摘要：目的 觀察隔药饼不同灸量对免疫抑制兔血细胞和免疫球蛋白水平的影响，探究量效差异可能的机制。方法 采用腹腔注射环磷酰胺建立免疫抑制兔模型。实验动物分为空白组、模型组、隔药饼灸3壮组、隔药饼灸5壮组、隔药饼灸7壮组。选用六味地黄汤组方制作药饼，置于神阙、关元等穴，隔日1次，共灸10次。治疗结束后第2日，静脉取血，行血细胞系列、IgG、IgM和补体C3、C4水平的检测。结果 与空白组比较，模型组白细胞（WBC）、中性粒细胞（NEU）、红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）、红细胞压积（HCT）、血小板计数（PLT）、IgG、IgM、补体C3水平显著降低，淋巴细胞（LYM）、单核细胞（MONO）水平显著升高（P<0.01）；与模型组比较，除隔药饼3壮组HCT和IgM水平升高不明显外，各治疗组WBC、NEU、RBC、HGB、HCT、PLT、IgG、IgM和补体C3水平显著升高，LYM、MONO水平显著降低（P<0.01）；与隔药饼灸3壮组比较，隔药饼灸5壮组WBC、IgG和补体C3水平显著升高，隔药饼灸7壮组WBC、HGB和补体C3水平显著升高（P<0.01）。结论 隔药饼灸可有效改善环磷酰胺所致兔免疫功能低下，不同灸量效果有一定差异。
关键词：隔药饼灸；不同灸量；环磷酰胺；血细胞；免疫球蛋白；兔
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.04.013
中图分类号：R245 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2017）04-0050-04
Effects of Different Quantities of Cake-separated Moxibustion on Blood Cells and Immunoglobulin in Model Rabbits JIA Cui-na1， LI Lei-yong2， TIAN Yue-feng1， QIU Qiao1， WANG Ju1 （1. Acupuncture and Massage College， Shanxi University of Traditional Chinese Medicine， Taiyuan 030619， China； 2. The Second Hospital of Shanxi Medical University， Taiyuan 030001， China）
Abstract： Objective To observe the effects of different quantities of cake-separated moxibustion on blood cells and immunoglobulin in immunosuppressive rabbits； To study the possible mechanism of quantity-effect difference. Methods Immunosuppressive rabbit model was established by intraperitoneal injection of cyclophosphamide. Rabbits were randomly divided into blank group， model group， cake-separated moxibustion 3 Zhuang group， 5 Zhuang group， 7 Zhuang group. Liuwei Dihuang Decoction was used to make herbal-cake， and was put on Shenque （RN8）， Guanyuan （RN4）， and other acupoints， once for every other day， 10 times in total. Venous blood was taken on the next day after finishing treatment， and the contents of blood cells series and IgG， IgM， complement C3 and complement C4 were detected. Results Compared with blank group， the levels of WBC， NEU， RBC， HGB， HCT， PLT， IgG， IgM， and complement C3 of model group significantly decreased， while the levels of LYM and MONO significantly increased （P<0.01）. Compared with model group， the increase of HCT and IgM in the cake-separated moxibustion 3 Zhuang group was not significant， the levels of WBC， NEU， RBC， HGB， HCT， PLT， IgG， IgM， and complement C3 in all treatment groups significantly increased， and LYM and MONO significantly decreased （P<0.01）. Compared with cake-separated moxibustion 3 Zhuang group， the levels of WBC， IgG， and complement C3 of cake-separated moxibustion 5 Zhuang group significantly increased， and the levels of WBC， HGB and complement C3 of cake-separated moxibustion 7 Zhuang group significantly increased （P<0.01）. Conclusion Cake-separated moxibustion can improve the immune function under immunosuppressive state induced by cyclophosphamide， and different quantities have differences in efficacy.
