夏枯草中总黄酮提取工艺的研究
李万林
摘 要：目的：研究夏枯草中总黄酮的最佳提取工艺。方法：通过正交试验采用醇提法从夏枯草中提取总黄酮。结果：夏枯草中总黄酮最佳提取方案是：提取时间为50min，乙醇浓度为70%，固液比为1：16。在最佳提取方案下夏枯草中总黄酮的含量为1.2682%。
关键词：夏枯草；总黄酮；提取工艺；正交试验
引言
夏枯草（Prunella vulgaris）为唇形科夏枯草属多年生草本植物，其性寒、味苦辛，具有清肝明目、消肿散结等功效，现代临床多用于治疗甲状腺肿大、淋巴结核、乳腺增生、高血压、肺结核、急性黄疸性传染性肝炎等疾病。黄酮类化合物广泛存在于植物体内，无不良反应，同时具有显著的清除人体内自由基、抗老化、抗突变、调血脂、血压等药理保健功能，是一类极具开发前景的天然抗氧化剂。
黄酮类化合物是指通过中央三碳链相互连接而成的一系列化合物的统称 ，包括黄酮、黄烷酮、双黄酮及其甙等化合物。黄酮类物质广泛存在于动物牧草饲料、一些中草药及我们日常食用的豆类、某些谷类、水果和蔬菜等植物性食物中。近年，对其功能研究表明：动物体内、外试验证明，黄酮类物质具有提高动物的免疫机能，促进动物的繁殖、生长等功能，且具有剂量小、见效快，毒性低等优点。因此，是一种具有广阔开发前景的新型饲料添加剂。
不仅如此，夏枯草在我国种植广泛，资源极其丰富，是人们十分喜爱的一种饮品。目前夏枯草的活性成分研究主要集中在多糖类成分，黄酮类成分的研究较少，本文以夏枯草中总黄酮为研究对象，考察了夏枯草中总黄酮的提取工艺，旨在为夏枯草中提取黄酮类物质以及在饲料领域中的综合开发应用提供理论参考。
1 实验
1.1 材料、试剂和仪器
1.1.1 材料与试剂
市购夏枯草，于60℃下烘干，粉碎后过60目筛，备用。芦丁标准品（>98%，上海源叶生物科技有限公司）；其余无水乙醇、无水三氯化铝、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠等均为分析纯。
1.1.2 仪器
722-E型紫外分光光度计（上海精密仪器科学有限公司）、GR-200型单盘电子分析天平（日本AND）、SHZ-3型水循环真空泵（河南巩义市杜甫仪器厂）、DOB20005型电热干燥箱（中国重庆银河试验仪器有限公司）、JJ-2型组织捣碎机（金坛市城西春兰实验仪器厂）等。
1.2 实验方法
1.2.1 总黄酮的提取工艺流程
夏枯草粉末→乙醇提取→提取液过滤→离心→上清液定容→测量吸光度→计算总黄酮含量
1.2.2 实验步骤
将10.0 g夏枯草粉末与一定体积浓度的乙醇（50%、65%、70%、75%、90%）按一定料液比例（m/mL，1：8、1：12、1：16、1：20、1：24）混合，在一定温度下（40℃、50℃、60℃、70℃、80℃）提取一定时间（20min、30min、40min、50min、60min）。
提取液真空抽滤，滤液用65%乙醇溶液定容至100mL容量瓶中。然后准确量取适量提取液于50mL容量瓶中，加5% NaNO2 1.5mL，摇匀，放置6分钟；加10% Al（NO3）3 1.5mL，摇匀，放置6分钟；加4% NaOH 20mL，加65%乙醇至刻度，摇匀，放置10分钟。最后用分光光度计在510nm波长下测定吸光度值，并计算总黄酮含量。
1.2.3 标准曲线制作
准确称取干燥至恒重的芦丁20.30mg，加适量75%乙醇，微热使之溶解。自然冷却后，置100mL量瓶中定容，得芦丁乙醇溶液。吸取芦丁乙醇溶液0.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL，分别置50mL量瓶中，加5% NaNO2 1.5mL，摇匀，放置6分钟，加10% Al（NO3）31.5mL，摇匀，放置6分钟，加4% NaOH 20mL再加75%乙醇至刻度，摇匀，放置13分钟。最后用分光光度计在最510nm波长下测定吸光度值。结果如表1所示：
