广东梅州客家人群甲状腺癌BRAF基因V600E突变特点分析

2022.07.16

曾庆欣?饶辉?王悦冬?赖烨钤?钟海烽

【摘要】目的探讨广东梅州客家人群甲状腺癌鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1 （BRAF）基因V600E突變特点。方法收集316例广东梅州客家地区的甲状腺癌患者的临床资料及BRAF基因V600E突变检测结果，对BRAF基因V600E突变与肿瘤特征的关系进行单因素分析和多因素Logistic回归分析。结果 316例患者BRAF基因V600E总体突变率为75.3% （238/316），其中乳头状癌突变率为77.0%（238/309）。单因素分析显示BRAF基因V600E突变型患者肿瘤径线较小，纵横比大于1、微钙化比例较高，Ⅵ区和颈侧区淋巴结转移比例较低（P均< 0.05）;多因素Logistic回归分析提示BRAF V600E突变与Ⅵ区淋巴结转移（OR = 2.289， 95% CI = 1.283 ～ 4.081， P = 0.005）、超声回声（OR = 0.419， 95% CI = 0.209 ～ 0.841， P = 0.014）及粗大钙化（OR = 3.673， 95% CI = 1.395 ～ 9.668， P = 0.008）有关。结论广东梅州客家地区人群甲状腺癌BRAF基因V600E突变率较高，BRAF基因V600E突变者易发生Ⅵ区淋巴结转移。

【关键词】BRAF V600E;基因突变;甲状腺癌;客家

Mutation characteristics of BRAF V600E in thyroid carcinoma patients from Meizhou Hakka area： a single center study of 316 cases Zeng Qingxin， Rao Hui， Wang Yuedong， Lai Yeqian， Zhong Haifeng. Department of Thyroid Surgery， Meizhou Peoples Hospital//Meizhou Hospital Affiliated to Sun Yat-sen University， Meizhou 514031， China

Corresponding author， Zeng Qingxin， E-mail： zengqingxin87@ 126. com

【Abstract】Objective To summarize the mutation characteristics of V-raf munine sarcom viral oncogene homolog （BRAF） V600E in Meizhou Hakka patients with thyroid carcinoma. Methods Clinical data and BRAF V600E detection results of 316 thyroid carcinoma patients from Meizhou Hakka area were collected. The relationship between BRAF V600E mutation and tumor characteristics was analyzed by univariate and multivariate logistic regression analyses. Results The overall BRAF V600E mutation rate was 75.3% （238/316） of thyroid carcinoma patients from Meizhou Hakka area， and 77.0% （238/309） for the mutation rate of papillary thyroid carcinoma. Univariate analysis suggested that patients with BRAF V600E mutation showed smaller tumor diameter， higher proportion of aspect ratio of > 1 and microcalcification， less proportion of lymph node metastasis in the VI and lateral cervical regions （all P < 0.05）. Multivariate logistic regression analysis indicated that BRAF V600E mutation was significantly associated with lymph node metastasis in the VI region （OR = 2.289， 95%CI = 1.283-4.081， P = 0.005）， ultrasonic echo （OR = 0.419， 95%CI = 0.209-0.841， P = 0.014） and gross calcification （OR = 3.673， 95%CI = 1.395-9.668， P = 0.008）. Conclusion The BRAF V600E mutation rate of thyroid carcinoma patients from Meizhou Hakka area is relatively high. BRAF V600E mutation is prone to lymph node metastasis in the VI region.

【Key words】V-raf munine sarcom viral oncogene homolog V600E;Gene mutation;

Thyroid carcinoma;Hakka

甲状腺癌是目前发病率最高的内分泌肿瘤，其中乳头状癌最常见，约占甲状腺癌的80% ～ 90%[1-2]。大部分甲状腺癌恶性程度低，预后好，但也有小部分预后不佳，早期可出现淋巴结转移。年龄、病理类型、肿瘤大小、肿瘤分期、基因突变促使肿瘤细胞增殖侵袭等是影响甲状腺癌预后的重要因素[3-4]。

近年来有研究表明鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1（BRAF）基因突变与甲状腺癌的诊断及预后相关[5]。BRAF基因位于人染色体7q34，含有18个外显子，最常见的突变类型是1799位的胸苷酸被腺苷酸替代（T1799A），导致翻译蛋白质的第600位密码子由缬氨酸转变成谷氨酸（V600E）[6]。该突变使丝裂原活化蛋白激酶通路活化，导致细胞异常增殖[7]。BRAF 基因在不同病理类型的甲状腺癌中的V600E突变率不同，文献报道在29% ～ 94%不等[3， 8-9]。BRAF基因V600E突变与肿瘤的高侵袭性、高复发性有关，影响肿瘤細胞的包膜外浸润、淋巴结转移、肿瘤多灶性、治疗有效性[10-12]。