Key words： cake-separated moxibustion； different quantities of moxibustion； cyclophosphamide； blood cells； immunoglobulin； rabbits
隔药饼灸是将艾灸、药物、穴位三者有机结合，将药饼放于穴位上进行艾灸，药物和艾绒的药性通过穴位、经络输布渗透并深入体内，发挥药物归经的效能。从古代医家对灸量的沿革、应用、施灸规律、量效关系[1-3]，到现代研究者总结不同灸量对不同系统疾病的影响，以及灸量如何准确控制等，都关注到艾灸量这一重要的变化因素在艾灸疗效中的关键作用[4-5]。本研究从量效角度出发，观察免疫抑制模型兔在施以隔药饼不同艾灸量后血细胞和免疫分子的变化，分析不同灸量所产生效果的差异，为临床应用提供更佳的治疗方案。
1 实验材料
1.1 动物
新西兰兔50只，3月龄，体质量（2.5±0.3）kg，雌雄不限，太原市小店区丰泽园种养农民专业合作社，动物合格证号SCXK（晋）2015-0003。饲养于温度20～25 ℃、相对湿度50%～70%环境。
1.2 药物、艾条和仪器
注射用环磷酰胺，山西普德药业股份有限公司，批号20140312；0.9%NaCl注射液，石家庄四药有限公司，批号20140521；艾条，南阳卧龙汉医艾绒厂。血细胞检测仪（美国雅培），体液免疫检测仪（美国贝克曼）。
2 实验方法
2.1 分组
将50只新西兰兔随机分为空白组、模型组和隔药饼灸3壮组、5壮组、7壮组，每组10只。
2.2 造模
参照文献[6]方法。经过前期预实验，对给药剂量和时间略作调整。实验动物适应性饲养7 d，除空白组外，其余4组每日上午腹腔注射生理盐水稀释环磷酰胺60 mg/kg，空白组注射等量生理盐水。连续7 d。
2.3 药饼及艾柱制备
将六味地黄汤药物按组方8∶4∶4∶3∶3∶3的比例混匀，打碎成粉末，过120目筛备用。临用前用75%乙醇调匀，软硬适中，制成直径1 cm、厚0.3 cm的药饼。取艾条中艾绒，制成底径0.8 cm、高0.5 cm的圆锥形艾炷备用。
2.4 艾灸
选取神阙、关元、足三里（双）、脾俞（双）、肾俞（双）8个穴位。穴位定位参照《实验针灸学》[7]。造模完成2 d后，将穴位处的毛剪去，施灸时先将动物固定于兔台，药饼置于穴位上，艾炷置于药饼上，线香点燃，燃尽更换，3个治疗组根据不同分组每穴分别连灸3、5、7壮，隔日1次，共灸10次。
2.5 指标检测
治疗结束后次日，将动物麻醉，腹腔静脉采血，观察外周血细胞变化，检测免疫球蛋白IgG、IgM和补体C3、C4。
3 统计学方法
采用SAS8.2统计软件进行分析。实验数据以—x±s表示，组间比较采用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。
4 结果
4.1 隔药饼不同灸量对模型兔血细胞的影响
与空白组比较，模型组白细胞（WBC）、中性粒细胞（NEU）、红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）、红细胞压积（HCT）、血小板计数（PLT）显著降低，淋巴细胞（LYM）、单核细胞（MONO）显著升高（P<0.01）；与模型组比较，除隔药饼3壮组HCT升高差异无統计学意义外，各治疗组WBC、NEU、RBC、HGB、HCT、PLT显著升高，LYM、MONO显著降低（P<0.01）；与隔药饼3壮组比较，隔药饼5壮组WBC显著升高，隔药饼7壮组WBC和HGB显著升高（P<0.01）；嗜酸性粒细胞（EOS）、嗜碱性粒细胞（BASO）组间比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结果见表1。