对上表的数据做回归处理得回归方程：
A=7.3384C+0.2575 R2=0.9984
1.2.4 总黄酮含量的测定：
配取定量试液按照实验步骤绘制标准曲线，用分光光度计在510 nm处测定吸光度，按回归方程计算样品液中总黄酮的提取率（mg/g）。
2 实验结果与分析
2.1 单因素实验
2.1.1 固液比对夏枯草总黄酮含量的影响
在提取温度70℃和提取时间50min的条件下，用80%的乙醇按实验步骤分别处理固液比为1：8、1：12、1：16、1：20、1：24，结果如表2所示：
实验结果表明，随着固液比升高，总黄酮提取率呈上升趋势。当固液比大于1∶16之后，总黄酮提取率增加不大，综合考虑提取成本。固液比1∶16的提取效果较为适宜。随着料液比的增大，夏枯草中总黄酮提取率在增大，因为此时单位质量夏枯草周围的乙醇含量增大，传质速率提高，提取率变大；但是当料液比大于1∶16后，总黄酮的提取率趋缓，这是由于夏枯草中总黄酮已基本浸出，再增大料液比反而增加了生产成本，故料液比控制在1∶16为宜。
2.1.2 提取时间对夏枯草总黄酮提取率的影响
在提取温度70℃和固液比1∶16的条件下，用80%的乙醇按实验步骤分别处理时间为：20min、30min、40min、50min、60min，结果如表3所示：
实验结果表明，随着提取时间的延长，夏枯草中总黄酮提取率显著增大，当提取时间大于50min时，总黄酮提取率反而下降，这是由于夏枯草中总黄酮已基本浸出，再延长提取时间反而可能会使总黄酮分解，导致提取率的降低，出于实验的可操作性考虑，提取时间控制在50min为宜。
2.1.3 提取温度对夏枯草总黄酮提取率的影响
在提取时间50min和固液比1：16的条件下，用80%的乙醇按实验步骤分别处理时间为：40℃、50℃、60℃、70℃、80℃，结果如表4所示：
实验结果表明，在40℃～70℃之间随着温度的升高，总黄酮提取率随着增大，这是由于在较低的温度范围内，随着温度的升高，分子运动加快，细胞间的摩擦作用使得细胞破裂，夏枯草中总黄酮的溶解及扩散速度加快，故提取率显著提高；但当温度过高时，总黄酮会加速分解，使得提取率降低，故最佳提取温度为70℃。
2.1.4 乙醇浓度对夏枯草总黄酮提取率的影响
在提取时间为50min、提取温度为70℃和固液比为1：16的条件按实验步骤分别处理乙醇浓度为：50%、65%、70%、75%、90%，结果如表5所示：
实验结果表明，在乙醇体积分数为50%～70%之间，夏枯草中总黄酮的提取率随着乙醇浓度的升高而增大，在乙醇体积分数为70%时总黄酮的提取率最高，可能是因为夏枯草中总黄酮的极性更接近体积分数为70%的乙醇的极性；随着乙醇体积分数的进一步增大，总黄酮提取率反而降低，可能是由于一些杂质也溶于了乙醇，导致总黄酮浓度的进一步增大，故乙醇体积分数控制在70%为宜。
2.2 正交实验
根据单因素实验的结果，以影响夏枯草总黄酮提取率的提取时间（A）、乙醇浓度（B）、固液比（C）为三个实验因子，以夏枯草总黄酮提取率为目标，做三因素三水平正交设计，共计9个实验点，以确定夏枯草中总黄酮提取的最优工艺组合。确定每个因素的3个水平为：提取时间40min、50min、60min，乙醇浓度65%、70%、75%，固液比1：12、1：16、1：20，采用L9（33）正交表进行正交实验，实验设计及结果如表6和表7所示。
根据极差R值可知各因素对夏枯草中总黄酮提取得率的影响顺序为：B >C>A，即乙醇浓度对总黄酮提取得率影响最大，其次是固液比，影响最小的是提取时间。最终得出夏枯草中总黄酮的最佳提取条件是：A2B2C2，提取时间为 50min，乙醇浓度为70%，固液比为1：16。
