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液相色谱-串联质谱法测定果蔬中的涕灭威及其代谢物

范文

赵海涛王磊王帅刘会会戚继存王雅静张亮郑百芹刘洋

摘要 [目的]建立液相色谱-串联质谱法（LC/MS）测定果蔬（番茄、黄瓜、韭菜、马铃薯、西瓜、苹果和橙子）中涕灭威及其代谢物的分析方法。[方法]样品经组织捣碎，乙腈提取，经氨基柱和二氯甲烷+甲醇（95∶5）净化洗脱处理，2 mL甲醇定容，采用Phenomenex H18色谱柱分离。[结果]涕灭威及其代谢物在0.01和0.02 mg/kg 2个添加水平下回收率均为84.667%～104.333%，RSD均为0～5.37%，试验方法检出限为0.01 mg/kg，相关系数均大于0.999 3。[结论]该方法操作简便、快捷，安全性高，只通过一种检测方法便可同时测定果蔬中涕灭威及其代谢物的残留量，准确度和灵敏度高，定量下限低于或等于国家农药残留限量标准。

关键词液相色谱-串联质谱;涕灭威及其代谢物;果蔬

中图分类号 TS.207.5+3文献标识码 A文章编号 0517-6611（2021）02-0196-05

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.02.053

開放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Determination of Aldicarb and Its Metabolites in Fruits and Vegetables by Liquid ChromatographyTandem Mass Spectrometry

ZHAO Haitao1，2，3， WANG Lei1，2，3，WANG Shuai1，2，3 et al

（1.Tangshan Food and Drug Comprehensive Testing Center， Tangshan，Hebei 063000;2. Hebei Agricultural Products Quality and Safety Testing Innovation Center， Tangshan，Hebei 063000;3. Tangshan Institute of Industrial Technology for Functional Agricultural Products， Tangshan，Hebei 063000）

Abstract [Objective]To establish a method for the aldicarb and its metabolites detection of 7 vegetables and fruits （tomato， cucumber， leek， potato， watermelon， apple， and orange） by liquid chromatographytandem mass spectrometry. [Method]The samples were mashed， and then extracted with acetonitrile， the extraction was purified by the amino column and dichloromethane + methanol （95∶5）. After constant volume with 2 mL methanol， the target analytes were separated on a Phenomenex H18 column. [Result]The recovery rates of aldicarb and its metabolites were 84.667%-104.333%， RSD were 0-5.37% at two added levels of 0.01 and 0.02 mg/kg. The detection limit of the experimental method was 0.01 mg/kg. The correlation coefficients were all greater than 0.999 3. [Conclusion]The method is simple， fast and safe. It can simultaneously determine aldicarb and its metabolites in vegetables and fruits with only one detection method. The accuracy and sensitivity are high， and the lower limit of quantification is less than or equal to national pesticide residue limit standards.

Key words Liquid chromatographytandem mass spectrometry;Aldicarb and its metabolites;Fruits and vegetables

涕灭威（C7H14N2O2S）具有触杀、胃毒和内吸作用，能被植物根系吸收，传导到植物地上部各组织器官，速效性好，持效期长。然而农药检测已经不仅仅局限于农药本体，其代谢物产生的毒性作用逐渐成为热点[1-8]。通常可通过超高效液相色谱串联质谱仪检测蔬菜中涕灭威及其代谢物[9]，也可通过固相萃取液相色谱串联质谱法测定生姜中涕灭威及其代谢物[10]。

《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》中涉及到涕灭威及其代谢物的测定方法是将试样中氨基甲酸酯类农药及其代谢物用乙腈提取，经过滤、浓缩后，采用固相萃取技术分离、净化、浓缩后，使用带荧光检测器和柱后衍生系统的高效液相色谱进行检测，保留时间定性，外标法定量[11]。该方法操作步骤繁琐、耗时耗力。《水果和蔬菜中450种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-串联质谱法》中涕灭威砜测定方法是将试样用乙腈匀浆提取，盐析离心，Sep-Pak Vac柱净化，用乙腈+甲苯（3+1）洗脱农药及相关化学品，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量[12]。上述方法虽能准确地测出蔬菜、水果中残留的涕灭威砜，但未提及本体。

