《中药材威灵仙基原的显微鉴别》-农学论文，农业论文-论文范文参考-科学狗论文网

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中药材威灵仙基原的显微鉴别

范文

赵圆圆许晨新张杰

摘要：基于粉末与横切面显微方法鉴别中药材威灵仙的3种基原，完善威灵仙药材的显微鉴别方法。对市场上采购的14批威灵仙药材分别采用横切面和粉末制片，考察并优化制片方法，观察比较不同批次药材的显微特征。结果表明，横切面的外皮层细胞排布、韧皮部、木质部显微特征显著，粉末的木纤维、韧皮纤维、石细胞、导管、非腺毛、木栓细胞、表皮细胞、皮层细胞显微特征显著。结合《中华人民共和国药典》标准，可根据横切面的外皮层细胞延长方向鉴别威灵仙;根据粉末的石细胞和韧皮纤维特征鉴别棉团铁线莲和东北铁线莲。采购的14批威灵仙药材中3批为威灵仙，2批为棉团铁线莲，9批为东北铁线莲。说明粉末显微可有效弥补横切面显微鉴别的不足。将粉末与横切面显微相结合，可快速高效地鉴别中药材威灵仙的3种基原，操作简单，显微特征明显，判别直观准确，具有很高的专属性和耐用性，对《中华人民共和国药典》现有显微鉴别方法是一个有力的补充。

关键词：威灵仙;基原鉴别;横切面显微;粉末显微

中图分类号： R282.5 ?文献标志码： A ?文章编号：1002-1302（2019）22-0234-04

中药材威灵仙按2015年版《中华人民共和国药典》（以下简称《药典》）规定有3种基原，分别为毛茛科植物威灵仙（Clematis chinensis Osbeck）、棉团铁线莲（Clematis hexapetala Pall.）、东北铁线莲（Clematis manshurica Rupr.）的干燥根和根茎，临床上主要用于治疗风湿痹痛、肢体麻木、筋脉拘挛、屈伸不利[1-2]。一直以来，市场上销售的威灵仙都只有产地信息，缺乏基原标志。尤其是近年来对威灵仙的需求量逐渐增加，使得威灵仙药材的基原问题更显凸出[3]，给临床应用带来了诸多的问题[4-5]。现有威灵仙鉴别的研究报道很多，包括性状[6]、高效液相色谱（HPLC）指纹图谱[7]、紫外光谱[8]、傅里叶变换红外光谱[9]、DNA分子鉴定技术[10-11]、薄层色谱[12]等多种技术手段，但均用于鉴别威灵仙及其铁线莲属伪品。中药材威灵仙3种基原的鉴别主要是依据2015年版《药典》收载的性状特征和横切面显微方法。但市场上的威灵仙多为切段药材，性状特征已经被破坏，而显微鉴别中的纤维束、石细胞等特征均为典型的粉末特征，采用横切面显微方法观察时，特征不明显，判别难度大，棉团铁线莲和东北铁线莲的区分难度大，方法的专属性和耐用性均有待进一步提高。有学者采用近红外光谱[13]区分威灵仙和东北铁线莲，但近红外仪器价格昂贵，且仍旧无法解决3种基原的鉴别问题，尤其是棉团铁线莲和东北铁线莲的鉴别。本研究将在威灵仙现有的《药典》方法基础上，采用粉末显微和横切面显微相结合，以期建立1种简单快捷、特征直观的显微鉴别方法，进一步完善《药典》方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与材料

FA2004型电子天平（上海图新电子科技有限公司）;BM2000生物数码显微图像分析系统（合肥诺瑞科学仪器有限公司）;歌能G-100S型超声波清洗仪（深圳市歌能清洗设备有限公司）;JP-100A-2高速多功能粉碎机（上海市久品工贸有限公司）;40、60、80、100、125目标准检验筛（浙江省上虞市道墟张兴纱筛厂）;25.4×76.2 mm载/盖玻片（武汉致诚信达科技开发有限公司）;TS-DI10-L/H型实验室超纯水机（陶氏水处理设备工程有限公司）。

威灵仙药材购于安徽亳州药材市场和淮安市各大药房，共计8个产地，14个批次，具体信息见表1。各药材样品均保存于江苏省特色资源开发与药用重点实验室。无水乙醇（色谱纯，天津基准化学试剂有限公司）;氢氟酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）;藏红T（生物染色剂，国药集团化学试剂有限公司）;固绿FCF（生物染色剂，上海沃凯生物技术有限公司）;盐酸（分析纯，南京奥佳化工有限公司）;二甲苯（分析纯，上海沃凯生物技术有限公司）;中性树胶（国药集团化学试剂有限公司）;水合氯醛（分析纯，上海展云化工有限公司）。水为笔者所在实验室自制超纯水。

1.2 试验方法

1.2.1 横切面切片分别取14批威灵仙药材，选取根部大小适中者用15%氢氟酸进行软化24 h，用流水冲洗至中性，切成薄片，放至盛有蒸馏水的培养皿中;挑选切面完整透明且薄厚均匀的切片放入50%乙醇溶液中脱水5 min，用番红染液染色30 min，移入50%乙醇脱色5 min，进而转入含1.0～1.5 mmol/L盐酸的70%乙醇中脱色2～3 h;用固绿染液染色1～2 s，再用95%乙醇溶液冲洗掉多余染液，放入无水乙醇中脱色5 min;在二甲苯和无水乙醇溶液（体积比1 ∶ 1）中透化 5 min，在二甲苯中透化5 min，用中性樹胶制片，并在显微镜下观察、拍照并保存图像。

1.2.2 横切面切片条件考察

1.2.2.1 番红染液染色时间本研究分别考察番红染液染色时间对切片染色效果的影响，结果见表2。由此看出，番红染色的最佳时间为30 min，此条件下染色完成后的切片不同部位颜色区别明显，易观察。

1.2.2.2 固绿染液染色时间本研究考察固绿染液染色时间对切片染色效果的影响，结果见表3。由此看出，固绿染液染色的最佳时间为1～2 s，此条件下染色完成后的切片不同部位颜色区别明显，易观察。

1.2.2.3 番红染液脱色条件本研究考察了番红染液脱色时，70%乙醇中的盐酸浓度及脱色时间对切片脱色效果的影响。切片经50%乙醇脱色5 min后，再分别用含有不同浓度盐酸的70%乙醇脱色一定时间，观察脱色效果。由表4可知，切片脱色时的70%乙醇中盐酸浓度为1.0～1.5 mmol/L较适宜。

2 结果与分析

2.1 横切面切片显微特征分析

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