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甘草-黄芪组方中美白成分的提取及活性检测

范文

权彦马天柱王枭洋

摘? ? ? 要：利用超声提取技术提取甘草中有效美白成分甘草酸和甘草总黄酮、黄芪中有效美白成分黄芪总黄酮和黄芪总皂苷，将4种提取物按比例进行配伍，发现（甘草酸∶甘草总黄酮（8∶1））∶（黄芪总黄酮配伍黄芪总皂苷（4∶1））为1∶2时，配伍溶液有较高的清除羟自由基能力，同时具有显著的防晒效果;基于此，与甘油、去离子水等配制成天然、保湿、美白润肤水。

关? 键? 词：超声提取;甘草;黄芪;羟自由基;配伍

中图分类号：TQ 895? ? ? ?文献标识码： A? ? ? ?文章编号： 1671-0460（2019）09-1945-04

Abstract： The effective whitening ingredients including glycyrrhizic acid and total flavonoids were extracted from Radix Glycyrrhizae，and astragalus total flavonoids and astragalus total saponins were extracted from Astragalus Radix Astragalus by ultrasonic extraction technology. The 4 kinds of extracts were mixed in proportion.When （glycyrrhizic acid∶glycyrrhizic total flavonoids =8∶1） ∶（astragalus total flavonoids∶astragalus total saponins =4∶1） was 1∶2， prepared solution had a higher ability to scavenge hydroxyl radicals and had a significant sunscreen effect.So the prepared solution can be used to compound natural moisturizing and whitening lotion by mixing glycerine and deionized water.

Key words： Ultrasonic extraction;Licorice;Astragalus membranaceus;Hydroxyl radical;Compatibility

随着生活水平的提高，人民追求美的方式更加多样化，对天然药物开发的美白护肤品关注度也更高[1]。目前新一代美白护肤品更注重将多种美白活性物质复配以产生增效作用[2]。而从中草药中提取的美白成分因其对皮肤温和、刺激性小、药性稳定、安全性高、药力持久等特点，逐渐成为化妆品行业的热点[3]。本次实验拟采用甘草与黄芪组方，制备具有美白保湿于一体及抗氧化作用等多效合一的美白保湿水。

1? 实验部分

1.1? 实验仪器

旋转蒸发仪（西安予辉）、紫外可见分光光度计（上海天美uv1102）、高功率数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司KQ-400KDE型）。

1.2? 實验试剂及药材

乙醇（95%）、甲醇、乙酸乙酯、冰乙酸、甲酸、氨水均购于天津市天力化学试剂有限公司，硫酸购于洛阳昊华化学试剂有限公司，水杨酸、硫酸亚铁、过氧化氢购于天津市科密欧化学试剂有限公司，试剂均为分析纯。

甘草酸标准品（批号：P01J8F38991）、黄芪皂苷标准品（批号：J20F7T9819）均购于上海源叶生物科技有限公司。乙醇（95%）、甲醇、乙酸乙酯，水杨酸、硫酸亚铁、过氧化氢购于天津市科密欧化学试剂有限公司，试剂均为分析纯。

2? 实验方法

2.1? 甘草中有效成分的提取

2.1.1? 甘草酸的提取

通过查阅相关文献，赵茜[4]等在超声强化甘草酸的提取根据实验设备进行方案改进，最终确定甘草酸的提取方法为：过3号筛的甘草粗粉用0.5%氨水（固液比1∶20）提取1 h，过滤，重复1次，合并滤液;加入95%乙醇使含醇量至75%，过夜沉淀，过滤，滤液在50～60 ℃浓缩至五分之一;浓缩液用3.5 moL/l浓硫酸调pH至2～3，沉淀离心，50～60 ℃下干燥，得到甘草酸粗品。

2.1.2? 甘草总黄酮的提取[5]

甘草粉碎过20目筛，分别加入10倍、8倍量50%乙醇，400 W超声提取1 h，过滤，合并滤液，沉淀过夜;将提取液减压浓缩至原来的三分之一，离心，合并上清液，调pH至5，上样至活化过的AB-8大孔树脂柱中，分别用水、60%乙醇洗脱，收集60%乙醇洗脱液，回收乙醇后得到甘草总黄酮。