近年来随着质谱仪器的发展，液相色谱-串联质谱法能够对复杂体系或混合物中多种物质进行鉴别和测定，被广泛应用于农药检测中，易推广。陈红平等[13]利用超高压液相色谱-串联质谱法对茶叶中包括涕灭威及其代谢物在内的10种农药进行了检测，该方法在7.5、15.0、30.0 μg/kg添加水平上回收率达到72.2%～92.5%，RSD≤9.2%。赵肖华等[14]利用液相色谱-串联质谱法测定蔬菜水果中5种阿维菌素类药物的残留量，检测结果稳定可靠，可以满足实际需要。梅丽芸等[15]利用超高效液相色谱-串联质谱法测定土壤和甘蓝中的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和虱螨脲，经试验测定回收率在74.63%～106.60%，RSD为0.44%～8.56%，该方法灵敏度高、准确性好，能快速检测土壤和甘蓝中的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和虱螨脲。

该研究通过优化前处理操作，利用液相色谱-串联质谱法对蔬菜、水果中涕灭威及其代谢物残留量進行测定，达到用同一种方法检测本体和代谢物的目的。

1 材料与方法

1.1 仪器

LCMS-8040液相色谱串联质谱，配有电喷雾离子源（ESI），日本岛津公司;氨基固相萃取柱，北京迪马科技有限公司;T25均质器，IKA公司;TTL-DC Ⅱ型氮吹仪，北京同泰联科技发展有限公司;SZ13022-NY 0.2 μm有机滤膜，天津市领航实验设备股份有限公司;GM-K06格明加热破壁料理机，格明电器实业有限公司;T-200电子天平，常熟双杰仪器制造厂;PDI超纯水器，上海和泰仪器有限公司。

1.2 试材

标准品涕灭威、涕灭威亚砜、涕灭威砜购于农业农村部环境保护科研监测所;乙腈、二氯甲烷、甲醇均为色谱纯，购于国药集团化学试剂公司;氯化钠为分析纯，购于MREDA公司;0.05%甲酸溶液、5 mmol/L甲酸铵溶液，购于国药集团化学试剂公司;试验用水为蒸馏水（屈臣氏）。果蔬样品：番茄、黄瓜、韭菜、马铃薯、西瓜、苹果和橙子，购于唐山市批发市场。

1.3 试验方法

1.3.1 标准溶液的配制。

1.3.1.1

混合标准储备液。分别吸取浓度为1 000 μg/mL的涕灭威、涕灭威砜和涕灭威亚砜标准品100 μL，用甲醇定容至10 mL，得到浓度为10 μg/mL的混合标准溶液，于4 ℃冰箱内保存。

1.3.1.2

混合标准工作溶液。用甲醇逐级稀释成浓度分别为0.01、0.02、0.04、0.08、0.12、0.16、0.32 μg/mL的混合标准溶液，于4 ℃冰箱内保存。

1.3.2 标准曲线的绘制。

每个浓度的混合标准溶液均进样2 μL，获得相应浓度（x，mg/L）对应的色谱峰面积（y），将这些数据进行统计处理，可获得各供试农药的标准曲线及其线性响应情况和相关系数。

1.3.3 精密度试验。

取空白蔬菜、水果样品，添加农药混合标准溶液，加标量0.01和0.02 mg/kg，每个浓度做3个平行，根据精密度公式

RSD=sx×100%=ni=1（xi-）2n-1x×100%

可计算样品精密度。

1.3.4 检出限的测定。以基线噪声（S = 3N）确定方法的检出限（LOD）。

1.3.5

回收率试验。在样品中分别添加涕灭威及其代谢物，添加浓度分别为0.01和0.02 mg/kg，每个添加水平重复3次。根据农药标准曲线和样品回收率计算公式：回收率=（回收浓度/添加回收浓度）×100%，进而得出平均回收率和相对标准偏差（RSD）。

