二嗪农溶液含量测定方法探讨

    陈向丹 王峻 万珊 董书香 丁阳

    摘要：建立了二嗪农溶液中二嗪农含量的反相HPLC测定方法。采用C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），检测波长225 nm，流动相为甲醇-水（75∶25），流速1.0 mL/min。结果显示，二嗪农在0.2～4.0 mg/mL范围内，含量与峰面积呈良好的线性关系，相关系数为0.999 9（n=6），平均回收率100.5%，RSD为0.9%。该方法简便、准确、快速、重现性好，可用于该制剂的含量测定。

    关键词：二嗪农溶液;反相HPLC法;含量测定

    中图分类号：O657.7+2? ? ? ? 文献标识码：A? ? ? ? 文章编号：1007-273X（2018）11-0008-02

    二嗪农又名二嗪磷，英文通用名Dimpylate，化学名称为O，O一二乙基一O一（2一异丙基一4一甲基嘧啶基一6）硫代磷酸醇，是一种广谱、高效有机磷杀螨剂。二嗪农具有触杀、胃毒、熏蒸和一定的内吸作用，有较强的杀螨活性，是世界上大吨位有机磷农药品种之一[1]。兽用二嗪农溶液用于触杀家禽的体表寄生虫蜱、螨、虱，其含量测定方法为气相色谱法[2-3]。而气相色谱会使某些如不稳定性有机磷农药产生热分解，因而需要把有机磷衍生化，增加了分析过程的复杂性;高效液相色谱法检测有机磷以其直接、快速、高效、简便和适用范围广等优点而得到迅速发展[4]。同时由于气相色谱法测定二嗪农溶液的含量方法需要使用大量对照品及内标物质，且部分企业缺少相关检验仪器及专业检验人员，给检验工作带来了诸多不利于控制的因素。为了更好地控制产品质量，本文探讨了反相高效液相法测定二嗪农溶液中二嗪农的含量测定方法。

    1? 材料与方法

    1.1? 仪器

    岛津20AD高效液相色谱仪配紫外检测器;Agilent Eclipse Plus C18色谱柱，4.6 mm×250 mm（i.d.），粒径5 μm;Mettler AE240 电子天平;MILIPORE超纯水处理器等。

    1.2? 試剂与材料

    二嗪农对照品含量为98.0%（批号为06087，购于上海某科技有限公司）;甲醇为色谱纯;水为二次纯化水;二嗪农原料、辅料，25%二嗪农溶液供试品（批号为170106，170107，170108）均由武汉某兽药公司提供。

    1.3? 试验方法

    1.3.1? 溶液的配制? 精密称取二嗪农对照品50 mg，置50 mL量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，滤过，作为对照品溶液。称取二嗪农供试品适量（约相当于二嗪农50 mg），置50 mL量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。

    1.3.2? 色谱条件? 色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂流动相：甲醇∶水（75∶25）流速：1.0 mL/min;检测波长：225 nm;进样量：10 μL。

    1.3.3? 线性试验? 精密称取二嗪农对照品500 mg，置50 mL量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，作为贮备液。分别精密量取贮备液适量，用甲醇分别稀释至二嗪农浓度为0.2、0.5、1.0、2.0、2.5、4.0 mg/mL的溶液，各取10 μL进样，记录色谱图，以浓度（C，mg/mL）为横坐标，峰面积（mV）为纵坐标，绘制标准曲线。

    1.3.4? 专属性试验? 在“1.3.2“色谱条件下，分别取供试品辅料空白溶液、对照品溶液以及供试品溶液注入液相色谱仪，考察其专属性。

    1.3.5? 回收率试验? 按处方比例配制25%的二嗪农溶液。分别精密称取40、50和60 mg的二嗪农原料及0.12、0.15、0.18 g的辅料置50 mL具塞容量瓶中，加甲醇至刻度，振摇使其溶解，滤过，按“1.3.2“色谱条件进行测定，按外标法计算二嗪农的含量，计算回收率。

    1.3.6? 精密度试验? 取对照品溶液（二嗪农500 μg/mL），按“1.3.2“色谱条件测定峰面积，连续进样6次，计算相对标准偏差RSD，考察精密度。

    1.3.7? 稳定性试验? 取对照品溶液（二嗪农500 μg/mL），按“1.3.2“色谱条件测定峰面积，在不同时间（0、2、4、6、8、10、12、24 h）分别进行测定，计算相对标准偏差RSD，考察对照品稳定性。

    2? 结果与分析

    2.1? 线性试验

    以浓度（C，mg/mL）为横坐标，峰面积（mV）为纵坐标进行线性回归（图1），得回归方程：Y=5×106X+89 331，r=0.999 9。可见在此色谱条件下二嗪农在0.2～4.0 mg/mL范围内线性良好。

    2.2? 专属性试验

    在“1.3.2“色谱条件下，色谱图中二嗪农与各杂峰分离效果好，含量测定不受其他杂质峰的干扰。具体见图2、图3、图4。

    2.3? 回收率试验

    加样回收率考察结果见表1。试验结果表明，二嗪农平均回收率为100.5%，RSD为0.9%，表明该法符合试验分析要求，准确度高。

    2.4? 精密度试验

    连续进样6次，测得二嗪农峰面积平均值为5 525 032 mV，RSD为0.1%。结果表明仪器精密度良好。

    2.5? 稳定性试验

    在不同时间（0、2、4、6、8、10、12、24 h）分别进行测定，测得二嗪农峰面积平均值为5 528 576，RSD为0.1%，结果表明对照品溶液在室温下24 h内性质稳定。

    2.6? 样品的测定

    分别取同一厂家不同批号的样品，采用“1.3.2”色谱条件进行测定，试验结果见表2。样品测定结果可以看出本法与气相色谱法测定的结果基本一致。

    3? 讨论

    二嗪农溶液分别在200～400 nm波长范围进行紫外扫描，结果发现，二嗪农在波长为（225±2） nm处有最大紫外吸收，分别选定了210、225和245 nm在相同试验条件下测定，结果显示在波长为225 nm时可以得到较好的峰形且基线稳定，故本文采用以上色谱条件测定二嗪农溶液的含量。

    4? 结论

    本法测定二嗪农溶液中主药的含量时，操作简单、快速，结果准确可靠，可作为该制剂的含量测定方法的参考。特别是在兽药企业的内部质量控制方面有一定的指导作用。

    参考文献：

    [1] 饶? 勇，曾振灵，刘涤洁，等.二嗪农在猪组织中的GC—NPD残留分析方法[J].中国兽医学报，2003，23（4）：385-387.

    [2] 中国兽药典委员会.兽药国家标准（化学药品、中药卷）第一册[S].

    [3] 中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典二○一五年版（一部）[S].

    [4] 宣秋江，周传光，徐恒振，等.高效液相色谱分离10种有机磷农药[J].分析试验室，2008，27（S1）：273-275.