3 结论
本实验应用乙醇溶剂热提取法提取夏枯草中的功能成分黄酮类化合物，通过正交实验以提取时间、提取温度、乙醇浓度、固液比四方面的单因素实验对影响总黄酮提取得率的因素进行了研究，实验结果表明，以乙醇为溶剂来提取夏枯草中的黄酮类化合物时，最佳的工艺条件为：以体积分数为70%的乙醇、提取时间50min、固液比为1：16，按照正交试验的最佳工艺条件进行验证试验，平行试验3次，取其平均值，得在最佳提取条件下总黄酮提取率的平均值为1.2682%。
参考文献（略）
2.1.3 提取温度对夏枯草总黄酮提取率的影响
在提取时间50min和固液比1：16的条件下，用80%的乙醇按实验步骤分别处理时间为：40℃、50℃、60℃、70℃、80℃，结果如表4所示：
实验结果表明，在40℃～70℃之间随着温度的升高，总黄酮提取率随着增大，这是由于在较低的温度范围内，随着温度的升高，分子运动加快，细胞间的摩擦作用使得细胞破裂，夏枯草中总黄酮的溶解及扩散速度加快，故提取率显著提高；但当温度过高时，总黄酮会加速分解，使得提取率降低，故最佳提取温度为70℃。
2.1.4 乙醇浓度对夏枯草总黄酮提取率的影响
在提取时间为50min、提取温度为70℃和固液比为1：16的条件按实验步骤分别处理乙醇浓度为：50%、65%、70%、75%、90%，结果如表5所示：
实验结果表明，在乙醇体积分数为50%～70%之间，夏枯草中总黄酮的提取率随着乙醇浓度的升高而增大，在乙醇体积分数为70%时总黄酮的提取率最高，可能是因为夏枯草中总黄酮的极性更接近体积分数为70%的乙醇的极性；随着乙醇体积分数的进一步增大，总黄酮提取率反而降低，可能是由于一些杂质也溶于了乙醇，导致总黄酮浓度的进一步增大，故乙醇体积分数控制在70%为宜。
2.2 正交实验
根据单因素实验的结果，以影响夏枯草总黄酮提取率的提取时间（A）、乙醇浓度（B）、固液比（C）为三个实验因子，以夏枯草总黄酮提取率为目标，做三因素三水平正交设计，共计9个实验点，以确定夏枯草中总黄酮提取的最优工艺组合。确定每个因素的3个水平为：提取时间40min、50min、60min，乙醇浓度65%、70%、75%，固液比1：12、1：16、1：20，采用L9（33）正交表进行正交实验，实验设计及结果如表6和表7所示。
根据极差R值可知各因素对夏枯草中总黄酮提取得率的影响顺序为：B >C>A，即乙醇浓度对总黄酮提取得率影响最大，其次是固液比，影响最小的是提取时间。最终得出夏枯草中总黄酮的最佳提取条件是：A2B2C2，提取时间为 50min，乙醇浓度为70%，固液比为1：16。
3 结论
本实验应用乙醇溶剂热提取法提取夏枯草中的功能成分黄酮类化合物，通过正交实验以提取时间、提取温度、乙醇浓度、固液比四方面的单因素实验对影响总黄酮提取得率的因素进行了研究，实验结果表明，以乙醇为溶剂来提取夏枯草中的黄酮类化合物时，最佳的工艺条件为：以体积分数为70%的乙醇、提取时间50min、固液比为1：16，按照正交试验的最佳工艺条件进行验证试验，平行试验3次，取其平均值，得在最佳提取条件下总黄酮提取率的平均值为1.2682%。
参考文献（略）
2.1.3 提取温度对夏枯草总黄酮提取率的影响
在提取时间50min和固液比1：16的条件下，用80%的乙醇按实验步骤分别处理时间为：40℃、50℃、60℃、70℃、80℃，结果如表4所示：
实验结果表明，在40℃～70℃之间随着温度的升高，总黄酮提取率随着增大，这是由于在较低的温度范围内，随着温度的升高，分子运动加快，细胞间的摩擦作用使得细胞破裂，夏枯草中总黄酮的溶解及扩散速度加快，故提取率显著提高；但当温度过高时，总黄酮会加速分解，使得提取率降低，故最佳提取温度为70℃。
2.1.4 乙醇浓度对夏枯草总黄酮提取率的影响