1.3.6 样品前处理。

样品取可食部分，经切割后采用四分法取样放入搅拌机内打碎，用天平准确称取25.0 g样品，加入乙腈50 mL，放于高速匀浆机内，匀浆提取2 min，转入到100 mL 的装有6.0 g氯化钠的具塞量筒中（氯化钠量以足量饱和即可），剧烈振荡约30 s，在室温下静置30 min，使乙腈相和水相分层。

净化：从乙腈层中吸取10.0 mL溶液放入10 mL试管中，在80 ℃的氮吹仪上缓慢吹至近干，加2 mL二氯甲烷+甲醇（95+5）定容，在漩涡振荡仪上振荡30 s，取氨基固相萃取柱，用3 mL淋洗液淋洗柱子，加2 mL样品于柱内，用12 mL二氯甲烷+甲醇（95+5）分3次洗脱试管，收集洗液，在50 ℃的氮吹仪上缓慢吹到近干，用2 mL甲醇定容，定容后液体过0.22 μm 的有机滤膜，装入进样小瓶待测。

1.4 色谱条件

1.4.1 色谱条件。

色谱柱：Phenomenex H18（50 mm×3.00 mm，2.60 μm）;柱温：40 ℃;流速：0.40 mL/min;进样量：2 μL;流动相：甲醇、5 mmol甲酸铵+0.05%甲酸水溶液;洗脱程序：梯度洗脱见表1。

1.4.2 质谱条件。

电喷雾离子源（ESI）;雾化气流量3.00 L/min;干燥气流量15.00 L/min;DL管温度为250 ℃;涕灭威采用正电离模式，其他质谱条件见表2。

2 结果与分析

2.1 液相色谱条件的优化

试验对比了溶剂及流动相的情况，分别是流动相为甲醇时，溶剂为甲醇、乙腈;流动相为乙腈时，溶剂为甲醇、乙腈。结果见图1～4。对比图1、2可知，当流动相为甲醇、溶剂为甲醇时涕灭威及其代谢物的峰形对称好、基线平稳，响应值高。对比图3、4可知，当流动相为乙腈时，涕灭威及其代谢物的峰形对称性较差、基线稳定性差，响应值较流动相为甲醇时低。因此，流动相为甲醇时，涕灭威及其代谢物的峰形对称好、基线平稳，响应值高。故该试验确定用甲醇为流动相。

2.2 质谱条件的优化

由图5可知，涕灭威及其代谢物响应值较高且峰形很好，故未调整质谱参数。

2.3 方法的线性关系、回收率、精密度及检出限

2.3.1 方法的线性关系。

从图6可以看出，在0.01、0.02、0.04、0.08、0.12、0.16和0.32 μg/mL 7个浓度梯度下，涕灭威标准曲线为Y=1.413 82E+006X-1 022.43（R2=0.999 364 4），涕灭威砜标准曲线为Y=2.600 02E+007X+31 964.7（R2=0.999 585 6），涕灭威亚砜标准曲线为Y=737 606X+1 629.88（R2=0.999 633 9），可见在质量浓度0.01～0.32 μg/mL各组分线性关系较好。

2.3.2 样品回收率、精密度和检出限。

取空白蔬菜、水果样品，添加农药混合标准溶液，加标量0.01和0.02 mg/kg，每个浓度重复3次，根据农药标准曲线和样品回收率计算公式，进而得出平均回收率和RSD，结果见表3、4。从表3、4可以看出，涕灭威及其代谢物在样品中回收率均在84.667%～104.333%，RSD均在0～5.37%。

2.4 方法应用

2017—2019年从市场采集果蔬样品283份进行了涕灭威及其代谢物的添加回收试验，结果发现RSD值均小于10%，回收率均在70%～120%，符合检测要求。

3 结论

该研究建立了液相色谱-串联质谱法测定蔬菜、水果中涕灭威及其代谢物的方法。该方法样品前处理操作简便、快速，提高了检测工作的效率，保证了定性和定量结果的准确性。结果经多次验证，方法精密度、准确度高、线性关系好，定量下限低于或等于国家农药残留限量标准，能够满足国家对蔬菜、水果中涕灭威及其代谢物的检测要求。

参考文献

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