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鱼腥草破壁饮片对内毒素致热家兔的解热作用研究

范文

弓铭杨若聪代耀兰吴传鸿陈炜璇段飞鹏赵慧辉王佩佩孙燕成金乐李韶菁

摘要?目的：考察鱼腥草破壁饮片对内毒素致家兔发热的解热作用及血液中内毒素含量，血清中炎性因子含量的影响。方法：采用家兔耳缘静脉注射内毒素制备家兔发热模型，测量给药前及给药后4 h各组家兔体温，观察鱼腥草破壁饮片对致热家兔体温的影响;4 h后，耳缘静脉采血，检测全血中白细胞数量，血浆中内毒素含量，以及用ELISA法检测血清中炎性反应因子IL-6、IL-1β、TNF-α的含量。结果：与对照组比较，模型组体温、全血中白细胞含量、血浆中内毒素含量以及血清中IL-1β，IL-6、TNF-α的含量均显著增高。与模型组比较，鱼腥草破壁饮片高、中劑量组能显著地降低致热1 h后的家兔体温;并且，其可显著降低全血中白细胞含量、血浆中内毒素含量。与鱼腥草传统饮片组比较，鱼腥草破壁饮片可显著降低致热1 h后的家兔体温、全血中白细胞含量以及血清中IL-6的含量，差异有统计学意义。鱼腥草破壁饮片和传统饮片均可不同程度降低IL-1β、TNF-α含量。结论：鱼腥草破壁饮片可显著清除家兔体内内毒素，使其体温下降，且在一定程度上优于传统饮片。

关键词?鱼腥草破壁饮片;家兔致热模型;内毒素;家兔;炎性因子;体温;白细胞介素-1β;肿瘤坏死因子-α;白细胞介素-6

Abstract?Objective：To investigate the effect of ultrafine granular powder of heartleaf houttuynia herb on endotoxin-induced fever in rabbits， the content of endotoxin in blood and the content of inflammatory factors in serum.Methods：A rabbit fever model was prepared by endotoxin injection into rabbit ear margin， and the body temperature of each group of rabbits was measured before and 4 hours after administration， and the effect of ultrafine granular powder of heartleaf houttuynia herb on fevered rabbit temperature was observed; after 4 hours， blood was collected from the ear veins to detect the number of white blood cells in the whole blood， the content of endotoxin in the plasma， and the content of the inflammatory response factors IL-6， IL-1β and TNF-α in the serum were detected by ELISA.Results：Compared with the control group， the body temperature， leukocyte content in whole blood， plasma endotoxin content， and serum IL-1β， IL-6， TNF-α levels in the model group were significantly increased.Compared with the model group， the high-and medium-dose group of ultrafine granular powder of heartleaf houttuynia herb can significantly reduce the rabbit′s body temperature after 1 hour of heating; moreover， it can significantly reduce the content of white blood cells in blood and endotoxin in plasma.Compared with heartleaf houttuynia pieces group， ultrafine granular powder of heartleaf houttuynia herb can significantly reduce the rabbit′s body temperature， leukocyte content in whole blood and IL-6 content in serum after 1 hour of heating.The difference was statistically significant.Both heartleaf houttuynia pieces and ultrafine granular powder of heartleaf houttuynia herb can reduce the content of IL-1β and TNF-α to varying degrees.Conclusion：Ultrafine granular powder of heartleaf houttuynia herb can significantly remove endotoxins in rabbits and make their body temperature drop， and it is better than heartleaf houttuynia pieces to some extent.

Keywords?Ultrafine granular powder of heartleaf houttuynia herb; Rabbit fever model; Endotoxin; Rabbits; Inflammatory Cytokines; Body temperature;IL-1β; TNF-α; IL-6

中图分类号：R285.5文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.13.015

鱼腥草为三白草科蕺菜属植物Houttuynia cordata Thunb.的新鲜全草或干燥地上部分。性味辛、微寒，归肺经。中医功效主要有清热解毒、消痈排脓、利尿通淋等。主治肺痈吐脓、痰热喘咳、热淋、热痢、痈肿疮毒、咽喉肿痛等症，是“治疗肺痈之要药”[1]。现代药理研究认为鱼腥草具有显著的解热、抗炎作用，鱼腥草破壁饮片是传统饮片经过现代加工技术，保留药物原有成分制备成的新型中药饮片，具有服用方便、吸收率高等特点[2-3]。本实验通过复制内毒素致家兔发热模型，观察鱼腥草破壁饮片对内毒素致家兔发热后体温的影响，同时测定全血中白细胞含量，血浆中内毒素含量以及血清中炎性反应因子IL-6、IL-1β、TNF-α的含量，考察其抗内毒素作用，并比较鱼腥草破壁饮片与传统饮片的抗内毒素方面存在的差异，现将结果报道如下。