在提取时间为50min、提取温度为70℃和固液比为1：16的条件按实验步骤分别处理乙醇浓度为：50%、65%、70%、75%、90%，结果如表5所示：
实验结果表明，在乙醇体积分数为50%～70%之间，夏枯草中总黄酮的提取率随着乙醇浓度的升高而增大，在乙醇体积分数为70%时总黄酮的提取率最高，可能是因为夏枯草中总黄酮的极性更接近体积分数为70%的乙醇的极性；随着乙醇体积分数的进一步增大，总黄酮提取率反而降低，可能是由于一些杂质也溶于了乙醇，导致总黄酮浓度的进一步增大，故乙醇体积分数控制在70%为宜。
2.2 正交实验
根据单因素实验的结果，以影响夏枯草总黄酮提取率的提取时间（A）、乙醇浓度（B）、固液比（C）为三个实验因子，以夏枯草总黄酮提取率为目标，做三因素三水平正交设计，共计9个实验点，以确定夏枯草中总黄酮提取的最优工艺组合。确定每个因素的3个水平为：提取时间40min、50min、60min，乙醇浓度65%、70%、75%，固液比1：12、1：16、1：20，采用L9（33）正交表进行正交实验，实验设计及结果如表6和表7所示。
根据极差R值可知各因素对夏枯草中总黄酮提取得率的影响顺序为：B >C>A，即乙醇浓度对总黄酮提取得率影响最大，其次是固液比，影响最小的是提取时间。最终得出夏枯草中总黄酮的最佳提取条件是：A2B2C2，提取时间为 50min，乙醇浓度为70%，固液比为1：16。
3 结论
本实验应用乙醇溶剂热提取法提取夏枯草中的功能成分黄酮类化合物，通过正交实验以提取时间、提取温度、乙醇浓度、固液比四方面的单因素实验对影响总黄酮提取得率的因素进行了研究，实验结果表明，以乙醇为溶剂来提取夏枯草中的黄酮类化合物时，最佳的工艺条件为：以体积分数为70%的乙醇、提取时间50min、固液比为1：16，按照正交试验的最佳工艺条件进行验证试验，平行试验3次，取其平均值，得在最佳提取条件下总黄酮提取率的平均值为1.2682%。
参考文献（略）
摘 要：目的：研究夏枯草中总黄酮的最佳提取工艺。方法：通过正交试验采用醇提法从夏枯草中提取总黄酮。结果：夏枯草中总黄酮最佳提取方案是：提取时间为50min，乙醇浓度为70%，固液比为1：16。在最佳提取方案下夏枯草中总黄酮的含量为1.2682%。
关键词：夏枯草；总黄酮；提取工艺；正交试验
引言
夏枯草（Prunella vulgaris）为唇形科夏枯草属多年生草本植物，其性寒、味苦辛，具有清肝明目、消肿散结等功效，现代临床多用于治疗甲状腺肿大、淋巴结核、乳腺增生、高血压、肺结核、急性黄疸性传染性肝炎等疾病。黄酮类化合物广泛存在于植物体内，无不良反应，同时具有显著的清除人体内自由基、抗老化、抗突变、调血脂、血压等药理保健功能，是一类极具开发前景的天然抗氧化剂。
黄酮类化合物是指通过中央三碳链相互连接而成的一系列化合物的统称 ，包括黄酮、黄烷酮、双黄酮及其甙等化合物。黄酮类物质广泛存在于动物牧草饲料、一些中草药及我们日常食用的豆类、某些谷类、水果和蔬菜等植物性食物中。近年，对其功能研究表明：动物体内、外试验证明，黄酮类物质具有提高动物的免疫机能，促进动物的繁殖、生长等功能，且具有剂量小、见效快，毒性低等优点。因此，是一种具有广阔开发前景的新型饲料添加剂。
不仅如此，夏枯草在我国种植广泛，资源极其丰富，是人们十分喜爱的一种饮品。目前夏枯草的活性成分研究主要集中在多糖类成分，黄酮类成分的研究较少，本文以夏枯草中总黄酮为研究对象，考察了夏枯草中总黄酮的提取工艺，旨在为夏枯草中提取黄酮类物质以及在饲料领域中的综合开发应用提供理论参考。
1 实验
1.1 材料、试剂和仪器
1.1.1 材料与试剂
市购夏枯草，于60℃下烘干，粉碎后过60目筛，备用。芦丁标准品（>98%，上海源叶生物科技有限公司）；其余无水乙醇、无水三氯化铝、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠等均为分析纯。