2.2? 甘草中有效成分的鉴定[6]

2.2.1? 对照品溶液的配置

精密称取干燥恒重的甘草酸标准品14 mg，置于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，使成1.4 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2? 供试品溶液的配置

用10%乙醇溶解定量2.1.1提取的甘草酸粗品粉末，使成2.0 mg/mL的溶液，作为供试品溶液。

2.2.3? 薄层鉴定

取上述溶液各适量点在硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：甲酸：冰醋酸：水（15∶1∶1∶2）为展开剂，展开，取出晾干，喷10%硫酸-乙醇显色，在105 ℃烘至斑点清晰。供试品与对照品在同一位置有相同颜色的斑点见图1。

2.2.4? 甘草黄酮的化学鉴定

盐酸-镁粉反应：提取的甘草总黄酮加适量甲醇溶解，制成供试品溶液，取供试品溶液5 mL，加入少许镁粉，再滴加几滴浓盐酸，振摇，溶液显红色，表明含有黄酮类物质。

2.3? 黄芪中有效成分的提取

2.3.1? 黄芪总皂苷的提取[7]

黄芪粗粉加入15倍量75%乙醇，超声提取40 min，滤过除去沉淀，滤液减压浓缩至0.5 g/mL，浓缩液上处理好的AB-8大孔树脂柱，依次用0.2%氢氧化钠、40%乙醇、95%乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱液，低温浓缩至干加水复溶离心，取沉淀与60 ℃干燥3 h至恒重，得黄芪总皂苷。

2.3.2? 黄芪总黄酮的提取[8]

黄芪粉碎过三号筛加入10倍量75%乙醇，400 W超声提取30 min，过滤，重复1次，合并滤液，过夜沉淀，抽滤;滤液减压浓缩至浸膏状，干燥粉碎后得到黄芪总黄酮粗粉。

2.4? 黄芪中有效成分的鉴定

2.4.1? 对照品溶液的配置

精密称取干燥恒重的黄芪总皂苷标准品10 mg，置于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，使成1.0 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。

2.4.2? 供试品溶液的配置

用甲醇溶解定量提取的黄芪总皂苷，使成1.8 mg/mL的溶液，作为供试品溶液。

2.4.3? 薄层鉴定

取上述溶液适量点在硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：甲酸：冰醋酸：水（15∶1∶1∶2）为展开剂，展开，取出晾干，喷10%硫酸-乙醇显色，在105 ℃烘至斑点清晰。供试品与对照品在同一位置有相同颜色的斑点见图2。

2.4.4? 黄芪黄酮的化学鉴定

提取的黄芪总黄酮加适量甲醇溶解，制成供试品溶液。进行盐酸-镁粉反应，反映后溶液显红色，证明含有黄酮类成分。

2.5? 清除羟自由基能力测定[9]

利用fenton反应，测定甘草酸清除羟自由基作用。即在试管中加入一定浓度的待测液，按顺序加入0.3 ml 6 mmol/mL FeSO4、1.5 mL 6 mmol/mL水杨酸、蒸馏水至4.8 mL，摇匀，最后加入0.3 mL 6 mmol/mL H2O2，静置10 min后与510 nm处测定吸光度A。

根据公式计算清除率：

清除率=（A0-A1+A2）/A0

式中：A0——未加提取液时溶液的吸光度;

A1——加提取液时溶液的吸光度;

A2——提取液的吸光度。

将提取的有效成分粗品溶于50%乙醇中，甘草酸分别制成0.15、0.175、0.2、0.225、0.25 mg/mL溶液;甘草总黄酮制成0.004、0.008、0.01、0.04、0.08 mg/mL的溶液;黄芪总皂苷制成0.60、0.75、1.25、1.50、1.75 mg/mL的溶液，黄芪总黄酮制成0.6、0.75、1.25、1.5、1.75 mg/mL的溶液，按上述方法测定其清除率，结果见图3-图9。