1?材料与方法

1.1?材料

1.1.1?动物?普通级新西兰家兔56只（动物生产许可证号为SCXK（京）2017-0002，实验动物合格证号：11400800012460），平均体质量（2.0±0.2）kg。饲养于符合国家标准的北京中医药大学科研中心动物室，室温20～25 ℃，相对湿度50%，适应性喂养7 d，普食饲养，自由饮水，定期进行紫外消毒通风。

1.1.2?药物?鱼腥草破壁饮片（中山市中智药业集团有限公司，批号：20160905）;鱼腥草传统饮片（中山市中智药业集团有限公司，批号：20160902）;盐酸异丙嗪注射液（天津金耀药业有限公司，批号：1701041）;内毒素LPS（Sigma公司，美国，批号：076M4029V）。

1.1.3?试剂与仪器?动态显色法鲎试剂（湛江安度斯生物有限公司，中国，批号：1701050）;细菌内毒素工作标准品（中国药品生物制品检定所，批号：150601-201782）;细菌内毒素检查用水（湛江安度斯生物有限公司，批号：1702130）;Rabbit IL-6 ELISA试剂盒（北京海诚远宏科技有限公司，批号：170720）;Rabbit IL-1βELISA试剂盒（北京海诚远宏科技有限公司，批号：170721）;Rabbit TNF-αELISA试剂盒（北京海诚远宏科技有限公司，批号：170722）;多功能酶标仪（美国分子仪器公司，美国，货号：M5）;血细胞分析仪（江西特康三分群血细胞分析仪，货号：TEK-IIMINI）。

1.2?方法

1.2.1?分组与模型制备?将56只新西兰家兔按照随机数字表法随机分成7组，分别命名为对照组、模型组、非那根组、鱼腥草传统饮片组、鱼腥草破壁饮片低剂量组、鱼腥草破壁饮片中剂量组、鱼腥草破壁饮片高剂量组，每组8只，雌雄各半。对照组给予常规饲养，其他各组家兔，在分别给予相应组别的药物半小时后，通过耳缘静脉注射1 mL（4 ng/mL）（20 EU）内毒素稀释液，建立家兔发热模型。

1.2.2?给药方法?1）饮片储液配制：以生药量计算，进行受试样品鱼腥草破壁饮片和鱼腥草传统饮片储液的配制。鱼腥草破壁饮片：分别称取48 g、24 g、12 g的破壁饮片作为鱼腥草破壁饮片高、中、低剂量组，用研钵均匀研磨成细粉，加入生理盐水200 mL，配置成混悬液，浸泡24 h，用时混悬后按照5 mL/kg灌胃给药。鱼腥草传统饮片：称取24 g的传统饮片，用打粉机磨成细粉，加入生理盐水200 mL，配置成混悬液，浸泡24 h，用时混悬后按照5 mL/kg灌胃给药。2）实验前准备：实验前3天每天测定家兔肛温2次使家兔适应实验操作，选择平均体温在38.5～39.5 ℃且体温波动不超过0.3 ℃的家兔用于试验;实验前1天禁食16 h;3）给药剂量：实验当天测定各组家兔的基础体温，各组灌胃给予相应药物，非那根组（0.025 g/kg）、鱼腥草传统饮片组（0.6 g/kg）、鱼腥草破壁饮片低剂量组（0.3 g/kg）、鱼腥草破壁饮片中剂量组（0.6 g/kg）、鱼腥草破壁饮片高剂量组（1.2 g/kg），空白對照组和模型组灌胃给予等体积纯水;给药后半小时，每组家兔耳缘静脉注射1 mL（4 ng/mL）（20 EU）内毒素稀释液;分别测定注射内毒素后1、2、3、4 h家兔体温，并于造模4 h后耳缘静脉取血4 mL。

1.2.3?检测指标与方法?内毒素致热4 h后，耳缘静脉采血，对全血进行血常规检测，测定全血中白细胞的含量;用动态显色法鲎试剂检测血浆进行内毒素含量;酶联免疫法检测血清中炎性因子IL-6、IL-1β、TNF-α的含量。

1.3?统计学方法?采用SPSS 18.0统计软件进行数据分析，计量数据以均数±标准差（±s）表示，采用配对t检验;计数资料用百分比/率（%）表示，采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2?结果

2.1?鱼腥草破壁饮片对内毒素致热家兔体温的影响?家兔给予内毒素后，于内毒素给与后1 h，2 h，3 h和4 h进行家兔体温的检测。内毒素给予1 h后，与对照组比较，模型组体温显著升高，差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较，鱼腥草高剂量组和中剂量组可显著降低家兔体温，差异有统计学意义（P<0.05）;内毒素给予1 h后，鱼腥草破壁饮片高剂量组和中剂量组与鱼腥草传统饮片组比较，对家兔的体温有显著降低作用，差异有统计学意义（P<0.05）;对于其他时间点，鱼腥草破壁饮片及传统饮片对家兔体温有降低的改善作用趋势，但不明显。见表1。