1.1.2 仪器
722-E型紫外分光光度计（上海精密仪器科学有限公司）、GR-200型单盘电子分析天平（日本AND）、SHZ-3型水循环真空泵（河南巩义市杜甫仪器厂）、DOB20005型电热干燥箱（中国重庆银河试验仪器有限公司）、JJ-2型组织捣碎机（金坛市城西春兰实验仪器厂）等。
1.2 实验方法
1.2.1 总黄酮的提取工艺流程
夏枯草粉末→乙醇提取→提取液过滤→离心→上清液定容→测量吸光度→计算总黄酮含量
1.2.2 实验步骤
将10.0 g夏枯草粉末与一定体积浓度的乙醇（50%、65%、70%、75%、90%）按一定料液比例（m/mL，1：8、1：12、1：16、1：20、1：24）混合，在一定温度下（40℃、50℃、60℃、70℃、80℃）提取一定时间（20min、30min、40min、50min、60min）。
提取液真空抽滤，滤液用65%乙醇溶液定容至100mL容量瓶中。然后准确量取适量提取液于50mL容量瓶中，加5% NaNO2 1.5mL，摇匀，放置6分钟；加10% Al（NO3）3 1.5mL，摇匀，放置6分钟；加4% NaOH 20mL，加65%乙醇至刻度，摇匀，放置10分钟。最后用分光光度计在510nm波长下测定吸光度值，并计算总黄酮含量。
1.2.3 标准曲线制作
准确称取干燥至恒重的芦丁20.30mg，加适量75%乙醇，微热使之溶解。自然冷却后，置100mL量瓶中定容，得芦丁乙醇溶液。吸取芦丁乙醇溶液0.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL，分别置50mL量瓶中，加5% NaNO2 1.5mL，摇匀，放置6分钟，加10% Al（NO3）31.5mL，摇匀，放置6分钟，加4% NaOH 20mL再加75%乙醇至刻度，摇匀，放置13分钟。最后用分光光度计在最510nm波长下测定吸光度值。结果如表1所示：
对上表的数据做回归处理得回归方程：
A=7.3384C+0.2575 R2=0.9984
1.2.4 总黄酮含量的测定：
配取定量试液按照实验步骤绘制标准曲线，用分光光度计在510 nm处测定吸光度，按回归方程计算样品液中总黄酮的提取率（mg/g）。
2 实验结果与分析
2.1 单因素实验
2.1.1 固液比对夏枯草总黄酮含量的影响
在提取温度70℃和提取时间50min的条件下，用80%的乙醇按实验步骤分别处理固液比为1：8、1：12、1：16、1：20、1：24，结果如表2所示：
实验结果表明，随着固液比升高，总黄酮提取率呈上升趋势。当固液比大于1∶16之后，总黄酮提取率增加不大，综合考虑提取成本。固液比1∶16的提取效果较为适宜。随着料液比的增大，夏枯草中总黄酮提取率在增大，因为此时单位质量夏枯草周围的乙醇含量增大，传质速率提高，提取率变大；但是当料液比大于1∶16后，总黄酮的提取率趋缓，这是由于夏枯草中总黄酮已基本浸出，再增大料液比反而增加了生产成本，故料液比控制在1∶16为宜。
2.1.2 提取时间对夏枯草总黄酮提取率的影响
在提取温度70℃和固液比1∶16的条件下，用80%的乙醇按实验步骤分别处理时间为：20min、30min、40min、50min、60min，结果如表3所示：
实验结果表明，随着提取时间的延长，夏枯草中总黄酮提取率显著增大，当提取时间大于50min时，总黄酮提取率反而下降，这是由于夏枯草中总黄酮已基本浸出，再延长提取时间反而可能会使总黄酮分解，导致提取率的降低，出于实验的可操作性考虑，提取时间控制在50min为宜。
2.1.3 提取温度对夏枯草总黄酮提取率的影响
在提取时间50min和固液比1：16的条件下，用80%的乙醇按实验步骤分别处理时间为：40℃、50℃、60℃、70℃、80℃，结果如表4所示：
