输过程中感染疾病，以免造成严重的经济损失。然而，水产品中孔雀石绿的残留通常是由于养殖用水中使用孔雀石绿，从而导致其进入机体内。水产品体表是孔雀石绿的主要残留部位，因此被检测样品的取材部位是鱼背部的肌肉组织。
水产养殖环境不断恶化的趋势不是养殖业者能够掌控的，所以面对水产养殖动物疾病的发生，养殖业者采用药物治疗的措施而减少经济损失也是无可厚非的，但是选择使用科学、合理、安全的药物是优质水产品的重要保障。
我国对渔药药学基础理论的研究还很薄弱，大部分渔药都是直接从兽药、农药和化工产品转接过来的，几乎没有专业水产养殖疾病防治的药物，正是由于这些限制因素使养殖业者难以做到规范用药。因此，加强这方面的研究是渔药安全使用的基础，应该请有关部门的专家学者了解相关环境因素和致病菌等，尽快研制出水产养殖行业的专用药。
参考文献：
[1] 李兆新, 冷凯良, 李健, 等. 我国渔药质量状况及水产品中渔药残留监控[J]. 海洋水产研究, 2001, 22(2): 76-77
[2] 张晓辉, 孔蕾, 滕鸿云, 等. 养殖水体中孔雀石绿的快速检测技术[J]. 水利渔业, 2006, 26(6): 101-102
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[5] GB/T 20361-2006. 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定高效液相色谱荧光检测法[S].北京：中国标准出版社，2006
[6] 郭德华, 叶长淋, 李波, 等. 高效液相色谱-质谱法测定水产品中孔雀石绿及其代谢物[J]. 分析测试学报, 2004, 23(S1): 206-208
（收稿日期：2014-03-31；修回日期：2014-04-08）
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