2.2?鱼腥草破壁饮片对内毒素致家兔发热后全血中白细胞数含量的影响?内毒素致热4 h后，耳缘静脉采血，对全血进行血常规检测，测定全血中白细胞的含量。模型组全血中白细胞含量显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较，鱼腥草破壁饮片高剂量组可显著降低全血中白细胞含量，差异有统计学意义（P<0.05）。非那根组，鱼腥草传统饮片组，鱼腥草破壁饮片低剂量组、中剂量组全血中白细胞含量与模型组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

2.3?鱼腥草破壁饮片对内毒素致家兔发热后血浆中内毒素含量的影响?内毒素致热4 h后，耳缘静脉采血，用鲎试剂对血浆进行内毒素含量的检测。模型组血浆中内毒素含量显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。鱼腥草破壁饮片高剂量组可显著降低血浆中内毒素含量，差异有统计学意义（P<0.05）。非那根组，鱼腥草传统饮片组，鱼腥草低剂量组、中剂量组血浆中内毒素含量与模型组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。鱼腥草破壁饮片高剂量组与鱼腥草传统饮片组比较，可显著降低血浆中内毒素的含量，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.4?鱼腥草破壁饮片对内毒素致热家兔血清中炎性因子含量的影响?内毒素致热4 h后，耳缘静脉采血，对血清中细胞因子IL-6含量的检测。模型组血清中细胞因子IL-6含量显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;鱼腥草破壁饮片中剂量组，高剂量组及非那根组均可不同程度降低血清中细胞因子IL-6含量，差异有统计学意义（P<0.05）;鱼腥草传统饮片组、鱼腥草破壁饮片低剂量组血浆中内毒素含量与模型组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。鱼腥草破壁饮片高剂量组与鱼腥草传统饮片组比较，在降低家兔血清中炎性因子IL-6的含量方面上，差异有统计学意义（P<0.05）。模型组血清中细胞因子IL-1β含量高于对照组。鱼腥草破壁饮片，鱼腥草传统饮片组及非那根组可不同程度降低血清中细胞因子IL-1β含量，但差异均无统计学意义。鱼腥草破壁饮片不同剂量组与鱼腥草传统饮片组比较，差异无统计学意义（P>0.05）;模型组血清中细胞因子TNF-α含量显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。鱼腥草破壁饮片高剂量组及非那根组均可不同程度降低血清中细胞因子TNF-α含量，差异有统计学意义（P<0.05）。鱼腥草破壁饮片不同剂量组与鱼腥草传统饮片组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表3。

3?讨论

鱼腥草为三白草科蕺菜属植物，始载于《名医别录》，性味辛、微寒，归肺经。中医功效主要有清热解毒、消痈排脓、利尿通淋等。主治肺痈吐脓、痰热喘咳、热淋、热痢、痈肿、疮毒、咽喉肿痛等症，是“治疗肺痈之要药”。目前对鱼腥草的研究认为，其含有挥发油、黄酮类、有机酸、生物碱及维生素等活性成分，主要发挥作用的成分是挥发油和黄酮类化合物。鱼腥草现代的药理作用包含解热、抗炎、抗病毒、抗菌以及调节免疫系统功能[4]。除了以上主要功能外，鱼腥草还具有抗过敏、镇咳、抗抑郁、降糖等药效，被誉为“中药广谱抗生素”[5-6]。

本研究目的是探讨鱼腥草破壁饮片的抗内毒素作用，并且与鱼腥草传统饮片的效果进行比较。

内毒素是重要的外源性致热源，通过刺激体内的单核巨噬细胞产生并释放内生致热原引起发热反应[7]。炎性反应细胞因子是主要的内生致热源，包括IL-6、IL-1、干扰素、TNF、巨噬细胞炎性反应蛋白-1等[8]。这些炎性反应细胞因子作为发热信号可直接或者间接作用体温调节中枢，导致下丘脑的发热递质cAMP含量增高使体温调节点上移，产热增加，散热减少[9]。下丘脑是主要的体温调节中枢，非那根可抑制下丘脑体温调节中枢，解除机体保温作用，从而具有降低体温的作用，故在家兔致热实验中用作阳性药[10-11]。

IL-1是重要的致热性细胞因子，由于基因编码的不同分为IL-1α和IL-1β，而IL-1β具有明显的致热性[12]。TNF由TNF-α和TNF-β 2种蛋白质形式存在，作为发热调节因子主要是TNF-β[13-14]。在内毒素引起的家兔发热模型中，血浆和脑脊液中IL-6、TNF-β、IL-1β的含量显著增高[15]。本研究结果显示，鱼腥草破壁饮片高剂量组可显著降低血中白细胞、内毒素、血清中炎性因子IL-6及TNF-α的含量，效果优于鱼腥草传统饮片。

综上所述，从内毒素致家兔发热实验中，通过动物在体层面，发现鱼腥草破壁饮片具有良好的抗内毒素作用，且在一定程度上优于鱼腥草传统饮片。

参考文献

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（2018-08-07收稿?责任编辑：王明）

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