高效液相色谱法测定芦丁含量

材料与方法
仪器
（1）日本岛津LC-20AT高效液相色谱仪（带紫外检测器）。
（2）AS-A型系列超声波清洗器（天津奥特赛恩斯化器有限公司）。
（3）超纯水机（台湾艾柯仪器公司）。
试剂
（1）甲醇（色谱纯）。
（2）甲醇（分析纯）。
（3）磷酸（优级纯）。
（4）芦丁（中药化学对照品），四川省维克奇生物科技有限公司生产。
色谱条件
色谱柱：C18（4.6x250mm，5um）不锈钢柱，流动相：甲醇：0.5%磷酸水溶液=85：15，流速1.0ml/min，柱压20Mpa，柱温40℃，检测波长390nm，进样体积10ul，采集时间10min。
检测部分
标准溶液配制。直接用分析纯甲醇溶解20mg纯度为98%的芦丁中药化学对照品，转移定容于10ml容量瓶中，此标液浓度为1.96mg/ml。用移液管分别吸取此标准溶液0.20ml、0.40ml、1.00ml、2.00ml、3.00ml于10ml容量瓶中，用分析纯甲醇定容至10ml，配制成浓度分别为0.0392mg/ml、0.0784mg/ml、0.196mg、ml、0.392mg/ml、0.588mg/ml五个级别的标准使用液，经0.45um有机滤膜过滤后上机检测，绘制标准曲线。
样品测定。精确称取0.01—0.09克蘆丁提取物于50ml比色管中，用20ml分析纯甲醇溶解，放置于超声波清洗器中超声提取20分钟，然后用分析纯甲醇定容至50ml，静置，取上清液经0.45um有机滤膜过滤后上机检测，与标准曲线比较定量。待测样液芦丁浓度应在标准曲线线性范围内，超出线性范围则应稀释后再进样分析。
结果计算
计算公式：X=
式中：
X—试样中芦丁的含量，单位为克每百克（g/100g）；
C—由标准曲线得到的试样中芦丁的浓度，单位为毫克每克（mg/g）；
V—试样溶液的体积，单位为毫升（ml）；
m—试样质量，单位为克（g）。
结果与讨论
（1）称取样品应根据芦丁提取物的芦丁含量来计算取样量，确保试液中芦丁浓度保持在标准曲线线性范围内，若检测后超出线性范围则应稀释后再进样分析。
（2）称取样品后放置于超声波清洗器中，超声处理时间应根据溶解程度来确定，全部溶解就行了，若有难以溶解的杂质可适当延长超声处理时间。
（3）精密度实验：取2份样品，在相同条件下平行测定6次，测得RSD，结果见表1。
（4）用该方法进行高低2个浓度的加标回收实验，结果见表2.
以上文章内容针对芦丁防治高血压病的辅助治疗和作用，做出了详细分析说明，着重在检测标准溶液配制方面进行了实例示范。结论确保试液中芦丁浓度保持在标准曲线线性范围。可供本专业人士参考。
作者简介：
翟崇华（1967-），女，工学士，高级工程师，主要从事食品检验工作。