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标题 大樱桃吉塞拉6号砧木组培培养基试验研究
范文

    杜凯 孙训彪

    

    

    

    摘 要:以樱桃砧木“吉塞拉6号”为试材,分别进行了增殖继代和生根培养基筛选试验。对“吉塞拉6号”砧木组培培养基激素做了多个梯度浓度对比试验,并进行研究和总结,为大规模、快速繁育“吉塞拉6号”组培苗提供理论和实践依据。结果表明:在本次试验选取的培养基中,较适宜的增殖培养基为MS加1mg/L 6-BA加0.2mg/L GA3加0.2mg/L NAA,蔗糖30g/L,增殖系数可达4~5;较适宜的生根培养基为1/2MS加0.2mg/L NAA加0.7mg/L IBA,蔗糖20g/L,生根率达80%。

    关键词:樱桃砧木;吉塞拉6号;组织培养;培养基

    中图分类号:S-3

    文献标识码:A

    吉塞拉系列砧木是山东省果树研究所最早引进的德国矮化砧,其中的“吉塞拉6号”属半矮化砧,该砧木具有矮化、丰产、抗病、早实性强、土壤适应范围广等优良特性。相较于同系列的“吉塞拉5号”,“吉塞拉6号”长势更强,更适应露地栽培,“小脚”现象较“吉塞拉5号”轻,在黏土地上生长良好,但常规条件下该品种繁殖困难,扦插成活率低,根蘖法繁殖速度也较慢。为了加快其繁殖速度,试验选取“吉塞拉6号”砧木为实验材料,采用组织培养的繁殖方法,通过多次试验,得出“吉塞拉6号”较适宜继代增殖以及生根培养基配方,旨在为实现工厂化生产“吉塞拉6号”组培苗提供理论和实践依据。

    1 试验材料与方法

    1.1 试验材料

    试验材料为无性系甜樱桃矮化砧木“吉塞拉6号”,采自上海交通大学农学与生物学院苗圃。

    组培所用基础培养基为MS培养基(基础成分为大量元素、琼脂、微量元素、有机成分、铁盐成分、蔗糖等)和1/2MS培养基(大量元素用量为MS培养基1/2,其余成分与MS培养基一样),所用激素为IBA、NAA、6-BA、IAA、GA3、KT、TDZ、BAP等。

    1.2 试验方法

    1.2.1 茎尖剥离

    选择晴朗天气采集外植体。选取生长健壮、无病虫害的一年生幼嫩半木质化新生枝条进行釆集,枝条采回后及时整理修剪,去除多余叶片,选取新梢0.5~1cm备用。新梢釆回后当天处理剥离茎尖,如当天不能及时接种的,用塑料袋包好,保存在4℃左右的冰箱内。

    将采回的0.5~1cm新梢用自来水流动冲洗45~60min后,转移至超净工作台上,用75%酒精浸泡消毒45s,然后用0.1%升汞溶液浸泡5~10min,最后用无菌水冲洗5~6遍,在解剖镜下将生长点周围叶片剥离,留下茎尖生长点约0.5~1mm大小,接种于初代诱导培养基上,每瓶接种1株,转移到光照培养架上培养。

    1.2.2 初代培养

    试验采用的初代培养基配方为MS加0.2mg/L IBA加0.5mg/L 6-BA。配方内所有成分在高压灭菌前加入,用0.1mol/L的氢氧化钠溶液调整pH值至5.7~5.8,将培养基灌入培养瓶中,放入高压灭菌锅中加热到120℃灭菌20min。

    培养条件为光照周期为10h/14h(光培养10h,暗培养14h),光照强度为2000~2500Lx,温度控制在24~27℃,空气相对湿度最佳范围为50%~60%,一般培养50d左右即可转入继代扩繁培养基中。

    1.2.3 不同激素种类及浓度对试管苗继代的影响

    将经过初代培养的外植体在超净工作台上切割为1cm左右的茎段,然后接种到继代培养基中,试验设Al~A7共7个种类继代培养基处理(表1),每瓶接入2~3个茎段,每个处理接种20瓶。接种后置于培养室培养,培养条件为光周期16h/8h(光培养16h,暗培养8h),光照强度控制在2000~3000Lx,培养温度为24~27℃,空气相对湿度60%~80%。分别在接种后7d、15d和25d统计继代试管苗的成活、分化率情况。