4.2 隔药饼不同灸量对模型兔免疫球蛋白和补体水平的影响
与空白组比较，模型组IgG、IgM和补体C3显著降低（P<0.01）；与模型组比较，除隔药饼3壮组IgM升高不明显外，各治疗组IgG、IgM和补体C3显著升高（P<0.01）；与隔药饼3壮组比较，隔药饼5壮组IgG和补体C3明显升高，隔药饼7壮组补体C3显著升高（P<0.01）。结果见表2。
5 讨论
隔药饼灸较单纯艾灸增加了药物的作用，使艾绒在燃烧时产生温热，促进机体对药物的吸收，通过经络的渗透输布，发挥药性归经的效能，从而作用于机体各脏腑组织，提高机体的免疫防御能力。六味地黄汤在临床上广泛用于内、外、妇、儿、皮肤、五官等各科疾病，为经典的滋阴补肾方。研究发现，该方能提高正常小鼠脾脏巨噬细胞的功能，提高红细胞免疫功能，对淋巴细胞免疫有增强作用，从多方面调节机体的免疫系统，还可明显增强体液免疫功能[8]。课题组前期研究发现，隔药饼灸不同年龄人群对血细胞有显著调节作用，可增强红细胞CD58的高表达，提高机体免疫力[7]。动物实验也表明，隔药饼灸较单纯艾灸更有效调节外周血细胞、CD4和CD8以改善机体免疫功能低下的状态[9]。
灸量是影响灸效的重要因素之一。从古至今灸量都是中医家关注的重点，古代医家注重辨证施灸，结合患者病情特点、年龄和施灸部位等不同因素，对患者施以不同的艾灸量。《外台秘要》卷三十九：“灸风者，宜从少以至多也；灸寒者，宜从多以至少也；寒湿者，宜从多以至少也。”较全面认识到施灸用量的规律和施灸足量的判定方法，同时阐述了不同施灸用量的适应症和不同施灸方法的用量特点[2]。现代学者在前人经验的基础上，与现代医学相结合，总结了不同灸量对不同系统疾病的影响，提倡加强对灸量的研究和创新，促使灸量的应用更加客观化和标准化，为临床应用最佳治疗方案提供了理论基础[4]。
灸效的产生必定需要一定量的积累，但并非灸量越大效果越好。这可能与机体自身机制相关，机体的耐受程度是一定的，对艾灸产生热力的吸收有一定限度，当未达到或刚好达到自身机体的阈值时，产生的效果就会随着灸量增大而增加。有研究表明，隔药饼灸不同灸量治疗寒凝型原发性痛经，灸量越大所取得的效果越好[10]；不同灸量艾灸溃疡性结肠炎大鼠，取得效果与使用灸量成正相关[11]。当超出机体自身耐受的阈值时，其敏感度下降，所取得的效果就开始出现下降趋势。有研究发现，不同灸量悬灸哮喘大鼠模型，结果悬灸15、30、60 min的效果呈递增趋势，而悬灸2 h与悬灸1 h的效果相当[12]。另有实验观察，对克罗恩病大鼠模型施以不同灸量发现，艾灸15 min和25 min的效果均好于艾灸5 min，并且两组的效果相当[13]。由此看出，灸效并未一直随灸量的加大而增强，合适灸量就可达到较佳的治疗效果，为临床应用提供了实验依据。另外，临床上还需要根据患者的病情特点、体质、部位等因素，辨证施治，选择合适的灸量，以获取较佳治疗效果，避免灸量过度导致不良反应的发生。
本实验结果显示，模型组WBC、NEU、RBC、HGB、HCT、PLT、IgG、IgM、补体C3较空白组显著降低，LYM、MONO显著升高，提示免疫抑制动物造模成功。不同灸量隔药饼灸的3个治疗组对免疫抑制兔的血细胞和免疫分子均有调节作用，由于灸量的不同，所产生的效果也有所差异。隔药饼灸3壮组虽然提高了免疫抑制兔的免疫功能，但其效果总体上与隔药饼灸5壮组和隔药饼灸7壮组相差较多。隔药饼灸5壮组和隔药饼灸7壮组效果相当，血细胞分析中隔药饼灸7壮组的效果优于隔药饼灸5壮组，而免疫球蛋白和补体系统检测显示隔药饼灸5壮组的效果较好。适度的灸量可以获得较佳的效果，而效应持续的时间将是我们后期实验探讨的内容。
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