BRAF基因V600E突变率可能与地域、血统、种族有关。尽管不少研究者分析了BRAF 基因V600E突变与甲状腺癌临床病理特征的关系，但迄今为止未见BRAF 基因V600E突变在客家人群中的报道。中原汉族南迁形成了客家民系，梅州是客家人南迁的最后落脚点，被誉为“世界客都”，是典型的客家代表。本研究组以梅州当地的客家人为研究对象，通过搜集客家人中的甲状腺癌患者的临床资料，了解BRAF基因V600E突变在客家人群中的分布，探究该突变与甲状腺癌临床病理特征的关系，以明确BRAF基因V600E突变对客家人群甲状腺癌的诊断和预后的意义。

对象与方法

一、研究对象

收集2017年7月至2020年9月在梅州市人民医院诊治并在术后行BRAF基因V600E检测的甲状腺癌患者的病历资料，按纳入及排除标准共筛选出316例患者，其中男48例、女268例，年龄（43.07±13.06）岁。收集316例患者的临床资料包括：性别、年龄、肿瘤病理类型、术前促甲状腺激素水平、术前甲状腺球蛋白水平、癌灶个数、肿瘤最大径、甲状腺合并疾病、淋巴结转移情况、远处转移情况、彩色多普勒超声检查（彩超）的超声回声以及肿瘤包膜完整情况、纵横比、钙化等资料。本研究方案经梅州市人民医院医学伦理委员会批准（梅市伦审2020-C-101）。

二、纳入及排除标准

纳入标准：①祖上三代籍贯均为广东梅州并于本土成长和生活的患者;②首次手术治疗的甲状腺癌患者;③术前甲状腺彩超、甲状腺功能、甲状腺球蛋白等临床检查资料齐全;④术后有行常规组织病理学检查确认甲状腺癌的大小、数目、肿瘤与被膜关系、淋巴结转移等情况;⑤有应用实时荧光定量PCR法检查术后病理组织明确BRAF基因是否存在V600E突变。排除标准： ①同时合并其他恶性肿瘤或其他有可能引起BRAF基因V600E突变的疾病患者;②复发性甲状腺癌多次手术或多次接受放射性碘治疗后的患者;③合并严重的心、肺、肝、肾疾病患者。

三、BRAF基因V600突变检测

取术后切除的甲状腺肿瘤石蜡包埋切片，消化、去除组蛋白、去除RNA，DNA以核酸提取柱提取，采用实时荧光定量PCR法检测BRAF基因V600E突变情况。使用AmoyDx（FFPE DNA）核酸提取试剂盒、人类BRAF基因V600E突变检测试剂盒（厦门艾德生物医药科技股份有限公司）、PCR仪（实时荧光定量PCR仪SLAN-96S，上海宏石医疗科技有限公司）。待测样品的内控HEX（或VIC）信号应有明显扩增曲线，且Ct值应在13 ～ 21之间。若FAM信号有明显的扩增曲线，且Ct值 < 28，该样本无需重复检测，检测结果为BRAF基因V600E突变阳性;若Ct值 ≥ 28，检验结果为BRAF 基因V600E突变阴性。根据BRAF基因V600E突变与否将患者分为突变型组和野生型组。

四、统计学处理

采用 SPSS 22.0处理数据。符合正态分布的2组计量资料用表示，组间比较采用t检验，不符合正态分布的2组计量资料用中位数（上四分位数，下四分位数）[M（P25， P75）]表示，比较采用Wilcoxon秩和检验;2组计数资料用例（%）表示，比较采用χ2检验。以基因型为因变量，以2组比较中P < 0.15的因素为自变量，进行二分类Logistic回归分析，变量进入方程的方法为向前-逐步。P < 0.05为差异有统计学意义。

结果

一、各种病理类型甲状腺癌患者的BRAF基因V600E突变情况

316例中突变型组238例，诊断均为乳头状癌;野生型组78例，其中乳头状癌 71例、具有乳头样核特征的非浸润性甲状腺滤泡性肿瘤（NIFTP） 3例、滤泡状癌2例、低分化癌1例、未分化癌1例。本研究中，BRAF基因V600E总体突变率是75.3%（238/316），乳头状癌的突变率为77%（238/309）。

二、乳头状癌中BRAF基因V600E突变与临床特征的相关性

对突变型组和野生型组中乳头状癌患者的临床资料进行比较，肿瘤最大径、纵横比、钙化、Ⅵ区淋巴结转移、颈侧区淋巴结转移比较差异均有统计学意义（P均< 0.05），见表1。

三、乳头状癌中BRAF基因V600E突变与甲状腺伴随疾病的相关性

对乳头状癌是否合并结节性甲状腺肿或桥本甲状腺炎的BARF基因V600E突变情况进行比较，在合并结节性甲状腺肿者和无合并者中BRAF基因V600E突变率相当（P > 0.05）;合并桥本甲状腺炎者的突变率较无合并者高（84.6% vs. 75.0%），但比较差异无统计学意义（P = 0.067），见表2。