实验结果表明，在40℃～70℃之间随着温度的升高，总黄酮提取率随着增大，这是由于在较低的温度范围内，随着温度的升高，分子运动加快，细胞间的摩擦作用使得细胞破裂，夏枯草中总黄酮的溶解及扩散速度加快，故提取率显著提高；但当温度过高时，总黄酮会加速分解，使得提取率降低，故最佳提取温度为70℃。
2.1.4 乙醇浓度对夏枯草总黄酮提取率的影响
在提取时间为50min、提取温度为70℃和固液比为1：16的条件按实验步骤分别处理乙醇浓度为：50%、65%、70%、75%、90%，结果如表5所示：
实验结果表明，在乙醇体积分数为50%～70%之间，夏枯草中总黄酮的提取率随着乙醇浓度的升高而增大，在乙醇体积分数为70%时总黄酮的提取率最高，可能是因为夏枯草中总黄酮的极性更接近体积分数为70%的乙醇的极性；随着乙醇体积分数的进一步增大，总黄酮提取率反而降低，可能是由于一些杂质也溶于了乙醇，导致总黄酮浓度的进一步增大，故乙醇体积分数控制在70%为宜。
2.2 正交实验
根据单因素实验的结果，以影响夏枯草总黄酮提取率的提取时间（A）、乙醇浓度（B）、固液比（C）为三个实验因子，以夏枯草总黄酮提取率为目标，做三因素三水平正交设计，共计9个实验点，以确定夏枯草中总黄酮提取的最优工艺组合。确定每个因素的3个水平为：提取时间40min、50min、60min，乙醇浓度65%、70%、75%，固液比1：12、1：16、1：20，采用L9（33）正交表进行正交实验，实验设计及结果如表6和表7所示。
根据极差R值可知各因素对夏枯草中总黄酮提取得率的影响顺序为：B >C>A，即乙醇浓度对总黄酮提取得率影响最大，其次是固液比，影响最小的是提取时间。最终得出夏枯草中总黄酮的最佳提取条件是：A2B2C2，提取时间为 50min，乙醇浓度为70%，固液比为1：16。
3 结论
本实验应用乙醇溶剂热提取法提取夏枯草中的功能成分黄酮类化合物，通过正交实验以提取时间、提取温度、乙醇浓度、固液比四方面的单因素实验对影响总黄酮提取得率的因素进行了研究，实验结果表明，以乙醇为溶剂来提取夏枯草中的黄酮类化合物时，最佳的工艺条件为：以体积分数为70%的乙醇、提取时间50min、固液比为1：16，按照正交试验的最佳工艺条件进行验证试验，平行试验3次，取其平均值，得在最佳提取条件下总黄酮提取率的平均值为1.2682%。
参考文献（略）
2.1.3 提取温度对夏枯草总黄酮提取率的影响
在提取时间50min和固液比1：16的条件下，用80%的乙醇按实验步骤分别处理时间为：40℃、50℃、60℃、70℃、80℃，结果如表4所示：
实验结果表明，在40℃～70℃之间随着温度的升高，总黄酮提取率随着增大，这是由于在较低的温度范围内，随着温度的升高，分子运动加快，细胞间的摩擦作用使得细胞破裂，夏枯草中总黄酮的溶解及扩散速度加快，故提取率显著提高；但当温度过高时，总黄酮会加速分解，使得提取率降低，故最佳提取温度为70℃。
2.1.4 乙醇浓度对夏枯草总黄酮提取率的影响
在提取时间为50min、提取温度为70℃和固液比为1：16的条件按实验步骤分别处理乙醇浓度为：50%、65%、70%、75%、90%，结果如表5所示：
实验结果表明，在乙醇体积分数为50%～70%之间，夏枯草中总黄酮的提取率随着乙醇浓度的升高而增大，在乙醇体积分数为70%时总黄酮的提取率最高，可能是因为夏枯草中总黄酮的极性更接近体积分数为70%的乙醇的极性；随着乙醇体积分数的进一步增大，总黄酮提取率反而降低，可能是由于一些杂质也溶于了乙醇，导致总黄酮浓度的进一步增大，故乙醇体积分数控制在70%为宜。
2.2 正交实验