    继代培养采用了7种不同成分的培养基进行试验,具体如下。

    A1:MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.1mg/L NAA+0.01mg/L TDZ

    [JP3]A2:MS+0.3mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA+0.05mg/L TDZ[JP]

    A3:MS+1.2mg/L BAP

    A4:MS+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L IBA(暗处理3~5d)

    A5:MS+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L GA3+0.1mg/L NAA

    A6:MS+1mg/L 6-BA+0.2mg/L GA3+0.2mg/L NAA

    A7:MS+2mg/L 6-BA+0.2mg/L GA3+0.4mg/L NAA

    1.2.4 不同激素种类及浓度对试管苗生根的影响

    选择苗高3cm左右的健壮增殖继代苗,在超净工作台上由茎基部剪断,转接到生根培养基上诱导生根,每个培养瓶内接入2株。试验设生根培养基种类B1~B10共10个处理(表2),每处理接种20瓶。培养条件为光周期18h/6h(光培养18h,暗培养6h),在外植体开始生根后,逐渐增加光培养时间。光照强度范围在2000~3000Lx,培养温度控制在(25±1)℃,空气相对湿度40%~70%。在接入生根培养基15d左右,试管苗会生长出白色的根点,接種20d后,开始统计新生根数量和生根率。

    B1:1/2MS+0.1mg/L IBA

    B2:1/2MS+0.3mg/L IBA

    B3:1/2MS+0.5mg/L IBA

    B4:1/2MS+0.7mg/L IBA

    B5:1/2MS+0.2mg/L IBA+0.2mg/L IAA

    B6:1/2MS+0.2mg/L IBA+0.4mg/L IAA

    B7:1/2MS+0.2mg/L IBA+0.6mg/L IAA

    B8:1/2MS+0.2mg/L NAA+0.5mg/L IBA

    B9:1/2MS+0.2mg/L NAA+0.7mg/L IBA

    B10:1/2MS+0.2mg/L NAA+0.9mg/L IBA

    2 结果分析

    2.1 不同培养基对外植体继代培养的影响

    “吉塞拉6号”外植体在不同培养基中的诱导分化情况不同,其中在6号培养基中成活率最高,为97.2%,且分化率最高,为5~6,不定芽为鲜嫩绿色,转入增殖培养基后增殖速度较快;3号培养基成活率最低,为65%,且在1号和5号培养基上诱导分化的外植体,易出现玻璃化现象。因此,此次试验中,较适宜的继代培养基为MS加1mg/L 6-BA加0.2mg/L GA3加0.2mg/L NAA。

    2.2 不同培养基对外植体生根培养的影响

    通过实验数据采集发现,试管苗在10种生根培养基上的生根数量集中在3~5条,其中,B2、B3培养基上生根最少,B10培养基上生根最多(表4)。但是单纯从生根数量上不能直接判断培养基的适用程度,植株发出的新根是否健康、是否具备良好的组织结构才是制约试管苗移栽成活的关键。接种在添加NAA培养基上的试管苗,愈伤组织产生的新根数量虽然多但根系脆弱,长度较短(图3),不能形成健康良好的根系。接种在添加IBA培养基上的试管苗,产生的愈伤较少,且IBA浓度较大时根系粗大脆弱(图4),也不能形成健康良好的根系。综合比较发现,接种在B9培养基上的幼苗没有产生过多的愈伤组织,且新根数量较多,粗细适中,侧根分化多,形态较好(图5),由此可以判断B9培养基较适合“吉塞拉6号”生根培养。

    3 小结

    经过试验研究,以“吉塞拉6号”为试验材料,利用植物组织培养技术快速繁殖时,较为适宜的培养基分别为增殖培养基:MS加1mg/L 6-BA加0.2mg/L NAA加0.2mg/L GA3,蔗糖30g/L,增殖系数可达4~5;最佳生根培养基为:1/2MS加0.2mg/L NAA加0.7mg/L IBA,蔗糖20g/L,生根率达80%。另外,在生根试验中,试管苗过于幼嫩,或继代次数过多,都不利于“吉塞拉6号”外植体生根,试验用到的激素中,IBA浓度对试管苗生根影响较大。

    参考文献

    [1]冯社章,范继红,纪书琴,赵印.吉塞拉的组织培养技术研究[J].河北农业科学,2010,14(10):76-79,86.

    [2]夏國海,叶霞,赵冰梅,等.樱桃组织培养研究进展[J].中国果树,2003(3):46-50.

    (责任编辑 李媛媛)

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更新时间:2024/12/23 8:11:22