四、乳头状癌中BRAF基因V600E突变与临床特征及伴随疾病多因素Logistic回归分析

将单因素分析中P < 0.05或有专业意义的因素（包括肿瘤直径分组、纵横比、钙化、包膜侵犯、彩超回声、Ⅵ区淋巴结转移、颈侧区淋巴结转移、远处转移、桥本甲状腺炎）纳入多因素Logistic回归分析，结果显示方程中的变量为钙化、超声回声和Ⅵ区淋巴结转移，相应的OR值和95% CI如表3所示。

讨论

梅州是全球最具代表性的客家人聚居地，梅州客家民系来源于中原血统，经过历史的迁徙，形成了不同于中国南方汉人的方言与习俗，具有独特的遗传背景。本研究以梅州客家人群为研究对象，分析其甲状腺癌BRAF基因V600E突变的特点，对了解BRAF基因V600E突变在客家人群甲状腺癌中的分布，以及协助甲状腺癌的诊治和评估预后具有重要的临床意义。

既往文献报道了不同国家、人种甲状腺癌患者BRAF基因V600E突变情况。在澳大利亚城市人群中，68%的甲状腺乳头状癌患者存在BRAF基因V600E突变[13]。希臘的甲状腺乳头状癌患者BRAF基因V600E突变率为17%[14]。中国西北地区的BRAF基因V600E突变率为86.7%[8]。亚洲国家的突变率较西方高，中国甲状腺乳头状癌患者BRAF基因V600F突变率为72.4%，高于美国的59.7%[9]。本研究结果显示，纳入的梅州客家甲状腺癌患者的BRAF基因V600E突变率为75.3%，其中乳头状癌突变率为77.0%，呈现出较高的突变率，与文献报道的亚裔人群突变率相似[15]。

在本研究中，突变型组和野生型组的年龄相当，≥55岁的比例较野生型组稍高，但差异无统计学意义，提示年龄不是BRAF基因V600E突变的影响因素。一项包含25 241例甲状腺乳头状癌患者的Meta分析表明BRAF基因V600E突变与年龄无关[16]。王晶等[17]的研究也提示年龄不影响BRAF基因V600E突变的发生。Shen等[18]的多中心研究显示对于存在BRAF基因V600E突变的甲状腺乳头状癌患者，随着年龄的增长，病死率增加。因此，尽管我们的研究结果显示年龄与BRAF基因V600E突变无关，但仍不能忽视年龄的因素，年龄的意义更多在于评估BRAF基因V600E突变患者的预后，而并非预测是否发生BRAF基因V600E突变。

在肿瘤最大径及Ⅵ区淋巴结、颈侧区淋巴结转移方面，单因素分析显示野生型组表现出更大的肿瘤最大直径及更高比例的淋巴结转移，多因素Logistic回归控制混杂因素后，BRAF基因V600E突变只影响Ⅵ区淋巴结转移，突变型发生Ⅵ区淋巴结转移的概率是野生型的2.289倍，符合恶性肿瘤的一般规律。多数研究者认为BRAF基因V600E突变具有更高的恶性程度，在肿瘤生长速度及淋巴结转移等方面高于野生型[3， 7-8， 19]。但也有少数研究者提出相反意见，认为突变型发生颈侧区淋巴结转移的风险更低[20]。由我们的结果可以推断，和大多数人群一样，梅州客家人群甲状腺乳头状癌BRAF基因V600E突变型者肿瘤侵袭性更强。

对于纵横比 > 1、微钙化等超声表现，突变型组的比例高于野生型组，但多因素Logistic回归分析提示BRAF基因V600E突变更倾向于表现为粗大钙化和等回声，而与纵横比无关。当前研究者们普遍认为微钙化、低回声等超声表现是判断甲状腺结节为恶性的重要依据[21]。但本研究结果与此相反，或因客家人群的肿瘤特征有别于传统汉人，未表现出典型的恶性征象，也有可能是样本量小所致，需要进一步研究。

在相关伴随症状中，结节性甲状腺肿和桥本甲状腺炎与BRAF基因V600E突变无关，这与先前关于藏族人群BRAF基因V600E突变的研究相似[22]。也有研究者认为桥本甲状腺炎对甲状腺乳头状癌的发生、发展有重要影响，其可下调BRAF基因V600E突变率，降低颈中央区淋巴结的转移率，降低肿瘤的侵袭性[23]。目前关于甲状腺癌伴随疾病与BRAF基因V600E突变的关系尚无统一定论。

综上所述，梅州地区客家人群甲状腺癌BRAF基因V600E突变率较高，突变型更易发生Ⅵ区淋巴结转移，BRAF基因V600E突变检测可协助评估梅州客家人群甲状腺乳头状癌的淋巴结转移情况，评估预后。

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（收稿日期：2021-01-25）

（本文编辑：洪悦民）