当甘草酸浓度为0.225 mg/mL时清除羟自由基作用最显著见图3。

当甘草总黄酮浓度为0.04 mg/ml时清除羟自由基作用最显著见图4。

当黄芪总黄酮浓度为1.5 mg/mL时清除羟自由基作用最显著见图5。

当黄芪总皂苷浓度为2.5 mg/mL时清除羟自由基作用最显著见图6。

2.6? 有效成分最佳配伍比例

将甘草、黄芪中提取的有效成分按比例配伍，按清除羟自由基能力的强弱找出最佳配伍比例（图7-9）。

2.7? 防晒效果测定[10]

参照文献葛仙米活性成分的提取及护肤性能的研究，通过测定溶液在波长320～400 nm的透光率，计算该溶液对紫外线的吸收率。吸收率在80%以上时具有防晒效果，吸收率在90%以上时防晒效果显著。

3? 实验结果

3.1? 各提取成分最佳浓度确定

根据各有效成分清除羟自由基能力，优选出最佳浓度。比例为甘草酸∶甘草总皂苷为8∶1，黄芪总黄酮∶黄芪总皂苷为4∶1。甘草∶黄芪为1∶2时甘草黄芪组方的有效成分清除羟自由基能力最強。

3.2? 各成分及配伍溶液的防晒效果验证

甘草、黄芪中有效成分及其配伍溶液其紫外吸收率结果显示在320～400 nm区间中，各组分溶液均有不同程度的防晒效果，且配伍溶液的紫外吸收率均高于90%，即甘草与黄酮配伍有显著的防晒效果。

3.3? 保湿水保湿能力

按比例配伍的提取液、甘油、去离子水配伍的保湿水的保湿能力如图10所示。

结果显示保湿率：甘油>保湿水>去离子水，保湿水有较好保湿性能。

4? 讨论

本实验提示甘草、黄芪中的有效成分均有抗氧化性、抗过敏、防止皮肤老化且安全无毒，可美容护肤，二者配伍使用，抗氧化作用增强，防晒效果显著。

甘草、黄芪提取物配伍甘油、去离子水制成的保湿水，pH为5.6，在皮肤可接受的范围内，不会伤害皮肤。保留了甘油良好的保湿能力，加上去离子水，分子量小易于皮肤吸收，发挥出良好的保湿能力。加之提取物有一定的防晒效果，制得的保湿水能集美白保湿于一体。但保湿水的配方相对简单，希望后面的研究能改进配伍，找到更合适的辅料制出更稳定安全易吸收的美白制剂。

参考文献

[1]袁阳明，黎静雯，宋凤兰，邓金生，潘育方.复方甘草美白保湿霜的制备[J].广州化工，2017，45（12）：71-74.

[2]王雪梅，沈雪梅，吴汉平，郭姝宜，朱玉洁，张斯琪.中草药多效美白润肤霜的制备及性能研究[J].香料香精化妆品，2016（02）：52-58.

[3]肖昆. 中草药化妆品时代的来临[J]. 日用化学品科学， 2008（05）： 10-12.

[4]赵茜，李秉滔，刘欣，李雁.超声强化甘草酸提取的研究[J].食品科技，2000（05）：38-39.

[5]崔永明. 甘草黄酮的分离鉴定、药效及其指纹图谱研究[D].华中科技大学， 2008.

[6]陈美红，陈建华，龙凤来.八珍片的甘草薄层鉴别方法对比研究[J].产业与科技论坛，2017，16 （24）：72-73.

[7]叶飞.黄芪总皂苷提取方法研究进展探析[J].中国石油和化工标准与质量， 2017， 37 （18）：100-101.

[8] 孔繁晟，贲永光，孙爱群，严春艳.超声法与连续回流法提取黄芪总黄酮的工艺对比研究[J].中国药房，2010，21（19）：1752-1754.

[9]张圣燕.响应面法优化微波提取冬枣叶总黄酮及其抗氧化活性[J].农业工程，2015，5（05）：65-71.

[10]权彦，何建军，刘靖丽，孟庆华，宋逍.水提醇沉法提取黄芪中黄芪多糖的工艺优化及含量测定[J].当代化工，2018，47（07）：1374-1376.

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