抑制miRNA-141能够促进人牙周膜中成纤维细胞的增殖

    李小莉

    

    【摘要】目的 探讨miRNA-141对人牙周膜中成纤维细胞（hPDLF）的作用。方法 抑制miRNA-141后，使用qRT-PCR和Western blot检测hPDLF的增殖能力。结果 miRNA-141在牙周炎hPDLF中显著低表达;使用miRNA-141 inhibitor抑制miRNA-141表达后，能够显著增加hPDLF中CyclinD1、C-myc蛋白表达，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 抑制miRNA-141表达能够增加hPDLF的增殖。

    【关键词】miRNA-141;hPDLF;增殖

    【中图分类号】R781.4 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095.6681.2019.34..01

    牙周病主要是以牙周组织的损坏为特征的常见病，而人牙周膜成纤维细胞（hPDLF）是牙周组织的主要细胞。增加hPDLF的增殖能够促进牙周组织的再生，从而增加压根与牙槽骨的连接，研究发现微小RNA（microRNA， miRNA）与hPDLF的增殖有着密切的关系，马静雯等[1]发现miRNA-145可能通过下调ROCK1的表达抑制hPDLF的迁移。miRNA是一种单链核苷酸，能够与特定基因mRNA的3-UTR结合，从而调控细胞的生理功能。Mak CS [2]发现miR-141/KLF12可增强无神经耐药性。但是miRNA-141在hPDLF中的作用还不清楚。本文主要通过Western blot等技术研究miRNA-141对hPDLF增殖的影响。

    1 方法

    1.1 hPDLF的培养

    选择临床9～30岁健康人和牙周炎患者恒牙。取牙膜组织并分离成小块，于37℃、5% CO2培养箱中培养。

    1.2 实时定量PCR （qRT-PCR）检测细胞中miRNA-141的表达

    使用TRIzol法提取总RNA，并使用试剂盒进行qRT-PCR检测。

    1.3 Western blot检测CyclinD1和c-myc蛋白表达

    收集细胞，裂解、变性，并电泳、转膜，与不同抗体孵育过夜后，孵育二抗1 h后，置于成像系统中拍照。

    1.4 统计学方法

    使用SPSS 16.0统计软件进行分析，实验数据均以x±s表示，两组之间比较采用t检验，以P<0. 05为差异有统计学意义

    2 结 果

    本课题首先使用qRT-PCR检测miRNA-141的表达，如图A所示，牙周炎患者的hPDLF中miRNA-141显著高于健康组，且差异有显著意义，差异有统计学意义（P<0.05）。如图B所示， miRNA-141 inhibitor能够显著下调miRNA-141的表达。如图C所示，hPDLF中癌基因Cyclin D1、C-myc表达显著升高，差异有统计学意义（P<0.05）。

    3 讨 论

    hPDLF是牙周膜组织中的主要效应细胞，能够通过自身的增殖降低牙周组织的坏死，还可以分化成成骨细胞。因此，如何增加hPDLF的增殖是治疗和改善牙周病的关键。本研究发现，miRNA-141在牙周炎hPDLF中高表达。使用miRNA-141 inhibitor抑制miRNA-141表达后能够显著增加细胞增殖相关蛋白CyclinD1和C-myc的表达。周茜雯等[4]研究发现，箭根酮能够明显抑制LPS刺激的hPDLF增殖。综上所述，本研究发现抑制miRNA-141表达可以增加hPDLF的增殖，从而改善牙周病组织微环境。这说明miR-141可以作为治疗的靶点之一。

    参考文献

    [1] 马静雯，宋 萌，潘劲松，等.miRNA-145通过下调ROCK1的表达抑制人牙周膜成纤维细胞的迁移[J].现代生物医学进展，2018，18（04）：606-609.

    [2] Mak CS，Yung MM，Hui LM， et al.MicroRNA-141 enhances anoikis resistance in metastatic progression of ovarian cancer through targeting KLF12/Sp1/survivin axis [J].Mol Cancer，2017，16（1）：11-13.

    [3] 周茜雯，曾 豪，张嘉昕，等.箭根酮对LPS刺激牙周膜成纤维细胞增殖能力的影響[J].口腔医学研究，2018，34（06）：653-656.

    本文编辑：赵小龙