根据单因素实验的结果，以影响夏枯草总黄酮提取率的提取时间（A）、乙醇浓度（B）、固液比（C）为三个实验因子，以夏枯草总黄酮提取率为目标，做三因素三水平正交设计，共计9个实验点，以确定夏枯草中总黄酮提取的最优工艺组合。确定每个因素的3个水平为：提取时间40min、50min、60min，乙醇浓度65%、70%、75%，固液比1：12、1：16、1：20，采用L9（33）正交表进行正交实验，实验设计及结果如表6和表7所示。
根据极差R值可知各因素对夏枯草中总黄酮提取得率的影响顺序为：B >C>A，即乙醇浓度对总黄酮提取得率影响最大，其次是固液比，影响最小的是提取时间。最终得出夏枯草中总黄酮的最佳提取条件是：A2B2C2，提取时间为 50min，乙醇浓度为70%，固液比为1：16。
3 结论
本实验应用乙醇溶剂热提取法提取夏枯草中的功能成分黄酮类化合物，通过正交实验以提取时间、提取温度、乙醇浓度、固液比四方面的单因素实验对影响总黄酮提取得率的因素进行了研究，实验结果表明，以乙醇为溶剂来提取夏枯草中的黄酮类化合物时，最佳的工艺条件为：以体积分数为70%的乙醇、提取时间50min、固液比为1：16，按照正交试验的最佳工艺条件进行验证试验，平行试验3次，取其平均值，得在最佳提取条件下总黄酮提取率的平均值为1.2682%。
参考文献（略）
2.1.3 提取温度对夏枯草总黄酮提取率的影响
在提取时间50min和固液比1：16的条件下，用80%的乙醇按实验步骤分别处理时间为：40℃、50℃、60℃、70℃、80℃，结果如表4所示：
实验结果表明，在40℃～70℃之间随着温度的升高，总黄酮提取率随着增大，这是由于在较低的温度范围内，随着温度的升高，分子运动加快，细胞间的摩擦作用使得细胞破裂，夏枯草中总黄酮的溶解及扩散速度加快，故提取率显著提高；但当温度过高时，总黄酮会加速分解，使得提取率降低，故最佳提取温度为70℃。
2.1.4 乙醇浓度对夏枯草总黄酮提取率的影响
在提取时间为50min、提取温度为70℃和固液比为1：16的条件按实验步骤分别处理乙醇浓度为：50%、65%、70%、75%、90%，结果如表5所示：
实验结果表明，在乙醇体积分数为50%～70%之间，夏枯草中总黄酮的提取率随着乙醇浓度的升高而增大，在乙醇体积分数为70%时总黄酮的提取率最高，可能是因为夏枯草中总黄酮的极性更接近体积分数为70%的乙醇的极性；随着乙醇体积分数的进一步增大，总黄酮提取率反而降低，可能是由于一些杂质也溶于了乙醇，导致总黄酮浓度的进一步增大，故乙醇体积分数控制在70%为宜。
2.2 正交实验
根据单因素实验的结果，以影响夏枯草总黄酮提取率的提取时间（A）、乙醇浓度（B）、固液比（C）为三个实验因子，以夏枯草总黄酮提取率为目标，做三因素三水平正交设计，共计9个实验点，以确定夏枯草中总黄酮提取的最优工艺组合。确定每个因素的3个水平为：提取时间40min、50min、60min，乙醇浓度65%、70%、75%，固液比1：12、1：16、1：20，采用L9（33）正交表进行正交实验，实验设计及结果如表6和表7所示。
根据极差R值可知各因素对夏枯草中总黄酮提取得率的影响顺序为：B >C>A，即乙醇浓度对总黄酮提取得率影响最大，其次是固液比，影响最小的是提取时间。最终得出夏枯草中总黄酮的最佳提取条件是：A2B2C2，提取时间为 50min，乙醇浓度为70%，固液比为1：16。
3 结论
本实验应用乙醇溶剂热提取法提取夏枯草中的功能成分黄酮类化合物，通过正交实验以提取时间、提取温度、乙醇浓度、固液比四方面的单因素实验对影响总黄酮提取得率的因素进行了研究，实验结果表明，以乙醇为溶剂来提取夏枯草中的黄酮类化合物时，最佳的工艺条件为：以体积分数为70%的乙醇、提取时间50min、固液比为1：16，按照正交试验的最佳工艺条件进行验证试验，平行试验3次，取其平均值，得在最佳提取条件下总黄酮提取率的平均值为1.2682%。
参考文献（略）
